معلومة

هل يمكن استخدام تقارير GFP لتتبع توطين الببتيدات في ER و Golgi وغشاء البلازما؟

هل يمكن استخدام تقارير GFP لتتبع توطين الببتيدات في ER و Golgi وغشاء البلازما؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

لنفترض أنني أريد دراسة تهريب الببتيد في جميع أنحاء ER و Golgi وغشاء البلازما. كانت الفكرة التي كانت لدي هي وضع علامة على بروتين متكامل أو غشاء بلازما مع GFP واستخدام مجهر الخلية الحية المتسلسل الزمني لتتبعه من خلال المسار الإفرازي.

ومع ذلك ، أشعر بالقلق من أنه بحلول الوقت الذي يتم فيه إعداد كل شيء ، ستكون الخلية في حالة مستقرة ، مما يعني أن إشارة GFP ستكون موجودة طوال المسار الإفرازي ، مما يمنعني من القيام بهذا التتبع.

كيف يمكنني التغلب على هذا ، دون تغيير التكنولوجيا الأساسية (تقارير GFP)؟


من الناحية التاريخية ، كان استخدام VSVG (بروتين التهاب الفم الحويصلي الفيروسي G) المسمى بـ GFP بالفعل طريقة عملية لتحديد المسار الإفرازي. (@ تعليق ممتاز)

ومع ذلك ، أشعر بالقلق من أنه بحلول الوقت الذي يتم فيه إعداد كل شيء ، ستكون الخلية في حالة مستقرة ، مما يعني أن إشارة GFP ستكون موجودة طوال المسار الإفرازي ، مما يمنعني من القيام بهذا التتبع.

ثانية الطفرات في المكورات العنقودية: تم تحديد العديد من المسارات البيوكيميائية في البداية بسبب طفرة معينة في عملية التوليف. أذكر تجربة Beadle و Tatum والمنطق الذي استخدموه لتوضيح وجود 3 إنزيمات مستخدمة في استقلاب الأرجينين. (الصورة مأخوذة من https://www.chegg.com/homework-help/questions-and-answers/following-experiments-beadle-tatum-searching-mutations-disrupt-arginine-biosynthesis-pathw-q41797559)

تم اتباع نهج مماثل في ذلك الوقت لتحديد الأجزاء المميزة للمسار الإفرازي. تم تحديد خمس طفرات مختلفة في S.cerevisiae من A إلى E. (الصورة مأخوذة من https://slideplayer.com/slide/4382105/)

على سبيل المثال ، حتى إذا وصلت الفئة B المتغيرة إلى الحالة المستقرة / المتوازنة ، فإن حويصلات النقل ، و Golgi ، ولن يُظهر الباقي نشاط التألق (سمة VSVG-GFP) لأن جميع البروتينات قد تراكمت في الخطوة السابقة ( أي في مهدها من Rough ER)

قراءات أخرى:

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/2188733/

https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/0092867481900647

MCB لوديش وآخرون الطبعة الثامنة الفصل 14 القسم 14.1

https://www.nature.com/articles/35073068


شاهد الفيديو: من اسرار كشف التستر التجاري تكشف لاول مرة (ديسمبر 2022).