معلومة

هل يمكن استزراع المتصورة المنجلية وطفيليات الملاريا الأخرى وهندستها وراثيا؟

هل يمكن استزراع المتصورة المنجلية وطفيليات الملاريا الأخرى وهندستها وراثيا؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أنا لست متخصصًا في علم الطفيليات ، وكنت أتساءل عن الحالة الحالية لأبحاث الملاريا. على سبيل المثال ، هل من الممكن استزراع P. المنجلية؟ هل توجد تقنيات للمعالجة الجينية أو التعديل أو تعداء (مشابهة لـ في المختبر زراعة الخلايا) ؟ هل هناك قيود رئيسية على دراسة هذه الطفيليات في الثقافة؟


نعم ، من الممكن استنبات البلازموديا لكنها لا تنمو في وسط بسيط. عادة ما يتم استخدام RPMI مع المصل وكريات الدم الحمراء لزراعة البلازموديا خارج الجسم الحي. تناقش هذه المقالة القضايا المتعلقة بثقافة البلازموديال بالتفصيل. يقول المؤلفون أنه في بعض الأحيان يتم فقدان مرحلة نمو معينة (خاصة الخلايا المشيمية) في الزراعة المطولة. في نفس الورقة نوقش أن البلازموديا الخارجية (مرحلة الكبد) يمكن أن تنمو على خطوط خلايا الورم الكبدي المستنبت.

توجد أيضًا عدة طرق تعداء. ومع ذلك ، فإن الزراعة ليست شرطًا إلزاميًا للترنسفكأيشن. تعمل الطرق المعتادة مثل التثقيب الكهربائي لمجموعة واسعة من أنواع الخلايا (أصبح التثقيب الكهربائي في الجسم الحي شائعًا أيضًا). يمكنك الرجوع إلى هذه المقالة للحصول على ملخص حول طرق تعداء مختلفة للبلازموديا.

يتمثل أحد القيود الرئيسية ، في رأيي ، في أنه قد لا يتم إعادة إنتاج مراحل الحياة المختلفة في ثقافة واحدة (كما ترى أن كل مرحلة تزدهر في نوع مختلف تمامًا من البيئة).


المتصورة المنجلية بروتين غشاء كرات الدم الحمراء 1

المتصورة المنجلية بروتين غشاء كرات الدم الحمراء 1 (PfEMP1) هي عائلة من البروتينات الموجودة على سطح غشاء خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء أو كريات الدم الحمراء) المصابة بطفيلي الملاريا المتصورة المنجلية. يتم تصنيع PfEMP1 خلال مرحلة دم الطفيل (فصام كرات الدم الحمراء) داخل كرات الدم الحمراء ، والتي تظهر خلالها الأعراض السريرية للملاريا المنجلية. يعمل كمستضد وبروتين الالتصاق ، ويُعتقد أنه يلعب دورًا رئيسيًا في المستوى العالي من الفوعة المرتبط بـ المتصورة المنجلية. تم اكتشافه في عام 1984 عندما تم الإبلاغ عن أن كرات الدم الحمراء المصابة تحتوي على بروتينات غشاء خلوي كبيرة الحجم بشكل غير عادي ، وأن هذه البروتينات لها خصائص ارتباط بالأجسام المضادة (مستضد). بروتين بعيد المنال ، تم الكشف عن تركيبته الكيميائية وخصائصه الجزيئية فقط بعد عقد من الزمان ، في عام 1995. وقد ثبت الآن أنه لا توجد عائلة واحدة من بروتينات PfEMP1 ، منظمة وراثيًا (مشفرة) بواسطة مجموعة من حوالي 60 جينًا تسمى فار. كل المتصورة المنجلية قادر على تشغيل وإيقاف محدد فار الجينات لإنتاج بروتين مختلف وظيفيًا ، وبالتالي التهرب من الجهاز المناعي للمضيف. تلتصق كرات الدم الحمراء التي تحمل PfEMP1 على سطحها بالخلايا البطانية ، مما يسهل مزيدًا من الارتباط مع كرات الدم الحمراء غير المصابة (من خلال عمليات العزل والورود) ، مما يساعد الطفيل في النهاية على الانتشار إلى كرات الدم الحمراء الأخرى بالإضافة إلى إحداث الأعراض المميتة لـ المتصورة المنجلية ملاريا.


مراجعة المادة

يعتبر التحول المستمر في المرحلة والتغيرات السريعة في ذخيرة المستضدات استجابةً للمناعة المكتسبة من السمات المميزة لمسببات الأمراض حقيقية النواة المعقدة ، بما في ذلك المتصورة الأنواع ، العوامل المسببة للملاريا. القضاء الفعال على المتصورة تعد مراحل الكبد قبل الإصابة بالدم إحدى أكثر استراتيجيات لقاح الملاريا الواعدة. هنا ، نصف الطفيليات المختلفة التي تم القبض عليها وراثيًا (GAPs) والتي تم هندستها فيها المتصورة البرغي ، P. yoelii و المتصورة المنجلية ومقارنة إمكانات لقاحهم. إن الفهم الأفضل للآليات المناعية للقاحات الأولية والمعززة بواسطة sporozoites الموقوفة والاستراتيجيات التجريبية لتعزيز فعالية اللقاح من خلال مزيد من هندسة GAPs الموجودة في شكل أكثر مناعة يبشر بالتحسينات المستمرة للقاحات المستندة إلى GAP. من العقبات الحاسمة التي تواجه اللقاحات التي تؤدي إلى حماية طويلة الأمد ضد الملاريا ، مثل GAPs ، السلامة والفعالية في الفئات الضعيفة من السكان. يجب أن تركز أبحاث اللقاحات على حلول لتحويل الملاريا إلى مرض يمكن الوقاية منه باللقاحات ، مما سيوفر مسارًا جديدًا مثيرًا للسيطرة على الملاريا.


نتائج

يستحث علاج DHA استجابة ER للضغط

لقد أبلغنا سابقًا أن الحلقات والجوائز المبكرة تظهر تأخرًا في النمو بعد التعرض لنبضات قصيرة جدًا (شبه مميتة) من DHA 13. اقترحت هذه النتيجة أن DHA قد تبدأ استجابة الإجهاد ، لذلك قمنا بفحص السمات المميزة لاستجابة الإجهاد ER و eIF2α فسفرة والتوقف الترجمي. أخضعنا حساسية ART (ك 13 wildtype ، خط ثلاثي الأبعاد 7) trophozoites للتعرض النبضي لـ DHA (60-90 دقيقة) ، وهي مدة تعرض مصممة لتعكس القصير (

1 ح) نصف عمر في الجسم الحي لـ DHA 14. وجدنا أن eIF2α يتم فسفرته بطريقة تعتمد على التركيز عند التعرض لـ DHA (الشكل 1 أ). ولوحظ استجابة مماثلة في منتصف الحلقة (الشكل التكميلي 1 أ). مستوى الفسفرة مشابه للمستوى الذي لوحظ مع المحفز المعروف لإجهاد ER ، ديثيوثريتول (DTT الشكل 1 أ). على النقيض من ذلك ، فإن التعرض لـ 1 ميكرومتر من الكلوروكين (60 دقيقة) ، والذي له بداية أبطأ لقتل 15 ، لم يحفز eIF2α فسفرة (الشكل التكميلي 1 ب). عند إزالة DTT ، يتم عكس فسفرة eIF2α بسرعة ، مما يشير إلى التعافي من الإجهاد ، في حين أن الفسفرة التي يسببها DHA لا تزال واضحة بعد 6 ساعات (الشكل 1 ب) ، مما يشير إلى إجهاد ER طويل الأمد.

ينشط DHA استجابة البروتين غير المطوية ، بوساطة PK4. أ, ب تروفوزويتس (أ 3D7 ، ب Cam3.II_rev) تم علاجها بـ 0.1٪ DMSO (وهمي) ، DHA أو DTT لمدة 90 دقيقة وتم حصادها على الفور (أ) أو غسلها وإعادتها إلى الثقافة للمدة المحددة من الوقت (ب) قبل إخضاع المحللين لتحليل اللطخة الغربية والأغشية التي تم فحصها من أجل الفسفرة- eIF2α. ج تم تحضين Trophozoites (Cam3.II_rev) بالمركبات المشار إليها لمدة ساعة واحدة وقياس تخليق البروتين. تمثل أشرطة الخطأ sem ***ص & lt 0.001 بين العينات المعالجة بـ DHA أو DTT (ن = 5 (وهمية) ن = 4 (DTT) ن = 3 (DHA ، WR99210 ، CHX)) ، أنوفا. د eIK1 و eIK2 عولجت طفيليات المرحلة الغاذية (في خلفية ثلاثية الأبعاد) بـ 0.1 ٪ DMSO (وهمية) ، 1 ميكرومتر من DHA أو 1 ملي مولار من DTT لمدة 60 دقيقة وتعرضت lysates لتحليل لطخة غربية وتم فحصها من أجل eIF2α الفسفرة. ه, F PK4-HA-glmS (في خلفية 3D7) أو WT (3D7) كرات الدم الحمراء المصابة بالجوائز عولجت بـ 10 ملي غلوكوزامين (GlcN) من المرحلة الحلقية للدورة السابقة وتعرضت المحللات لتحليل لطخة غربية ، والتحقيق مع مضادات HA (ه) ، أو الطفيليات بـ 0.1 ٪ DMSO (وهمي) ، 100 نانومتر DHA أو 1 ملي مولار DTT لمدة 60 دقيقة ، وتعرضت lysates لتحليل لطخة غربية ، للتحقق من eIF2α فسفرته (F). ز تمت معالجة Trophozoites (Cam3.II_rev) بـ 20 ميكرومتر مثبط PERK- I لمدة 3 ساعات ، تليها ساعة أخرى في 0.1 ٪ DMSO (وهمية) ، 1 ميكرومتر DHA أو 1 ملي DTT وحللت بواسطة لطخة غربية من أجل فسفرة- eIF2α . ضوابط التحميل ، صGAPDH أو صBiP. تمثل جميع البقع ثلاث تجارب مستقلة على الأقل. تفاصيل إضافية في الشكل التكميلي 1

تمشيا مع تباطؤ ضغط ER (ولكن ليس إيقاف) ترجمة البروتين 16 ، وجدنا أن تخليق بروتين الطفيلي انخفض بنسبة 65٪ في وجود DTT ، بينما تسبب الهيكسيميد الحلقي (CHX) في تثبيط أكثر اكتمالا (الشكل 1 ج). وبالمثل ، فإن التعرض لـ 100 نانومتر DHA (1 ساعة) قلل من ترجمة البروتين بواسطة

50٪ (الشكل 1 ج). على النقيض من ذلك ، لم يكن للنبضة القاتلة لمضاد الملاريا WR99210 الذي يظهر بداية بطيئة لقتل 15 (انظر الشكل التكميلي 1 ج لمنحنيات القتل) تأثير فوري على ترجمة البروتين. تمت الإشارة إلى التوقف الجزئي للترجمة بسبب عدم وجود تثبيط كامل ، حتى عند تركيزات أعلى من DHA (الشكل التكميلي 1 د).

PK4 مسؤول عن استجابة ER التي تبدأ من DHA

لتحديد كيناز المسؤول عن فسفرة eIF2α ، قمنا بفحص تأثيرات التعديل الجيني على كينازات eIF2α الثلاثة ، eIK1 ، eIK2 و PK4 ، التي تم تحديدها في المتصورة المنجلية 17. تم إثبات أن eIK2 (الذي يتحكم في زمن انتقال sporozoites) 18 و GCN2 homolog ، eIK1 (الذي ينظم فسفرة eIF2α استجابة لتجويع الأحماض الأمينية) 19 يمكن الاستغناء عنها في المتصورة المنجلية 20. وجدنا أن eIF2α لا يزال فسفرته بعد علاج DHA و DTT في eIK1- أو eIK2- خطوط فاصلة (الشكل 1 د) ، تشير إلى أنها ليست مسؤولة عن فسفرة eIF2α المستحثة بـ DHA.

تم الإبلاغ عن أن متماثل PERK ، PK4 ، يتحكم في مستويات ترجمة البروتين العالمية في أواخر schizonts ، وأنه ضروري للنمو 20 ، 21. لقد أنشأنا خط طفيلي معدّل وراثيًا محرضًا بعلامات هيماجلوتينين (HA) ، PK4 انصهر مرنا إلى glmS الريبوسويتش 22. عند إضافة الجلوكوزامين (GlcN) ، فإن glmS يشق ribozyme ذاتيًا في 3 UTR ويتحلل mRNA الهدف. كما كان متوقعًا ، عند إضافة 10 ملي مولار من GlcN ، لوحظ نضوب ملحوظ لـ PK4-HA (الشكل 1 هـ). في حين أن 10 ملي مولار من GlcN لم يكن لها أي تأثير على مستويات فسفرة eIF2α في الأم 3D7 ، فقد أزال فسفرة eIF2α المستحثة بـ DHA / DTT في PK4 خط هدم. تتوافق هذه البيانات مع PK4 كونه كيناز مسؤول عن فسفرة eIF2α ، ويؤكد أيضًا صحة الاقتراح بأن DHA يبدأ استجابة إجهاد بروتين غير مكشوفة في المتصورة المنجلية. لمزيد من التحقيق في دور PK4 ، استخدمنا مثبطًا قويًا للنفاذ للخلايا ومثبطًا لـ PERK للثدييات ((PERK Inhibitor-I أو GSK2606414) 23). التعرض ل المتصورة المنجلية trophozoites إلى PERK Inhibitor-I (20 ميكرومتر) لمدة 4 ساعات لم يكن لها أي تأثير على تطور الطفيلي ، ومع ذلك ، تم منع فسفرة eIF2α المستحثة بـ DHA / DTT (الشكل 1 جم) ، ودعم دور هذا الكيناز في فسفرة eIF2α المستحثة بـ DHA.

البروتينات المتراكمة المتعددة البروتينات تدعم سمية DHA

بعد ذلك ، درسنا عواقب التعرض لـ DHA على الانتشار العالمي. أدى تعرض النواشط لـ DHA لمدة 90 دقيقة (الشكل 2 أ الشكل التكميلي 2 أ) أو الحلقات الوسطى لـ DHA لمدة 3 ساعات (الشكل التكميلي 2 ب) ، إلى زيادة تعتمد على التركيز في البروتينات متعددة الكتل ، بما يتفق مع تلف البروتينات و غامرة من استجابة البروتين الإجهاد. على النقيض من ذلك ، كان للتعرض للكلوروكين تأثير ضئيل على مستويات تعدد التكاثر (الشكل التكميلي 2 ج). تم إحداث تراكم مماثل للبروتينات المتعددة البكتريا بواسطة مثبط البروتوزوم ، إيبوكسوميسين (3 ساعات) (الشكل 2 ب ، الشكل التكميلي 3 أ ، ب). يبدو أن هذا التراكم للبروتينات المنتشرة يكون سامًا للطفيليات عند التعرض لها ب-AP15 ، وهو مثبط لـ deubiquitinases الذي يزيل يوبيكويتين من الركائز قبل التحلل 24 ، 25 ، أو RA190 ، وهو مثبط لمستقبل يوبيكويتين 26 ، تسبب كلاهما في تراكم البروتينات ubiquitines (الشكل 2 ب ، الشكل التكميلي 3 أ ، ب ) وأدى إلى موت الطفيل (الشكل التكميلي 2 د).

يتسبب DHA في تراكم البروتين المتواجد في كل مكان عن طريق تثبيط البروتيازوم. أ, ب تم تحضين Trophozoites (3D7) باستخدام 0.1 ٪ DMSO (وهمي) أو DHA (90 دقيقة) (أ) أو ب-AP15 أو RA190 أو Epo (إيبوكوميسين) (3 ساعات) (ب) ومقتطفات من البروتينات منتشرة في كل مكان. تمثل البقع ثلاث تجارب مستقلة على الأقل (انظر الشكل التكميلي 3 للتكرارات البيولوجية). التحكم في التحميل ، صBiP. ج, د تم تحضين Trophozoites (Cam3.II_rev) بالمركبات المشار إليها لمدة 3 ساعات (ج) ، أو 1 ساعة (د) ، قبل نشاط proteasome-GLO (ج) ، أو تحليل بروتيازوم PAGE غير المختزل (د). تمثل أشرطة الخطأ sem (ن = 3). ه الكميات من المواد الهلامية الأصلية (بيانات من د). تمثل أشرطة الخطأ sem **ص & lt 0.01 بين العينات المعالجة بـ 10 ميكرومتر و 10 ميكرومتر من DHA ، ***ص & lt 0.001 بين العينات المعالجة بالإيبوكوميسين والسخرية (ن = 4) ، أنوفا. F رسم تخطيطي لنظام مراسل GFP-DD. ز, ح تمت المحافظة على معالجات GFP-DD (في خلفية 3D7) في Shield-1 لمدة 24 ساعة ، قبل الغسل. تم إعادة تعريض Trophozoites إلى Shield-1 أو المركبات المشار إليها لمدة 4 ساعات. ز تم تحليل مقتطفات الخلايا بواسطة لطخة غربية لـ GFP. يمثل اللطخة ثلاث تجارب مستقلة على الأقل. التحكم في التحميل ، صBiP. ح مضان GFP يقاس التدفق الخلوي. تركيزات الدرع -1 (دوائر مغلقة) ، RA190 (مثلثات منتصبة) ، ب-AP15 (مثلثات مقلوبة) ، DHA (المربعات المفتوحة) في ميكرومتر ، Epo (المربعات المغلقة) في نانومتر × 100 ، WR (دوائر مفتوحة) في نانومتر × 10. يمثل الخط المنقط الخلفية (مضان للعينة بدون درع -1). البيانات تمثل ما لا يقل عن خمس تجارب مستقلة. تفاصيل إضافية في الشكل التكميلي .2

يمنع علاج DHA وظيفة البروتياز

أدى التراكم السريع للبروتينات المنتشرة في الطفيليات المعالجة بـ DHA إلى التفكير في احتمال أن يقوم DHA بتثبيط نشاط البروتيازوم. أدت زيادة تركيزات DHA و epoxomicin إلى انخفاض نشاط البروتياز (كما تم رصده باستخدام نظام proteasome-GLO 27) (الشكل 2 ج). بالإضافة إلى ذلك ، عندما تعرضت مستخلصات الطفيليات المعالجة للرحلان الكهربي الأصلي للهلام واحتضانها بركيزة ببتيدية فلورية 28 ، كان هناك انخفاض ملحوظ في نشاط 26S ، حتى عند التعرض لمدة 60 دقيقة لـ DHA (الشكل 2 د ، هـ) ، بينما لم تثبط الجرعة المميتة من WR99210 (انظر منحنى القتل في الشكل التكميلي 1 ج) النشاط (الشكل 2 د ، هـ). لم ينتج هذا التأثير عن انخفاض في وفرة البروتوزوم (كما يتضح من النشاف الغربي الشكل التكميلي 2 هـ) ، مما يشير إلى أن DHA يستهدف وظيفة البروتوزوم ، بدلاً من التسبب في دوران البروتياز. قد يحدث فقدان نشاط البروتوزوم بشكل غير مباشر عن طريق انسداد البروتيازوم بالبروتينات المنتشرة ، أو بشكل مباشر عن طريق تلف البروتين أو تفكك الوحدات الفرعية ، بطريقة مشابهة لتلك الخاصة بالتلف التأكسدي للثدييات 26S proteasome 29 ، وبما يتفق مع دراسة تظهر أن يصبح مشتق ART متقاطعًا مع a المتصورة المنجلية الوحدة الفرعية البروتيازوم 8.

لمزيد من الفحص في النشاط الحي للبروتوزوم في الطفيليات المعالجة بـ DHA ، استخدمنا transfectants التي تعبر عن GFP مدمجة في مجال زعزعة الاستقرار (DD) 30 (الشكل 2f) ، والذي يستهدف التدهور بواسطة البروتيازوم في غياب يجند الحماية ، درع -1. مثبطات التحلل بوساطة البروتوزوم (إيبوكسوميسين ، ب-AP15 أو RA190) من تدهور GFP-DD في غياب Shield-1 (الشكل 2g ، الشكل التكميلي 2f). وبالمثل ، تسبب العلاج باستخدام DHA ، ولكن ليس WR99210 ، في تراكم البروتين كامل الطول (الشكل 2g) ، مما يؤكد أن DHA يعطل التحلل المعتمد على البروتياز.

يتسبب علاج DHA في تراكم البروتينات التالفة

استخدمنا إشارة التألق من GFP-DD للتحقيق في تكشف البروتين (أو اختلاله أو تلفه). في حالة عدم وجود Shield-1 ، أو عند العلاج باستخدام WR99210 ، كان التألق منخفضًا ولكنه لم يتم إلغاؤه ، بما يتفق مع تدهور جزء من سكان البروتين الفلوري (الشكل 2 ح ، الشكل التكميلي 2 ز). زاد العلاج باستخدام Shield-1 من إشارة التألق ، مما يشير إلى زيادة في GFP-DD كاملة الطول ومطوية بشكل صحيح. العلاج بإيبوكسوميسين ، بزاد -AP15 أو RA190 أيضًا من مضان GFP-DD (الشكل 2 ح ، الشكل التكميلي 2 ز) ، مما يشير إلى أن GFP يظل مطويًا عندما يتم تعطيل البروتيازوم بواسطة هذه المركبات. على النقيض من ذلك ، عند التعرض لـ DHA ، تم تقليل مضان GFP-DD إلى مستويات أقل من الخلفية (ناقص الدرع -1) (الشكل 2 ح ، الشكل التكميلي 2g) ، بما يتوافق مع تطور البروتين / تلفه. مجتمعة ، تظهر النتائج التي توصلنا إليها أن DHA يتسبب في تلف البروتين ويمنع التدهور عبر البروتيازوم ، مما يؤدي إلى تراكم البروتينات التالفة متعددة الكتل.

تثبيط تعدد الصفات يعاكس نشاط DHA

لمزيد من التحقيق في طبيعة الأحداث السامة التي تؤدي إلى قتل الطفيليات ، قمنا بفحص استراتيجيات مختلفة لمنع تراكم ركائز البروتياز. يوقف CHX ترجمة البروتين ، وهي حالة تحمي خلايا الثدييات من الفتك الناجم عن التثبيط البروتيني 31. وجدنا أن معالجة النواشط بنبضة CHX (حتى 20 ميكرومتر لمدة 6 ساعات) لم يكن لها أي تأثير على الصلاحية (الشكل التكميلي 4 أ). أدى تعرض trophozoites لـ CHX إلى خفض مستوى الخط الأساسي للبروتينات المتعددة (الشكل 3 أ ، الشكل التكميلي 3 ج ، د). وبالمثل ، فإن التعرض لنبضة مشتركة من CHX و DHA قلل بشكل ملحوظ من تراكم DHA بوساطة البروتينات المتعددة (الشكل 3 ب ، الشكل التكميلي 3e-f) ، وقلل من انتشار / تلف GFP-DD بوساطة DHA (الشكل 3 ب) . 3 ج ، الشكل التكميلي 4 ب). الأهم من ذلك ، أن المعالجة المشتركة لـ CHX تمنع بشدة فسفرة eIF2α بوساطة DHA (الشكل ثلاثي الأبعاد) والقتل بوساطة DHA المضاد بشدة (الشكل 3 هـ ، الشكل التكميلي 4 ج ، د) ، مما يؤكد أن تراكم البروتينات غير المطوية والمتعددة المواد السامة الرئيسية بدأ العلاج بواسطة DHA.

المركبات التي تثبط تعدد البروتينات وتلف البروتينات تقاوم نشاط DHA. أ, ب تعرضت Trophozoites (3D7) للعلاج المشار إليه لمدة 6 ساعات قبل تحليل البروتينات المنتشرة. تم تحضين العينات المعالجة بـ MLN4924 لمدة 3 ساعات إضافية قبل علاج DHA. تمثل البقع 3-4 تجارب مستقلة (انظر الشكل التكميلي 3 للتكرارات البيولوجية). ج تم تحضين أقصى تغيير طبيعي في مضان GFP ، تم قياسه بواسطة قياس التدفق الخلوي بعد تم تحضين trophozoites GFP-DD بـ 20 ميكرومتر من المركبات المشار إليها لمدة 3 ساعات ، قبل التعرض لـ DHA لمدة 3 ساعات. يمثل الخط المنقط 100٪ ، وهو أقصى انخفاض في التألق مع علاج DHA. تمثل أشرطة الخطأ sem (ن = 5 (C1) ، ن = 4 (CHX ، MLN4924)). د تمت معالجة Trophozoites (Cam3.II_rev) بـ 0.1 ٪ DMSO (وهمي) ، أو المركبات المشار إليها لمدة 3 ساعات ، تليها 3 ساعات باستخدام DHA قبل فحص lysates للفسفرة- eIF2α. لطخة تمثل ثلاث تجارب مستقلة. التحكم في التحميل ، صBiP. هز تمت معالجة ثقافات المرحلة الحلقية (Cam3.II_rev) بمركبة (دوائر) أو 0.3125 ميكرومتر (مربعات) ، 2.5 ميكرومتر (مثلثات منتصبة) أو 5 ميكرومتر (مثلثات مقلوبة) CHX (ه) أو 5 ميكرومتر (مربعات) ، 10 ميكرومتر (مثلثات قائمة) أو 20 ميكرومتر (مثلثات مقلوبة) C1 (F) أو 10 ميكرومتر (مربعات) أو 20 ميكرومتر (مثلثات قائمة) MLN4924 (ز) لمدة 3 ساعات ، تليها 3 ساعات أخرى مع DHA. بعد غسل الدواء ، تم تقييم الطفيليات في الدم بعد 72 ساعة. تمثل أشرطة الخطأ sem (ن = 3). تفاصيل إضافية في التين التكميلي. 4-6

المركب 1 (5′-O-sulphamoyl-N (6) - [(1S) −2،3-dihydro-1H-inden-1-yl] -adenosine) ، المشار إليه فيما بعد بـ C1 ، هو مثبط عموم لـ إنزيمات تنشيط اليوبيكويتين (E1) ، والتي تستنفد التجمعات داخل الخلايا من يوبيكويتين المنشط 32. لم يكن لمعالجة الطفيليات بنبضة C1 (6 ساعات حتى 20 ميكرومتر) أي تأثير على قابلية الطفيل (الشكل التكميلي 5 أ). ومع ذلك ، فقد قلل من مستوى الخط الأساسي للبروتينات المتعددة (الشكل 3 أ ، الشكل التكميلي 3 ج ، د) وزاد من مضان GFP-DD في غياب Shield-1 (الشكل التكميلي 5 ب) ، بما يتوافق مع تراكم البروتيازوم. الركيزة غير المعترف بها / المتدهورة لأنها غير منتشرة في كل مكان. بالإضافة إلى ذلك ، قلل علاج C1 من التراكم بوساطة DHA للبروتينات متعددة الكتل إلى أقل من مستويات الخلفية (الشكل 3 ب ، الشكل التكميلي 3e-f) وأثبط بشدة ظهور / تلف GFP-DD بوساطة DHA (الشكل 3 ج ، الشكل التكميلي. 4 ب). وفقًا لذلك ، قلل C1 من تراكم الفسفرة الناجم عن DHA لـ eIF2α (الشكل ثلاثي الأبعاد) والقتل بوساطة DHA المضاد بقوة (الشكل 3f ، الشكل التكميلي 5 ج ، د). كما تسبب C1 أيضًا في استعداء تراكم البروتينات متعددة التكثيف والقتل الناجم عن الإيبوكسوميسين (الشكل التكميلي 5 هـ ، و) ، ولكنه لم يمنع الضرر الذي يحدث بوساطة DHA لوظيفة البروتياز (الشكل التكميلي 5 جم).

Cullin ring E3 ubiquitin ligases يتم تعديلها تساهميًا باستخدام NEDD8 ، الذي ينظم دورها في تحلل البروتين المعتمد على اليوبيكويتين. العلاج بنبضة MLN4924 ، وهو مثبط للثدييات NEDD8 تنشيط إنزيم 32 ، لم يمنع نمو الطفيليات عند استخدامه بمفرده (الشكل التكميلي 6 أ). لم يسبب انخفاضًا ملحوظًا في البروتينات المتعددة (الشكل 3 أ ، ب ، الشكل التكميلي 3c-f) ، كما أنه لم يثبط التفتت / الضرر بوساطة DHA لـ GFP-DD (الشكل 3 ج ، الشكل التكميلي 4 ب). قلل MLN4924 بشكل طفيف فسفرة eIF2α (الشكل ثلاثي الأبعاد) ، وبشكل معتدل ، وإن كان بشكل ملحوظ ، قتل معادي (الشكل 3 ز ، الشكل التكميلي 6 ب ، ج).


نقاش

هذا ، على حد علمنا ، هو أول تحقيق تجريبي في الأدوار البيولوجية لأشكال G-quadruplex في طفيلي الملاريا المتصورة المنجلية. لقد أثبتنا أنه يمكن اكتشاف الحمض النووي G-quadruplex في هذا الطفيل وأن تعطيل المعالجة الطبيعية لأشكال G-quadruplex يضعف نمو الطفيل. في المختبر. من المهم ملاحظة أن التسلسلات التي لديها القدرة على تكوين G-quadruplexes نادرة جدًا في المتصورة المنجلية الجينوم وأن G-quadruplexes التي تم اكتشافها في المتصورة المنجلية من المحتمل أن تكون النوى التي تستخدم الأجسام المضادة الخاصة بالبنية في التيلوميرات بشكل أساسي ، نظرًا لأن غالبية PQSs في المتصورة المنجلية يتم ترتيبها جنبًا إلى جنب في تكرارات التيلومير (10) وربما لا تستطيع هذه الأجسام المضادة اكتشاف G-quadruplexes بدقة عزر واحدة (34). (في الواقع ، يبدو أن إشارة G-quadruplex التي تظهر في المرحلة المتأخرة من الطفيليات هي الأقوى في البؤر المحيطية النووية ، كما هو متوقع من DNA telomeric.) ومع ذلك ، من المهم أيضًا ملاحظة أن إمكانات تشكيل G-quadruplex لـ المتصورة المنجلية قد يتم التقليل من أهمية الجينوم وفقًا للمعايير في السيليكو الخوارزميات ، كما تم توضيحه مؤخرًا من خلال تسلسل الجينوم البشري بطريقة حساسة لـ G-quadruplex (8): اكتشف هذا النهج التجريبي العديد من G-quadruplexes أكثر من في السيليكو طريقة مسح الجينوم لتكرار G3ن1 & # x020137 (7). بالنسبة إلى المتصورة المنجلية الجينوم ، تم استخدام خوارزمية تنبؤية مريحة نسبيًا في دراستنا السابقة (G3ن0 & # x0201311) ، ولا يزال هذا يعثر على 80 فقط PQS غير متماثل (5) ، ومع ذلك ، فإن الخوارزمية تتغاضى عن العديد من G-quadruplexes غير الكنسية المكتشفة في الجينوم البشري ، مثل G-quadruplexes المنتفخة (8) و interstrand بدلاً من intrastrand G-quadruplexes (9) ). أخيرًا ، يكتشف الجسم المضاد الخاص بالهيكل المستخدم هنا الحمض النووي فقط وليس RNA G-quadruplexes ، وبالتالي فإن وجود RNA G-quadruplexes في المتصورة المنجلية لا يزال يتعين تأكيده.

تم إثبات أن العديد من المركبات المثبِّتة لـ G-quadruplex تمنع نمو طفيليات الملاريا ، بما في ذلك دواء المرحلة الثانية المضاد للسرطان quarfloxin ، والذي كان فعالًا وسريع التأثير نسبيًا ضد الطفيليات الحلقية والغذائية. يجب أن يقتل مضاد الملاريا المثالي الطفيليات في جميع مراحل الدورة داخل كرات الدم (وفي الواقع ، بشكل مثالي في المراحل غير الكريات الحمر من دورة الحياة أيضًا). على سبيل المثال ، فإن عقار الخط الأول الحالي المضاد للملاريا ، الأرتيميسينين ، يقتل مراحل الحلقة السابقة للتكاثر بالإضافة إلى trophozoites و schizonts ، في حين أن مضادات الملاريا القديمة ، مثل الكلوروكين ومضادات الفولات ، فعالة للغاية فقط ضد المراحل التكاثرية. في حين أنه ليس من الضروري توضيح الآلية (الآليات) الجزيئية لمركب مضاد للتشنج قبل التطوير السريري & # x02014indeed ، تظل آلية عمل مادة الأرتيميسينين غير مفهومة جيدًا ويمكن أن تساعد هذه المعلومات في التنبؤ بتطور مقاومة الأدوية والمقاومة التبادلية. لذلك ، قمنا بالتحقق من طريقة عمل الكوارفلوكسين. لم نجد أي دليل على أن الكوارفلوكسين يقتل الطفيليات عن طريق إحداث خلل وظيفي في التيلومير ، على الرغم من غلبة PQSs في تكرارات التيلومير ، حيث يبدو أن صيانة التيلومير طبيعية بعد ما يصل إلى 15 دورة من النمو في الكوارفلوكسين. لا يستبعد هذا بشكل قاطع احتمال حدوث خلل وظيفي في التيلومير مميت بشكل حاد عند التعرض لأدوية أعلى ، ولكن أدوات تقييم ذلك في المتصورة المنجلية تفتقر إلى: يفتقر الطفيلي إلى الهستون المتغير & # x003b3H2AX (35) ، والذي يستخدم عادة للكشف عن بؤر تلف الحمض النووي ، ويفتقر أيضًا إلى جميع مكونات مجمع التيلومير التقليدي (36).

في غياب أي تأثير واضح على التيلوميرات ، قمنا بتقييم احتمال أن quarfloxin قد يقتل الطفيليات عن طريق منع التعبير المناسب للجينات المحتوية على G-quadruplex. واحد وأربعون PQS من المتوقع في غيرفار الجينات (5) ، وكثير منها قد يكون ضروريًا (في المقابل ، فار يمكن الاستغناء عن التعبير الجيني في المختبر [37] ، وإن كان ذلك أمرًا حيويًا في الجسم الحي للأنماط الظاهرية للفوعة ، مثل الالتصاق داخل الأوعية ، وتباين المستضدات ، والتهرب المناعي). كدليل على المفهوم ، ترميز G-quadruplex ريفين تم استنساخ الجين المراسل والتحقق من صحته ونقله إلى طفيليات ، وتبين أن تعبيره قد تم تثبيته بواسطة جميع مركبات الربط G-quadruplex التي تم اختبارها. هذا هو العرض الأول للتعبير الجيني المعتمد على G-quadruplex في المتصورة المنجلية، وهو يتوافق مع نموذج يمكن أن تمنع فيه الانعكاسات G-quadruplexs ، عندما تتشكل بشكل ثابت في الحمض النووي ، النسخ بواسطة RNA polymerase II.

قمنا بعد ذلك بتقييم نموذج عمل quarfloxin الذي تم الإبلاغ عنه سابقًا في المثقبيات والخلايا البشرية: قمع نسخ الرنا الريباسي بواسطة RNA polymerase I (17 ، 18). ركزنا فقط على جينات الرنا الريباسي النووية وليس تلك المشفرة في عضية القمة ، لأن التداخل مع تخليق البروتين في أبكوبلاست المتصورة المنجلية يعطي نمطًا ظاهريًا مميزًا للموت المتأخر ، حيث تحدث الوفاة فقط في دورة النمو الثانية بعد إضافة الدواء (38) ، في حين أن موت الطفيلي الذي لوحظ هنا مع الكوارفلوكسين كان سريعًا للغاية ، مما يجعل ريبوسومات أبيكوبلاست من غير المرجح أن تكون هدفًا رئيسيًا.

بالرغم ان المتصورة المنجلية يعبر عن جينات الرنا الريباسي عبر RNA polymerase I ، ولا يحافظ على هذه الجينات في المصفوفات الترادفية التقليدية (2) ، علاوة على ذلك ، لا يُتوقع أن تحتوي معظم جينات الرنا الريباسي للطفيلي على PQSs (5). موضع غير نمطي واحد فقط على الكروموسوم 8 ، PF3D7_0830000، الذي يحتوي على جينات 5.8S و 28S rRNA ولكن لا يحتوي على جين لـ 18S rRNA ، يحتوي على G.3ن0 & # x0201311 عنصر. لذلك ليس من المستغرب أننا لم نعثر على أي دليل على القمع الحاد لنسخ الرنا الريباسي بواسطة الكوارفلوكسين. بدلاً من ذلك ، قد يتم استهداف جين (جينات) أساسي آخر يشفر PQSs بواسطة quarfloxin ، ولا يمكن بعد استبعاد إمكانية أنماط العمل الأخرى المرتبطة بـ G-quadruplex ، مثل الحث الحاد لتلف الحمض النووي أو خلل التيلومير. (لا يزال من الممكن أيضًا أن تكون G-quadruplexes غير متضمنة ببساطة ، فنحن نجري حاليًا مزيدًا من العمل لإنشاء طريقة عمل quarfloxin الفعلية في المتصورة المنجلية، بعد أن أثبتت أن هناك احتمالًا واحدًا على الأقل يمكن التنبؤ به & # x02014 ، تثبيط تبلور الهيموزوين & # x02014 لا يتوافق مع بياناتنا.) بشكل عام ، تشير معدلات القتل المتنوعة جدًا للمركبات المختلفة التي تم اختبارها هنا إلى أنها قد تختلف ليس فقط في المطلق. تقارب لـ G-quadruplexes ولكن أيضًا في المجموعة الفرعية من G-quadruplexes التي يستهدفها كل مركب داخل الجينوم.

في الختام ، يوضح هذا العمل أن مركبات الارتباط G-quadruplex قد يكون لها القدرة على إعادة وضعها كمضادات للملاريا. Quarfloxin قوي وسريع المفعول (على الأقل في المختبر) له خصائص دوائية جيدة في البشر ، كما ثبت من تجارب السرطان السابقة والنافذة الانتقائية على المتصورة المنجلية هو 40 مرة على الأقل على الخلايا البشرية (111 نانومتر مقارنة بـ 4.44 & # x003bcM على الخلايا الظهارية للثدي البشري ، كما أفاد كيري وآخرون. [17]). وبالتالي فإن بيولوجيا G-quadruplex في طفيليات الملاريا تشكل مجالًا مثيرًا للدراسة المستقبلية ، لتحسين فهمنا للبيولوجيا الأساسية والتحكم في الجينات الفوعة في هذا الطفيل وأيضًا لدعم اكتشاف أهداف جديدة لتطوير الأدوية المضادة للملاريا.


خيارات الوصول

احصل على الوصول الكامل إلى دفتر اليومية لمدة عام واحد

جميع الأسعار أسعار صافي.
سيتم إضافة ضريبة القيمة المضافة في وقت لاحق عند الخروج.
سيتم الانتهاء من حساب الضريبة أثناء الخروج.

احصل على وصول محدود أو وصول كامل للمقالات على ReadCube.

جميع الأسعار أسعار صافي.


البكتيريا المعدلة وراثيًا تمنع البعوض من نقل الملاريا

قام باحثون في معهد جونز هوبكنز لبحوث الملاريا بتعديل وراثي لبكتيريا توجد بشكل شائع في المعى المتوسط ​​للبعوض ووجدوا أن الطفيلي الذي يسبب الملاريا لدى البشر لا يعيش في البعوض الحامل للبكتيريا المعدلة. تم تعديل بكتيريا Pantoea agglomerans لإفراز بروتينات سامة لطفيل الملاريا ، لكن السموم لا تضر البعوض أو الإنسان. وفقًا لدراسة نشرتها PNAS ، كانت البكتيريا المعدلة فعالة بنسبة 98 في المائة في تقليل عبء طفيلي الملاريا في البعوض.

قال مارسيلو جاكوبس-لورينا ، دكتوراه ، كبير مؤلفي الدراسة وأستاذ في مدرسة جونز هوبكنز بلومبيرج العامة: "في الماضي ، عملنا على تعديل البعوض وراثيًا لمقاومة الملاريا ، لكن التعديل الجيني للبكتيريا يعد أسلوبًا أبسط". الصحة. "الهدف النهائي هو منع البعوض تمامًا من نقل طفيلي الملاريا إلى البشر."

من خلال الدراسة ، وجد جاكوبس لورينا وزملاؤه أن سلالات P. agglomerans المصممة هندسيًا تثبط تطور طفيلي الملاريا البشري الأكثر فتكًا Plasmodium falciparum وطفيلي الملاريا القوارض Plasmodium berghei بنسبة تصل إلى 98 بالمائة داخل البعوض. انخفضت نسبة البعوض الحامل للطفيليات (الانتشار) بنسبة تصل إلى 84 بالمائة. & # 160

"لقد أظهرنا استخدام بكتيريا تكافلية هندسية للتدخل في تطور المتصورة المنجلية في البعوض. توفر هذه النتائج الأساس لاستخدام البكتيريا التكافلية المعدلة وراثيًا كأداة قوية لمكافحة الملاريا ، "قال جاكوبس لورينا.

تقتل الملاريا أكثر من 800000 شخص في جميع أنحاء العالم كل عام. كثير من الأطفال.

مؤلفو "محاربة الملاريا بالبكتيريا التكافلية المهندسة من البعوض الناقل" هم سيباو وانج ، أنيل ك.

تم دعم البحث من قبل المعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية ، ومؤسسة Bill & amp Melinda Gates ، ومعهد Johns Hopkins Malaria Research ومؤسسة Bloomberg Family.

الاتصال الإعلامي: تيم بارسونز ، مدير الشؤون العامة ، على 410-955-7619 أو [email protected]

كلية جونز هوبكنز بلومبرج للصحة العامة
615 شارع إن وولف ، بالتيمور ، ماريلاند 21205


قم بتنزيل وطباعة هذه المقالة لاستخداماتك العلمية والبحثية والتعليمية الشخصية.

شراء عدد واحد من علم مقابل 15 دولارًا أمريكيًا فقط.

علوم الطب الانتقالي

المجلد 9 ، العدد 371
04 يناير 2017

أدوات المادة

الرجاء تسجيل الدخول لإضافة تنبيه لهذه المقالة.

بقلم جيمس ج.كوبلين ، وسيباستيان أ.ميكولاجتشاك ، وبراندون ك.ساك ، ومات إي فيشبوغر ، وآنيت سيلي ، وليزا شيلتون ، وتراسي فون جويدرت ، وميليك فرات ، وسارا ماجي ، وإيما فريتزن ، وويل بيتز ، وهيذر إس كاين ، ودوريندر أ. دانكوا ، رايان دبليو جيه ستيل ، آشلي إم فوغان ، دي نوح ساثر ، شون سي ميرفي ، ستيفان هاي كابي

علوم الطب الانتقالي 04 يناير 2017

موهن وراثيا المتصورة المنجلية السلالة المسماة Pf GAP3KO موهنة تمامًا وآمنة ومولدة للمناعة لدى البالغين.


نتائج

إدارة المعدلة وراثيا P. agglomerans عن طريق وجبات السكر والانتشار السريع بعد وجبة الدم.

P. agglomerans هي بكتيريا تكافلية طبيعية ينتشر حدوثها في بعوض الأنوفيلا (15 –17). تم عزل سلالتنا في الأصل من المعى المتوسط ​​لسمك أنوفيليس غامبيا مستعمرة المختبر ثم تم اختيارها لاحقًا لتحسين التكيف مع ألف غامبيا و أ. ستيفنسي بيئات المعى المتوسط ​​(17). لفحص المؤتلف P. agglomerans الاستعمار والبقاء في المعى المتوسط ​​البعوض ، تحولنا P. agglomerans مع pPnptII بلازميد مستقر للغاية: gfp (19) الذي يعبر عن بروتين الفلورسنت الأخضر (GFP). وجدنا أن البكتيريا الموسومة بـ GFP كانت تدار بسهولة في المعى المتوسط ​​للبعوض عن طريق وجبات السكر (الشكل S1). منتصف البعوض لإناث البعوض التي تم تغذيتها بعلامات GFP P. agglomerans أصبحت مشعة بقوة بعد تناول وجبة دم (الشكل 1 أ و ب) ، مما يشير إلى انتشار البكتيريا السريع. لتقدير ديناميات أعداد البكتيريا ، البعوض الذي تم تغذيته بعلامات GFP P. agglomerans تم تشريحها في أوقات مختلفة بعد وجبة الدم وتم طلاء متجانسات الأمعاء المتوسطة على أطباق انتقائية تحتوي على الكاناميسين. زادت أعداد البكتيريا بشكل كبير بأكثر من 200 ضعف خلال أول يومين بعد تناول وجبة الدم (الشكل 1ج). بعد ذلك ، انخفض عدد البكتيريا إلى ما يقرب من المستويات المسبقة ، ويفترض أن الغالبية تم إفرازها مع بقايا هضم الدم.

المعدلة وراثيا P. agglomerans تتكاثر بسرعة في الأمعاء المتوسطة بعد تناول وجبة من الدم. GFP الموسومة P. agglomerans كانت تدار ل 2 د من العمر ألف غامبيا عن طريق وجبة سكرية ، وبعد 32 ساعة تغذت الحشرات على الدم. (أ) تصور البكتيريا الموسومة GFP في الأمعاء الوسطى في 24 ساعة بعد وجبة الدم. المعى المتوسط ​​العلوي من بعوضة تم تغذيتها بالبكتيريا الموسومة بـ GFP ، وكان المعى المتوسط ​​السفلي من بعوضة تحكم لا تتغذى على البكتيريا المؤتلفة. صورة تباين التداخل التفاضلي (حق) مع صورة فلورسنت (اليسار). (ب) تعافت البكتيريا الفلورية GFP من المعى المتوسط ​​للبعوض. (ج) ديناميات السكان من GFP الموسومة P. agglomerans كدالة للوقت بعد وجبة الدم. تم تغذية البعوض بالبكتيريا الفلورية كما هو موصوف أعلاه ، وتم تشريح الأمعاء المتوسطة في الأوقات المحددة بعد وجبة الدم. تم تحديد وحدات تشكيل مستعمرة البكتيريا الفلورية (CFUs) عن طريق طلاء متجانسات مخففة تسلسليًا من المعى المتوسط ​​على ألواح أجار LB / كاناميسين. تم تجميع البيانات من ثلاث مكررات بيولوجية.

المؤتلف P. agglomerans سلالات تفرز بكفاءةالمتصورة الجزيئات المستجيبة.

كما ذكرنا سابقًا ، لتحقيق أقصى قدر من الفعالية للتدخل ، من الضروري إفراز جزيئات المستجيب من البكتيريا المهندسة للسماح بالانتشار إلى أهداف المعى المتوسط ​​للبعوض أو الطفيلي. استخدمنا ملف بكتريا قولونية Hemolysin (Hly) نظام (20 -22) لتعزيز إفراز البروتين منه P. agglomerans. يتطلب نظام الإفراز من النوع الأول هذا ثلاثة مكونات لتشكيل مسام غشاء (مكونات الغشاء الداخلي HlyB و HlyD ومكون الغشاء الخارجي TolC). يتعرف مجمع HlyB-HlyD على إشارة إفراز الطرف C لـ HlyA لتوجيه التصدير المباشر لبروتينات الانصهار HlyA من السيتوبلازم البكتيري إلى البيئة خارج الخلية متجاوزًا الفضاء المحيط بالبلازما (الشكل S2)أ).

استخدمنا نظام إفراز HlyA لاختبار مضاداتالمتصورة جزيئات المستجيب (الجدول S1): (أنا) نسختان من 12-aa SM1 الببتيد [(SM1)2] ، الذي يرتبط بالسطح اللمعي للمعي المتوسط ​​للبعوض ويمنع غزو الأمعاء الوسطى (23) (ثانيا) a phospholipase mPLA2 الطافر الذي يمنع غزو ookinete ، ربما عن طريق تعديل خصائص الغشاء الظهاري للأمعاء الوسطى (24) (ثالثا) سم مناعي وحيد السلسلة (pbs21scFv-Shiva1) ، يتكون من جسم مضاد أحادي النسيلة وحيد السلسلة (scFv) يستهدف P. berghei بروتين سطح ookinete الرئيسي pbs21 ومرتبط بالببتيد المحلول Shiva1 (18) (رابعا) بروببتيد إنزيم الكيتيناز (Pro) الذي يثبط الإنزيم ويمنع عبور ookinete للمصفوفة المحيطة بالبعوض (25) (الخامس) ببتيد تحليلي مضاد للطفيليات ، Shiva1 (26) (السادس) عقرب (باندينوس إمبيراتور) الببتيد المضاد للملاريا ، العقرب ، الذي له خصائص هجينة من الببتيدات اللايتية cecropin و defensin (27) (السابع) أربع نسخ من المتصورة تفاعل إنولاز-بلازمينوجين الببتيد (EPIP) [(EPIP)4] التي تمنع غزو الأمعاء المتوسطة للبعوض عن طريق منع ارتباط البلازمينوجين بسطح ookinete (28) و (ثامنا) ببتيد اندماج مكون من Pro و EPIP (Pro: EPIP). تم تصنيع جميع الجينات مع P. agglomerans استخدام الكودون المفضل (الجدول S2) واستنساخه في إطار مع مجال إشارة إفراز طرف C ذي علامات E لـ HlyA في ناقل تعبير عالي النسخ (الأشكال S2)ب و S3). تم تحويل البلازميدات الناتجة بشكل فردي إلى P. agglomerans مع ترميز pVDL9.3 البلازميد منخفض النسخ لـ HlyB و HlyD (20). التعبير التأسيسي وإفراز بروتين اندماج بالحجم المتوقع بواسطة كل مؤتلف P. agglomerans تم التحقق من السلالة عن طريق تحليل لطخة غربية (الشكل 2أ). الببتيدات الأصغر حجمًا [(EPIP)4، Shiva1 ، و Pro: EPIP] كانت أكثر وفرة في الثقافة طافًا من البروتينات الأكبر حجمًا (mPLA2 و pbs21fsFv-Shiva1) (الشكل 2).أ). المؤتلف P. agglomerans التعبير عن الإجهاد (EPIP)4 كان لديه أعلى مستوى إفراز ، ويبدو أنه أكثر كفاءة من السلالة المؤتلفة التي تحمل الأبوين E-HlyA بلازميد (الشكل 2).أ). في الجسم الحي إفراز مضادالمتصورة تم تأكيد جزيئات المستجيب في المعى المتوسط ​​للبعوض باستخدام مقايسات التألق المناعي التي كشفت عن ارتباط الببتيد SM1 الناتج عن البكتيريا بسطح الأمعاء المتوسط ​​(الشكل 2).ب). السيطرة على المعى المتوسط ​​من البعوض الذي يتغذى على المؤتلف P. agglomerans معربًا عن HlyA ذات العلامات الإلكترونية وحدها (HlyA) لم يكن لها مضان فوق الخلفية.

المهندسة P. agglomerans سلالات تفرز بكفاءة ضدالمتصورة بروتينات المستجيب. (أ) تحليل لطخة غربية. تم تركيز المواد الطافية للثقافة باستخدام وحدات مرشح Amicon Ultra-4 للطرد المركزي. تم تجزئة القسامات الناشئة من نفس الحجم من المادة الطافية بواسطة SDS / PAGE وتم إخضاعها لتحليل اللطخة الغربية باستخدام جسم مضاد مضاد للعلامة E للأرنب. المادة الطافية من غير المحولة P. agglomerans (WT) بمثابة عنصر تحكم سلبي. تم التقاط الصور باستخدام نفس وقت التعرض. (ب) في الجسم الحي ربط الببتيد SM1 المفرز بظهارة الأمعاء المتوسطة للبعوض. ألف غامبيا كانت تتغذى على محلول سكر يحتوي على مادة مؤتلفة P. agglomerans سلالات تعبر إما عن (SM1)2 أو HlyA الموسومة E بمفردها (HlyA) ثم تتغذى على دم الفأر. تم تشريح منتصف المعى بعد 18 أو 24 ساعة من وجبة الدم ، وفتحها في ورقة ، وتثبيتها ، واحتضانها بجسم مضاد لـ SM1 ، تليها حضانة مع جسم مضاد ثانوي الفلوريسنت. كانت النوى ملطخة بـ DAPI (أزرق). تظهر صور تباين التداخل التفاضلي (DIC) لنفس المجال على اليمين.

المؤتلف P. agglomerans الإجهاد يضعف بكفاءة المتصورة المنجلية التطور في البعوض.

لتقييم الفعالية التي تتداخل بها البكتيريا المؤتلفة مع تطور طفيلي الملاريا البشري المتصورة المنجلية في البعوض المؤتلف P. agglomerans تم إعطاؤها للبعوض عن طريق ضمادات قطنية مبللة ببكتيريا معلقة في محلول سكروز 5٪ (وزن / حجم). بعد اثنتين وثلاثين ساعة ، تم تزويد البعوض ب المتصورة المنجلية- وجبة دم مصابة. تم تقييم نجاح تطور الطفيل عن طريق حساب أعداد البويضات في اليوم الثامن بعد وجبة الدم المعدية. أجريت تجارب أولية لتقييم إمكانية تثبيط المؤتلف P. agglomerans إفراز بروبتيد إنزيم الكيتيناز (برو) مقارنة بإعطاء البروببتيد الاصطناعي الممزوج مع وجبة الدم. يمنع البروببتيد المتصورة نشاط الكيتيناز ، وبالتالي ، يمنع عبور المصفوفة الصفاق ، مما يؤدي إلى انخفاض عدد الأوكنيتات التي تصل إلى ظهارة الأمعاء المتوسطة (25). كما هو مبين في الشكل. S4 ، تثبيط بواسطة P. agglomerans التعبير عن البروببتيد كان فعالاً ، بنسبة 59٪ تثبيط في البعوض شديد العدوى (انظر أيضًا التعليقات المتعلقة بكثافة العدوى تحت مناقشة). بعد ذلك ، قمنا بتقييم القدرة التثبيطية لمؤتلف مختلف P. agglomerans سلالات. كما هو مبين في الشكل 3 ، المؤتلف P. agglomerans السلالة التي تعبر عن HlyA الموسومة E وحدها لم تثبط بشكل كبير تكوين البويضة مقارنةً بالبكتيريا الناقصة. المؤتلف P. agglomerans التعبير عن mPLA2 أو Pro: EPIP أو Shiva1 كان له انخفاض بنسبة 85 ٪ و 87 ٪ و 94 ٪ في أرقام البويضة ، على التوالي. المؤتلف P. agglomerans التعبير عن العقرب أو (EPIP)4 كان أعلى تثبيط (∼98٪) لتكوين البويضة (الشكل 3). الأهم من ذلك ، انتشار العدوى (النسبة المئوية للبعوض الذي يحتوي على بويضة واحدة أو أكثر) كان 90٪ في بعوض Bact (control) وانخفض إلى 14٪ في البعوض الحامل للبكتيريا التي تفرز العقرب ، وهو ما يمثل 84٪ من إمكانية منع انتقال العدوى.

تثبيط المتصورة المنجلية التنمية في البعوض الناقل عن طريق المؤتلف P. agglomerans سلالات. ألف غامبيا تم تغذية البعوض بمحلول سكر بنسبة 5٪ (وزن / حجم) مُكمل إما بـ PBS (−Bact) أو معاد الارتباط. P. agglomerans سلالات و 32 ساعة تتغذى في وقت لاحق على أ المتصورة المنجلية- وجبة دم مصابة. تم تحديد أعداد البويضات بعد 8 أيام من تناول الدم. تمثل كل نقطة رقم البويضة للمعي المتوسط ​​الفردي وتشير الخطوط الأفقية إلى القيم المتوسطة. تم تجميع البيانات من أربع مكررات بيولوجية. المؤتلف P. agglomerans تم تصميم سلالات للتعبير عن ببتيد HlyA زعيم HlyA وحده (HlyA) أو mPLA2 و Pro: EPIP و Shiva1 و scorpine و (EPIP)4 (الجدول S1) ، منصهرًا في HlyA (الشكل S3) ، كما هو موضح. تثبيط ، تثبيط تكوين البويضة بالنسبة إلى − متوسط ​​التحكم في البكتيريا ، متوسط ​​عدد البويضة لكل متوسط ​​المعي المتوسط ​​، متوسط ​​عدد البويضة لكل المعي المتوسط ​​N ، عدد البعوض الذي تم تحليله ، الانتشار ، النسبة المئوية للبعوض الذي يحمل نطاق بيض واحد على الأقل ، نطاق أعداد البويضات لكل المعي المتوسط Tbp ، إمكانية منع الانتقال: 100 - <(انتشار البعوض الذي يتغذى مع المؤتلف P. agglomerans) / [انتشار السيطرة (بكت) البعوض] × 100>.

لتقييم استمرارية التأثير المثبط ، قمنا بمقارنة أعداد البويضة في البعوض الذي تم تغذيته بنفس الدفعة من وجبة الدم المعدية إما في 2 د (إجراءنا القياسي) أو 4 أيام بعد إعطاء البكتريا. قيمت هذه التجارب أيضًا تأثير خلط البكتيريا التي تعبر عن بروتينين فاعلين مختلفين ، [shiva1 + (EPIP)4] و [العقرب + (EPIP)4] ، على تثبيط المتصورة المنجلية عدوى. كما هو مبين في الشكل 4 ، كان تثبيط تطور البويضة مشابهًا في كلتا النقطتين الزمنيتين. وبالتالي ، فإن التأثير المثبط للبكتيريا يستمر لمدة 4 أيام على الأقل بعد إعطاء البكتيريا. كما أن التثبيط بمزيج من البكتيريا التي تعبر عن مؤثرين (الشكل 4) كان مشابهًا لتثبيط البكتيريا التي تعبر عن مؤثر واحد (الشكل 3). يتم النظر في الأسباب المحتملة لذلك تحت مناقشة.

مقارنة المتصورة المنجلية التطور بين البعوض الذي يتغذى على وجبة دم معدية إما 2 أو 4 أيام بعد إعطاء المؤتلف P. agglomerans. ألف غامبيا تم تغذية الإناث بمحلول سكر بنسبة 5٪ (وزن / حجم) مع إضافة إما PBS (−Bact) أو مادة مؤتلفة. P. agglomerans سلالات على النحو التالي: HlyA ، P. agglomerans التعبير عن زعيم HlyA الببتيد وحده Shiva1 + (EPIP)4 أو العقرب + (EPIP)4 (الجدول S1) ، خليط من نوعين من البكتيريا المؤتلفة بأعداد متساوية. يومين (2 ديسيبل باسكال) أو 4 أيام (4 ديسيبل باسكال) بعد إعطاء البكتيريا ، تم تغذية البعوض على المتصورة المنجلية- وجبة دم مصابة. تم تحديد أعداد البويضات بعد 8 أيام من تناول وجبة الدم. تمثل كل نقطة رقم البويضة للمعي المتوسط ​​الفردي وتشير الخطوط الأفقية إلى القيم المتوسطة. تم تجميع البيانات من ثلاث مكررات بيولوجية. النسبة المئوية للتثبيط ، تثبيط تكوين البويضة بالنسبة إلى متوسط ​​التحكم في البكتيريا ، متوسط ​​عدد البويضة لكل متوسط ​​المعي المتوسط ​​، متوسط ​​عدد البويضة لكل المعي المتوسط ​​N ، عدد البعوض الذي تم تحليله الانتشار ، النسبة المئوية للبعوض الذي يحمل نطاق بيض واحد على الأقل ، نطاق أعداد البويضة لكل المعى المتوسط.

المؤتلف P. agglomerans الإجهاد يضعف بكفاءة P. berghei التطور في البعوض.

قمنا أيضًا بتقييم فعالية المؤتلف P. agglomerans سلالات لمنع تطور طفيلي الملاريا القوارض P. berghei في أ. ستيفنسي البعوض. سمح للبعوض الذي يؤوي سلالات بكتيرية مختلفة مؤتلفة أن تتغذى على نفس السلالات P. berghei- فأر مصاب بالعدوى ، متبوعًا بتحديد أعداد البويضات في اليوم الرابع عشر بعد الإصابة. المؤتلف P. agglomerans التعبير عن الإجهاد (SM1)2 خفض متوسط ​​عدد البويضات بنسبة 68٪ ، خليط متساوٍ من البكتيريا التي تعبر عن pbs21scFv-shiva1 + (EPIP)4 انخفاض عدد البويضات بنسبة 79٪ ، ومزيج من العقرب- و (EPIP)4- قلل التعبير عن البكتيريا من تعداد البويضات بنسبة 83٪ (الشكل 5) ، على الرغم من معدلات الإصابة المرتفعة نسبيًا (& gt60 بويضة لكل المعي المتوسط ​​انظر أيضًا مناقشة). لم يلاحظ أي انخفاض كبير في وجود المؤتلف P. agglomerans سلالة معبرة عن HlyA الموسومة E وحدها (HlyA).

تثبيط P. berghei التطور في البعوض الذي يؤوي المؤتلف P. agglomerans سلالات. أ. ستيفنسي تم تغذية الإناث بمحلول سكر بنسبة 5٪ (وزن / حجم) مُكمّل إما بـ PBS (−Bact) أو مادة مؤتلفة. P. agglomerans سلالات مصممة للتعبير عن HlyA الموسومة E وحدها (HlyA) ، (SM1)2، pbs21scFv-Shiva1 / (EPIP)4 (خليط 50-50) أو العقرب / (EPIP)4 (خليط 50-50)] (الجدول S1 والشكل S3) وبعد 32 ساعة تم تغذية المجموعات الخمس من البعوض على نفس P. berghei- الفأر المصاب. المتصورة تم تقييم الالتهابات بعد 14 يوم من الإصابة. تمثل كل نقطة عدد البويضات في المعي المتوسط ​​الفردي. تشير الخطوط الأفقية إلى القيم المتوسطة. تم تجميع البيانات من ثلاث مكررات بيولوجية. N ، عدد البعوض الذي تم تحليله النطاق ، نطاق أعداد البويضات لكل المعي المتوسط ​​، النسبة المئوية للبعوض الحامل لمتوسط ​​بيضة واحدة على الأقل ، متوسط ​​عدد البويضات لكل متوسط ​​المعي المتوسط ​​، متوسط ​​عدد البويضة لكل المعي المتوسط ​​تثبيط ، تثبيط تكوين البويضة بالنسبة إلى − السيطرة على البكتيريا .

المؤتلف P. agglomerans السلالات لا تؤثر على طول عمر البعوض.

تعد البكتيريا المؤتلفة مع الحد الأدنى من تكلفة اللياقة البدنية للبعوض عاملاً مهمًا أيضًا لنجاح التطبيقات الميدانية المستقبلية. لفحص تأثير المؤتلف P. agglomerans سلالات معبرة ضدالمتصورة على عمر البعوض ، كان البعوض يتغذى على السكر وحده أو على مادة مؤتلفة مختلفة P. agglomerans وبعد 32 ساعة ، سُمح لها بالتغذية على فأر غير مصاب. بعد ذلك ، تمت مراقبة الوفيات مرتين يوميًا. لم يتم الكشف عن فروق ذات دلالة إحصائية في عمر البعوض بين أي من مجموعات البعوض (الشكل 6) ، مما يشير إلى أن هذه المضادات المؤتلفةالمتصورة لا تشكل المنتجات أي تأثير سلبي واضح على لياقة البعوض في ظروف المختبر.

تأثير المؤتلف P. agglomerans سلالات على عمر أنوفيليس غامبيا إناث. ألف غامبيا تم تغذية البعوض بمحلول سكر 5٪ (وزن / حجم) مكمل إما بـ PBS (−Bact) ، أو مؤتلف. P. agglomerans السلالات على النحو التالي: HlyA ، P. agglomerans التعبير عن زعيم HlyA الببتيد وحده Shiva1 + (EPIP)4 أو العقرب + (EPIP)4، خليط من البكتريا المؤتلفة بأعداد متساوية (الجدول S1 والشكل S3). بعد اثنتين وثلاثين ساعة ، تم تغذية البعوض على فأر غير مصاب ، وتم قياس بقاء البعوض مرتين يوميًا. تم تجميع البيانات من ثلاث تجارب مستقلة. لم يكن هناك فرق كبير في البقاء على قيد الحياة بين المجموعات.


مراجع

Yamauchi، L.M، Coppi، A.، Snounou، G. & amp Sinnis، P. المتصورة تتساقط البوغات من موقع الحقن. زنزانة. ميكروبيول. 9, 1215–1222 (2007).

Langhorne، J.، Ndungu، F.M، Sponaas، A.M & amp Marsh، K. Immunity to malaria: أسئلة أكثر من الإجابات. نات. إمونول. 9, 725–732 (2008).

تران ، تي إم وآخرون. تكشف دراسة أترابية طولية مكثفة على الأطفال والبالغين في مالي عن عدم وجود دليل على المناعة المكتسبة ضد المتصورة المنجلية عدوى. كلين. تصيب. ديس. 57, 40–47 (2013).

Owusu-Agyei، S. et al. حدوث أعراض وبدون أعراض المتصورة المنجلية العدوى بعد العلاج العلاجي في البالغين المقيمين في شمال غانا. أكون. جيه تروب. ميد. هيغ. 65, 197–203 (2001).

ساجارا ، آي وآخرون. ارتفاع معدل الإصابة بالملاريا مرة أخرى لدى الأطفال والشباب الذين يعيشون تحت معدل تلقيح حشري منخفض في منطقة ضواحي مدينة باماكو ، مالي. أكون. جيه تروب. ميد. هيغ. 66, 310–313 (2002).

السخنة ، C. S. ، Faye ، F. B. K. ، Dieng ، H. & amp Trape ، J.F المتصورة المنجلية بعد العلاج من تعاطي المخدرات بين البالغين السنغاليين المعرضين لانتقال موسمي معتدل. أكون. جيه تروب. ميد. هيغ. 65, 167–170 (2001).

بول ، بي سي وآخرون. تعتبر مستضدات الطفيليات على سطح الخلايا الحمراء المصابة أهدافًا للمناعة الطبيعية ضد الملاريا. نات. ميد. 4, 358–360 (1998).

تشان ، جيه إيه وآخرون. أهداف الأجسام المضادة ضد المتصورة المنجلية- كريات الدم الحمراء المصابة في مناعة الملاريا. J. كلين. استثمار. 122, 3227–3238 (2012).

Fowkes، F. J.، Richards، J. S.، Simpson، J.A & amp Beeson، J.G. العلاقة بين الأجسام المضادة المضادة للميروزويت ونسبة حدوث المتصورة المنجلية الملاريا: مراجعة منهجية وتحليل تلوي. بلوس ميد. 7، e1000218 (2010).

Pinzon-Charry، A. et al. الجرعات المنخفضة من الطفيلي المقتول في CpG تثير استجابات قوية لخلايا CD4 + T ضد ملاريا الدم في الفئران. J. كلين. استثمار. 120, 2967–2978 (2010).

Süss ، G. ، Eichmann ، K. ، Kury ، E. ، Linke ، A. & amp Langhorne ، J. المتصورة تشابودي. تصيب. مناعة. 56, 3081–3088 (1988).

هورن ديبيتس ، جيه إم وآخرون. يؤدي الإرهاق المعتمد على PD-1 لخلايا CD8 + T إلى الإصابة بالملاريا المزمنة. مندوب الخلية. 5, 1204–1213 (2013).

إيماي ، ت. وآخرون. مشاركة خلايا CD8 + T في المناعة الوقائية ضد عدوى مرحلة الدم لدى الفئران yoelii المتصورة سلالة 17XL. يورو. J. إمونول. 40, 1053–1061 (2010).

ريتشاردز ، دبليو هـ.التحصين النشط للكتاكيت ضد المتصورة جالينسيوم عن طريق البوغات المتماثلة المعطلة والطفيليات الكريات الحمر. طبيعة سجية 212, 1492–1494 (1966).

موليجان ، H.W. ، راسل ، P. F. & amp Mohan ، B.N. التحصين الفعال للطيور ضد المتصورة جاليناسيمن عن طريق حقن البوغات المتماثلة المقتولة. J. مالار. إنست. الهند 4, 25–34 (1941).

Nussenzweig ، R. S. ، Vanderberg ، J. ، Most ، H. & amp Orton ، C. المناعة الوقائية الناتجة عن حقن البوغات المشعة X من البلازموديوم البرغي. طبيعة سجية 216, 160–162 (1967).

كلايد ، د. ف. تحصين الإنسان ضد الملاريا المنجلية والنشيطة باستخدام البوغات المخففة. أكون. جيه تروب. ميد. هيغ. 24, 397–401 (1975).

Luke، T.C & amp Hoffman، S.L. المتصورة المنجلية لقاح سبوروزويت. ياء إكسب. بيول. 206, 3803–3808 (2003).

Rodrigues، M.، Nussenzweig، R. S. & amp Zavala، F. المساهمة النسبية للأجسام المضادة وخلايا CD4 + و CD8 + T في الحماية التي يسببها sporozoite ضد الملاريا. علم المناعة 80, 1–5 (1993).

Schofield، L. et al. جاما إنترفيرون وخلايا CD8 + T والأجسام المضادة اللازمة لمناعة الملاريا البوغية. طبيعة سجية 330, 664–666 (1987).

Weiss، W. R.، Sedegah، M.، Beaudoin، R. L.، Miller، L.H & amp Good، M.F. خلايا CD8 + T (سامة للخلايا / مثبطات) مطلوبة للحماية في الفئران المحصنة ببوغات الملاريا. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 85, 573–576 (1988).

Hafalla ، J.C ، Sano ، G. ، Carvalho ، L.H ، Morrot ، A. & amp Zavala ، F. عرض مستضد قصير المدى وانفجار نسيلي واحد يحد من حجم استجابات خلايا CD8 + T لمراحل كبد الملاريا. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 99, 11819–11824 (2002).

كيتاني ، جي جي وآخرون. تعطل الملاريا في مرحلة الدم المناعة الخلطية لمرحلة ما قبل كريات الدم الحمراء حول بروتين الكريات الحمر. مندوب الخلية. 17, 3193–3205 (2016).

Ocaña-Morgner، C.، Mota، M. & amp Rodriguez، A. Malaria قمع مرحلة الدم لمناعة الكبد بواسطة الخلايا المتغصنة. ياء إكسب. ميد. 197, 143–151 (2003).

Casares، S.، Brumeanu، T.D & amp Richie، T.L The RTS، S لقاح الملاريا. مصل 28, 4880–4894 (2010).

بيلنو ، إي وآخرون. التطعيم الحي yoelii المتصورة طفيليات مرحلة الدم تحت غطاء الكلوروكين تحفز المناعة عبر المراحل ضد الملاريا في الكبد. J. إمونول. 181, 8552–8558 (2008).

موردمولر ، ب. وآخرون. حماية معقمة من الملاريا البشرية عن طريق لقاح PfSPZ المضعف كيميائياً. طبيعة سجية 542, 445–449 (2017).

Roestenberg ، M. وآخرون. الحماية من تحدي الملاريا عن طريق التلقيح بالسبوروزويت. إنجل. جيه ميد. 361, 468–477 (2009).

Wu، Y.، Sinden، R. E.، Churcher، T. S.، Tsuboi، T. & amp Yusibov، V. تطوير لقاحات منع انتقال الملاريا: من المفهوم إلى المنتج. حال. باراسيتول. 89, 109–152 (2015).

Weiss، W. R. & amp Jiang، C. G. واقية من الخلايا الليمفاوية CD8 + T في الرئيسيات المحصنة ببكتيريا الملاريا. بلوس واحد 7، e31247 (2012).

كوكبيرن ، آي إيه وآخرون. التصوير الحي للتخلص من خلايا CD8 + T بوساطة خلايا الكبد من الملاريا. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 110, 9090–9095 (2013).

كيمورا ، ك وآخرون. تشكل خلايا CD8 + T الخاصة بمستضد الملاريا السيتوبلازمي مجموعات حول خلايا الكبد المصابة وتكون واقية في مرحلة الإصابة بالكبد. تصيب. مناعة. 81, 3825–3834 (2013).

Rodrigues، M.، Nussenzweig، R. S.، Romero، P. & amp Zavala، F. يرتبط النشاط السام للخلايا في استنساخ خلايا CD8 + T بمستويات التعبير عن جزيئات الالتصاق. ياء إكسب. ميد. 175, 895–905 (1992).

Butler، N. S.، Schmidt، N.W، amp Harty، J. T. المتصورة البرغي مقابل P. يويلي سبوروزويتس. J. إمونول. 184, 2528–2538 (2010).

شاكرافارتي ، إس ، بالديفيانو ، جي سي ، أوفرستريت ، إم جي آند زافالا ، إف إفكتور CD8 + الخلايا الليمفاوية التائية ضد مراحل الكبد من yoelii المتصورة لا تتطلب جاما إنترفيرون للنشاط المضاد للطفيليات. تصيب. مناعة. 76, 3628–3631 (2008).

أوليفيرا ، ج. أ وآخرون. المناعة الوقائية المقيدة من الفئة الثانية التي تسببها الملاريا البوغية. تصيب. مناعة. 76, 1200–1206 (2008).

كارفالهو ، إل.إتش وآخرون. تعد خلايا CD4 + T التي تفرز IL-4 ضرورية لتطوير استجابات خلايا CD8 + T ضد مراحل كبد الملاريا. نات. ميد. 8, 166–170 (2002).

تسوجي ، م وآخرون. تساهم خلايا جاما دلتا التائية في المناعة ضد مراحل الكبد من الملاريا في الفئران التي تعاني من نقص خلايا ألفا بيتا تي. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 91, 345–349 (1994).

رينيا ، ل. وآخرون. وظائف المستجيب لاستنساخ الخلايا CD4 + T. yoelii المتصورة مراحل الكبد. J. إمونول. 150, 1471–1478 (1993).

إيشيزوكا ، أ.س وآخرون. الحماية من الملاريا في عمر 1 سنة والمناعة المناعية بعد التطعيم PfSPZ. نات. ميد. 22, 614–623 (2016).

سيدر ، ر.أ.وآخرون. الحماية من الملاريا عن طريق التحصين عن طريق الوريد بلقاح غير متكرر للسبوروزويت. علم 341, 1359–1365 (2013).

ليك ، ك إي وآخرون. يحفز لقاح PfSPZ الموهن الخلايا التائية التي تتجاوز الإجهاد وحماية دائمة ضد عدوى الملاريا البشرية الخاضعة للسيطرة غير المتجانسة. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 114, 2711–2716 (2017).

إبشتاين ، ج. إي وآخرون. حماية ضد المتصورة المنجلية الملاريا بواسطة لقاح PfSPZ. انسايت JCI 2، e89154 (2017).

سيسوكو ، إم إس وآخرون. سلامة وفعالية لقاح PfSPZ ضد المتصورة المنجلية عن طريق التلقيح الوريدي المباشر في البالغين الأصحاء المعرضين للملاريا في مالي: تجربة عشوائية مزدوجة التعمية من المرحلة الأولى. لانسيت تصيب. ديس. 17, 498–509 (2017).

شاكرافارتي ، إس وآخرون. يتم تحضير الخلايا الليمفاوية التائية CD8 + T الواقية من الإصابة بالملاريا في العقد الليمفاوية التي تستنزف الجلد. نات. ميد. 13, 1035–1041 (2007).

لاو ، إل إس وآخرون. تحفز خلايا CD8 + T المأخوذة من فأر جديد معدّل وراثيًا لمستقبل الخلايا التائية المناعة في مرحلة الكبد والتي يمكن تعزيزها عن طريق عدوى مرحلة الدم في ملاريا القوارض. بلوس باثوج. 10، e1004135 (2014).

بيكر ، إي إم وآخرون. ترتبط الواسمات السامة للخلايا بالحماية من الملاريا لدى المتطوعين من البشر الذين تم تحصينهم المتصورة المنجلية سبوروزويتس. J. تصيب. ديس. 210, 1605–1615 (2014).

الزيدي وآخرون.γδ الخلايا التائية مطلوبة لتحريض مناعة معقمة أثناء التطعيمات البوغية المشععة. J. إمونول. 199, 3781–3788 (2017).

ساندستروم ، إيه وآخرون. يربط مجال B30.2 داخل الخلايا من butyrophilin 3A1 phosphoantigens للتوسط في تنشيط خلايا Vγ9Vδ2 T. البشرية. حصانة 40, 490–500 (2014).

دي روزا ، إس سي وآخرون. نشوء خلايا جاما دلتا التائية في البشر. J. إمونول. 172, 1637–1645 (2004).

جاغاناثان ، ب. وآخرون. يرتبط فقدان واختلال خلايا Vδ2 + T بالتسامح السريري للملاريا. علوم. ترجمة. ميد. 6، 251ra117 (2014).

Kazmin ، D. et al. تحليل نظم الاستجابات المناعية الوقائية للتطعيم ضد الملاريا RTS، S في البشر. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 114, 2425–2430 (2017).

لي ، إس وآخرون. يستحث التأسيس مع فيروس الأنفلونزا المأشوب متبوعًا بإعطاء فيروس اللقاح المأشوب مناعة واقية من خلايا CD8 + T ضد الملاريا. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 90, 5214–5218 (1993).

تشوانغ ، آي وآخرون. DNA Prime / Adenovirus يعززان ترميز لقاح الملاريا ص. المنجلية يستحث CSP و AMA1 الحماية المعقمة المرتبطة بالمناعة الخلوية. بلوس واحد 8، e55571 (2013).

إيور ، ك.جيه وآخرون. مناعة واقية من خلايا CD8 + T ضد الملاريا البشرية التي يسببها تحصين الشمبانزي Adenovirus-MVA. نات. كومون. 4, 2836 (2013).

منساه ، ف.أ.وآخرون. مأمونية ومناعة اللقاحات الموجهة ضد الملاريا المعطاة مع برنامج روتيني موسع بشأن لقاحات التمنيع في الرضع وحديثي الولادة في غامبيا: تجربة معشاة ذات شواهد. أمام. إمونول. 8, 1551 (2017).

Ogwang، C. et al. التطعيم المعزز الأولي للفيروس الغداني للشمبانزي ولقاح اللقاح المعدل في أنقرة يوفر حماية جزئية ضد المتصورة المنجلية العدوى عند البالغين الكينيين. علوم. ترجمة. ميد. 7، 286re5 (2015).

Cockburn، I. A.، Tse، S. W. & amp Zavala، F. CD8 + T cells تقضي على مرحلة الكبد المتصورة البرغي طفيليات بدون تأثير متفرج يمكن اكتشافه. تصيب. مناعة. 82, 1460–1464 (2014).

فرنانديز رويز ، د. وآخرون. تشكل خلايا الذاكرة CD8 + T الموجودة في الكبد خط دفاع أمامي ضد عدوى الملاريا في مرحلة الكبد. حصانة 45, 889–902 (2016).

شميت ، إن دبليو وآخرون. توفر استجابات خلايا الذاكرة CD8 T التي تتجاوز عتبة كبيرة ولكن يمكن تحديدها مناعة طويلة الأمد ضد الملاريا. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 105, 14017–14022 (2008).

جيليسبي ، جي إم وآخرون. عدم التجانس الوظيفي والترددات العالية للخلايا اللمفاوية التائية CD8 + T الخاصة بالفيروس المضخم للخلايا في المتبرعين الأصحاء. J. فيرول. 74, 8140–8150 (2000).

هانسن ، إس جي وآخرون. سيطرة مبكرة عميقة على فيروس SIV شديد الإمراض بواسطة لقاح الخلايا التائية المستجيب للذاكرة. طبيعة سجية 473, 523–527 (2011).

هانسن ، إس جي وآخرون. الوقاية من السل في قرود المكاك الريسوسي بواسطة لقاح مضاد للفيروس المضخم للخلايا. نات. ميد. 24, 130–143 (2018).

Gebhardt ، T. ، Palendira ، U. ، Tscharke ، D.C & amp Bedoui ، S. خلايا الذاكرة المقيمة في الأنسجة في استتباب الأنسجة ، والعدوى المستمرة ، ومراقبة السرطان. إمونول. القس. 283, 54–76 (2018).

Tse، S. W.، Radtke، A. J.، Espinosa، D. A.، Cockburn، I. A. & amp Zavala، F. المستقبل الكيميائي CXCR6 مطلوب للحفاظ على ذاكرة الكبد CD8 + الخلايا التائية الخاصة بمسببات الأمراض المعدية. J. تصيب. ديس. 210, 1508–1516 (2014).

مكنمارا ، إتش إيه وآخرون. يسمح التنظيم الأعلى لـ LFA-1 لخلايا الذاكرة المقيمة في الكبد بالقيام بدوريات والبقاء في الجيوب الكبدية. علوم. إمونول. 2، eaa1996 (2017).

إبشتاين ، ج. إي وآخرون. لقاح الملاريا الحي الموهن المصمم للحماية من خلال مناعة الخلايا التائية CD8 + الكبدية. علم 334, 475–480 (2011).

ماكاي ، إل ك وآخرون. مناعة ظهارية طويلة العمر بواسطة خلايا ذاكرة T (TRM) المقيمة في الأنسجة في غياب عرض مستضد محلي مستمر. بروك. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 109, 7037–7042 (2012).

سلوتر ، ب. وآخرون. تكمن ديناميكيات خلايا الذاكرة التائية المقيمة في الرئة التي يسببها الإنفلونزا في ضعف المناعة غير المتجانسة. علوم. إمونول. 2، eaag2031 (2017).

وو ، تي وآخرون. لا غنى عن خلايا الذاكرة المقيمة في الرئة CD8 T (TRM) لتوفير الحماية المثلى ضد عدوى الفيروس الرئوي. J. ليوكوك. بيول. 95, 215–224 (2014).

تارون ، أ.س وآخرون. مسح ترانسكريبتوم وبروتيوم مشترك لمراحل كبد طفيلي الملاريا. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 105, 305–310 (2008).

Roestenberg ، M. وآخرون. الحماية طويلة الأمد ضد الملاريا بعد التلقيح التجريبي للسبوروزويت: دراسة متابعة مفتوحة التسمية. لانسيت 377, 1770–1776 (2011).

شاتس ، آر وآخرون. حماية غير متجانسة من الملاريا بعد التحصين ب المتصورة المنجلية سبوروزويتس. بلوس واحد 10، e0124243 (2015).

Walk ، J. et al. حماية متواضعة غير متجانسة بعد المتصورة المنجلية تحصين sporozoite: تجربة سريرية عشوائية مزدوجة التعمية. BMC Med. 15, 168 (2017).

بتلر ، إن إس وآخرون. مناعة فائقة ضد الملاريا بعد التطعيم مع طفيليات موهنة وراثياً توقف مرحلة الكبد المتأخرة. ميكروب مضيف الخلية 9, 451–462 (2011).

نهرندورف ، دبليو وآخرون. مناعة في مرحلة الدم ل المتصورة تشابودي الملاريا بعد تلقيح الوقاية الكيميائية والسبوروزويت. eLife 4، e05165 (2015).

بيكر ، إي إم وآخرون. الحماية ضد الملاريا بعد التحصين عن طريق العلاج الوقائي بالكلوروكين و sporozoites يتم توسطها بواسطة مناعة ما قبل كريات الدم. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 110, 7862–7867 (2013).

بيترز ، ج. وآخرون. تنوع عالي وتغيير سريع لجينات var المعبر عنها خلال المرحلة الحادة من عدوى المتصورة المنجلية في المتطوعين من البشر. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 99, 10689–10694 (2002).

فوغان ، إيه إم وآخرون. يعتبر تخليق الأحماض الدهنية من النوع الثاني ضروريًا فقط لتطور طفيلي الملاريا في وقت متأخر من مرحلة الكبد. زنزانة. ميكروبيول. 11, 506–520 (2009).

سبرينج ، إم وآخرون. التقييم الأول في البشر للضعف الجيني المتصورة المنجلية sporozoites عن طريق لدغة بعوض Anopheles لمتطوعين بالغين. مصل 31, 4975–4983 (2013).

كوبلين ، ج.ج وآخرون. التوهين الكامل للمعدلات وراثيا المتصورة المنجلية sporozoites في البشر. علوم. ترجمة. ميد. 9، eaad9099 (2017).

Doll، K. L.، Pewe، L. L.، Kurup، S.P & amp Harty، J. T. التمييز الواقي من غير الوقائي المتصورة-استجابات خلايا CD8 + T محددة. J. إمونول. 196, 4253–4262 (2016).

كوكبيرن ، آي إيه وآخرون. تستخدم الخلايا المتغصنة وخلايا الكبد مسارات متميزة لمعالجة المستضد الواقي من البلازموديوم في الجسم الحي. بلوس باثوج. 7، e1001318 (2011).

روميرو ، ب. وآخرون. تتعرف الخلايا التائية المستنسخة السامة للخلايا على حاتمة في بروتين المحيط وتحمي من الملاريا. طبيعة سجية 341, 323–326 (1989).

هافالا ، ج. سي وآخرون. تحديد أهداف استجابات خلايا CD8 + T لمراحل كبد الملاريا عن طريق التنميط اللاصق على مستوى الجينوم. بلوس باثوج. 9، e1003303 (2013).

كومار ، ك. إيه وآخرون. بروتين السيرومسبوروزويت هو مستضد وقائي مناعي في sporozoites المشععة. طبيعة سجية 444, 937–940 (2006).

جرونر ، إيه سي وآخرون. الحماية المعقمة ضد الملاريا مستقلة عن الاستجابات المناعية لبروتين المحيط. بلوس واحد 2، e1371 (2007).

Doolan، D.L et al. تحديد المتصورة المنجلية المستضدات عن طريق التحليل المستضدي للبيانات الجينومية والبروتينية. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 100, 9952–9957 (2003).

دريبر ، س.جيه وآخرون. التطورات الحديثة في لقاحات الملاريا المؤتلفة القائمة على البروتين. مصل 33, 7433–7443 (2015).

Schussek، S. et al. رواية المتصورة المستضدات التي تم تحديدها عبر شاشة الأجسام المضادة المعتمدة على الجينوم تحفز الحماية المرتبطة باستجابات الخلايا التائية متعددة الوظائف. علوم. اعادة عد. 7, 15053 (2017).

Speake ، C. وآخرون. تحديد مستضد الملاريا الجديد قبل الكريات الحمر المرشحين لتوليفة اللقاحات مع بروتين السيرومسبوروزويت. بلوس واحد 11، e0159449 (2016).

لونجلي ، آر جيه وآخرون. يحدد التقييم المقارن لناقلات اللقاح المشفرة لعشرة مستضدات للملاريا اثنين من المرشحين الواقيين لمرحلة الكبد. علوم. اعادة عد. 5, 11820 (2015).

شاو ، دبليو وآخرون. مشروع أطلس SysteMHC. الدقة الأحماض النووية. 46، D1237-D1247 (2018).

بلوتكين ، س.أ.اللقاحات: ترتبط بالمناعة التي يسببها اللقاح. كلين. تصيب. ديس. 47, 401–409 (2008).

Amanna، I. J.، Carlson، N. E. & amp Slifka، M.K. مدة المناعة الخلطية لمستضدات اللقاح والفيروسات الشائعة. إنجل. جيه ميد. 357, 1903–1915 (2007).

بلوتكين ، إس. أ. روابط الحماية التي يسببها التطعيم. كلين. لقاح إمونول. 17, 1055–1065 (2010).

نوسينزويج ، R. S. ، Vanderberg ، J. P. ، Sanabria ، Y. & amp Most ، H. المتصورة البرغي: تسريع إزالة البوغ من الدم كجزء من آلية المناعة في الفئران. إكسب. باراسيتول. 31, 88–97 (1972).

بيهيت ، إم سي وآخرون. تحصين Sporozoite للمتطوعين من البشر تحت الوقاية الكيميائية يحرض الأجسام المضادة الوظيفية ضد مراحل ما قبل الكريات الحمر من المتصورة المنجلية. مالار. ج. 13, 136 (2014).

بينغ ، ك وآخرون. اتساع نطاق الاستجابة الخلطية والأهداف المستضدية للأجسام المضادة المثبطة للسبوروزويت المرتبطة بالحماية المعقمة الناتجة عن عدوى الملاريا البشرية الخاضعة للرقابة. زنزانة. ميكروبيول. 18, 1739–1750 (2016).

ساك ، ب ك وآخرون. الحماية الخلطية ضد لدغات البعوض المتصورة المنجلية العدوى في الفئران المتوافقة مع البشر. لقاحات NPJ 2, 27 (2017).

زافالا ، إف وآخرون. الأساس المنطقي لتطوير لقاح اصطناعي ضد المتصورة المنجلية ملاريا. علم 228, 1436–1440 (1985).

Kisalu، N. K. et al. يمنع الجسم المضاد وحيدة النسيلة البشرية عدوى الملاريا عن طريق استهداف موقع جديد من الضعف على الطفيل. نات. ميد. 24, 408–416 (2018).

تان ، جيه وآخرون. سلالة من الأجسام المضادة العامة تمنع بشكل فعال عدوى الملاريا من خلال الارتباط المزدوج ببروتين السركومسبوروزويت. نات. ميد. 24, 401–407 (2018).

إسبينوزا ، د. إيه وآخرون. انشقاق بروتين المتصورة المنجلية بروتين سركومسبوروزويت هدف للأجسام المضادة الواقية. J. تصيب. ديس. 212, 1111–1119 (2015).

شراكة التجارب السريرية RTS، S. فعالية وسلامة لقاح الملاريا RTS، S / AS01 مع أو بدون جرعة معززة عند الرضع والأطفال في إفريقيا: النتائج النهائية للمرحلة الثالثة ، تجربة عشوائية محكومة بشكل فردي. لانسيت 386, 31–45 (2015).

وايت ، إم تي وآخرون. استمناع لقاح الملاريا RTS، S / AS01 والآثار المترتبة على مدة فعالية اللقاح: التحليل الثانوي للبيانات من المرحلة 3 من التجارب المعشاة ذات الشواهد. لانسيت تصيب. ديس. 15, 1450–1458 (2015).

Dups ، J. N. ، Pepper ، M. & amp Cockburn ، I.A Antibody and B cell response to المتصورة سبوروزويتس. أمام. ميكروبيول. 5, 625 (2014).

دوغلاس ، إيه دي وآخرون. يعتبر اللقاح المستند إلى PfRH5 فعالاً ضد سلالة الدم غير المتجانسة المتصورة المنجلية عدوى في قرود الأوتوس. ميكروب مضيف الخلية 17, 130–139 (2015).

ثيرا ، إم إيه وآخرون. تجربة ميدانية لتقييم لقاح الملاريا في الدم. إنجل. جيه ميد. 365, 1004–1013 (2011).

Dvorak ، J. A. ، Miller ، L. H. ، Whitehouse ، W.C & amp Shiroishi ، T. غزو خلايا الدم الحمراء بواسطة ملاريا merozoites. علم 187, 748–750 (1975).

Gilson، P.R & amp Crabb، B. S. مورفولوجيا وحركية المراحل الثلاث المتميزة لغزو خلايا الدم الحمراء بواسطة المتصورة المنجلية الميروزويت. كثافة العمليات J. باراسيتول. 39, 91–96 (2009).

مانز ، ر. أ ، ثيل ، إيه آند رادبروش ، أ. عمر خلايا البلازما في نخاع العظام. طبيعة سجية 388, 133–134 (1997).

سليفكا ، إم ك ، أنتيا ، آر ، وايتمير ، ج. ك. & أمبير أحمد ، ر. مناعة خلطية بسبب خلايا البلازما طويلة العمر. حصانة 8, 363–372 (1998).

نات ، إس إل ، هودجكين ، بي دي ، تارلينتون ، دي إم ، أمبير كوركوران ، إل إم. إنتاج خلايا بلازما تفرز الأجسام المضادة. نات. القس إمونول. 15, 160–171 (2015).

كلاتربوك ، إي إيه وآخرون. لقاح المكورات الرئوية المتقارن وعديد السكاريد العادي تأثيرات متباينة على الخلايا البائية الخاصة بالمستضد. J. تصيب. ديس. 205, 1408–1416 (2012).

فيشر ، سي آر وآخرون. استجابات الخلايا البائية المعتمدة على T لـ المتصورة تحفيز الأجسام المضادة التي تشكل مركبًا متعدد التكافؤ عالي النشوة مع بروتين السيرومسبوروزويت. بلوس باثوج. 13، e1006469 (2017).

Oyen ، D. et al. الأساس الهيكلي للتعرف على الأجسام المضادة لـ NANP يتكرر في المتصورة المنجلية بروتين سيركمسبوروزويت. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 114، E10438 – E10445 (2017).

إمكيلر ، ك وآخرون. يحسن نضج الألفة المضاد للنمط استجابات الخلايا البائية البشرية ضد حاتمة متكررة. علم 360, 1358–1362 (2018).

موروغان ، آر وآخرون. يقود الانتقاء النسيلي استجابات خلايا الذاكرة B الواقية في عدوى الملاريا البشرية الخاضعة للرقابة. علوم. إمونول. 3، eaap8029 (2018).

Regules ، J. A. et al. الجرعة الثالثة والرابعة الكسرية من لقاح الملاريا المرشح RTS، S / AS01: المرحلة 2 أ التي تسيطر عليها عدوى طفيلي الملاريا البشرية ودراسة الاستمناع. J. تصيب. ديس. 214, 762–771 (2016).

شراكة التجارب السريرية RTS، S. فعالية وسلامة لقاح الملاريا RTS، S / AS01 خلال 18 شهرًا بعد التطعيم: المرحلة الثالثة من التجارب العشوائية المضبوطة على الأطفال والرضع الصغار في 11 موقعًا أفريقيًا. بلوس ميد. 11، e1001685 (2014).

Ryg-Cornejo، V. et al. عدوى الملاريا الحادة تضعف استجابات المركز الجرثومي عن طريق تثبيط تمايز الخلايا المسامية التائية. مندوب الخلية. 14, 68–81 (2016).

Obeng-Adjei، N. et al. يتم تنشيط خلايا Tfh المنتشرة من النوع Th1 والتي تظهر ضعف الخلايا البائية بشكل تفضيلي أثناء الملاريا الحادة عند الأطفال. مندوب الخلية. 13, 425–439 (2015).

البرتغال ، S. وآخرون. تُظهر خلايا الذاكرة غير النمطية المرتبطة بالملاريا انخفاضًا ملحوظًا في إشارات مستقبلات الخلايا البائية ووظيفة المستجيب. eLife 4, 07218 (2015).

وايس ، جي إي وآخرون. ال المتصورة المنجلية- تتسع حجرة الخلايا البائية للذاكرة البشرية الخاصة بالتدريج مع تكرار الإصابة بالملاريا. بلوس باثوج. 6، e1000912 (2010).

كورتوفيتش ، ل. وآخرون. الأجسام المضادة البشرية تنشط المكمل ضد المتصورة المنجلية sporozoites ، وترتبط بالحماية من الملاريا عند الأطفال. BMC Med. 16, 61 (2018).

بويل ، إم جيه وآخرون. تقوم الأجسام المضادة البشرية بإصلاح المكمل لتثبيطه المتصورة المنجلية غزو ​​كرات الدم الحمراء وترتبط بالحماية من الملاريا. حصانة 42, 580–590 (2015).

كريشنامورتي ، إيه تي وآخرون. مفرط الطفو جسديا المتصورة- خلايا الذاكرة B النوعية IgM + سريعة ، بلاستيكية ، تستجيب مبكرًا لإعادة معالجة الملاريا. حصانة 45, 402–414 (2016).

Zenklusen، I. et al. يؤدي تحصين المتطوعين المعرضين مسبقًا للملاريا باستخدام لقاح PfSPZ إلى إنتاج أجسام مضادة مثبطة للغزو IgM طويلة العمر ومثبتة للمكملات. J. تصيب. ديس. 217, 1569–1578 (2018).

Kwong، P. D. ما هي أقوى إستراتيجيات لقاح تصميم مناعي؟ منظور عالم الأحياء الهيكلية. كولد سبرينج حرب. وجهة نظر. بيول. 9، a029470 (2017).

فوكيه ، ل. وآخرون. تمنع الأجسام المضادة أحادية النسيلة التي يسببها اللقاح والتي تستهدف بروتين السورومسبوروزويت المتصورة المنجلية عدوى. J. كلين. استثمار. 124, 140–144 (2014).

Triller، G. et al. يؤدي التعرض الطبيعي للطفيليات إلى تحفيز الأجسام المضادة البشرية المضادة للملاريا. حصانة 47، 1197–1209.e1110 (2017).

كوبي ، إيه وآخرون. يحتوي بروتين الملاريا المحيط بالملاريا على مجالين وظيفيين ، لكل منهما أدوار مميزة حيث تنتقل البوغات من البعوض إلى مضيف الثدييات. ياء إكسب. ميد. 208, 341–356 (2011).

Scally ، S.W et al. نادرًا ما تكون الأجسام المضادة الطرفية PfCSP C الناتجة عن التطعيم الحي للسبوروزويت غير فعالة ضد عدوى الملاريا. ياء إكسب. ميد. 215, 63–75 (2018).

شودري ، إس وآخرون. يتم تحديد الوظيفة البيولوجية للأجسام المضادة التي يسببها لقاح الملاريا RTS، S / AS01 المرشح من خلال نوعيتها الدقيقة. مالار. ج. 15, 301 (2016).

شودري ، إس وآخرون. نظام الجرعات الجزئية المتأخرة من لقاح الملاريا RTS، S / AS01 المرشح يعزز استجابة IgG4 التي تمنع كثرة البلعمة في الدم. علوم. اعادة عد. 7, 7998 (2017).

سرينيفاسان ، ب. وآخرون. تعطيل تفاعل طفيل الملاريا AMA1-RON2 مع جزيء صغير يمنع غزو كرات الدم الحمراء. نات. كومون. 4, 2261 (2013).

سرينيفاسان ، ب. وآخرون. لقاح الملاريا يقي أوتوس القرود ضد الخبيثة المتصورة المنجلية عدوى. لقاحات NPJ 2, 14 (2017).

كروسنييه ، سي وآخرون. Basigin هو مستقبل ضروري لغزو كرات الدم الحمراء المتصورة المنجلية. طبيعة سجية 480, 534–537 (2011).

فولز ، جيه سي وآخرون. الدور الأساسي لمركب PfRh5 / PfRipr / CyRPA أثناء المتصورة المنجلية غزو ​​كريات الدم الحمراء. ميكروب مضيف الخلية 20, 60–71 (2016).

باين ، ر.أو وآخرون. يحفز التطعيم البشري ضد RH5 الأجسام المضادة المضادة للملاريا التي تمنع تفاعلات الغزو المعقدة لـ RH5. انسايت JCI 2, 96381 (2017).

دوغلاس ، إيه دي وآخرون. تحييد المتصورة المنجلية الميروزويت بالأجسام المضادة ضد PfRH5. J. إمونول. 192, 245–258 (2014).

Chen، L. et al. الأساس الهيكلي لتثبيط غزو كرات الدم الحمراء بواسطة الأجسام المضادة لـ المتصورة المنجلية بروتين CyRPA. eLife 6، e21347 (2017).

فافوزا ، ب. وآخرون. هيكل المستضد المرشح للقاح الملاريا CyRPA ومركبته مع الأجسام المضادة المثبطة لغزو الطفيليات. eLife 6, 20383 (2017).

رايت ، ك.إي وآخرون. هيكل بروتين غزو الملاريا RH5 مع حوض كريات الدم الحمراء وحجب الأجسام المضادة. طبيعة سجية 515, 427–430 (2014).

فوكيه ، ل. وآخرون. المتصورة المنجلية تتيح عدوى مرحلة الكبد والانتقال إلى عدوى مرحلة الدم المستقرة في فئران FRGN KO المتوافقة مع البشر والمتوافقة مع البشر من الدم اختبار الأجسام المضادة المثبطة لمرحلة الدم (متماثل البروتين المرتبط بالخلية الشبكية 5) في الجسم الحي. أمام. إمونول. 9, 524 (2018).

Caskey، M. et al. قمع Viraemia في البشر المصابين بفيروس HIV-1 عن طريق تحييد الجسم المضاد 3BNC117 على نطاق واسع. طبيعة سجية 522, 487–491 (2015).

لينش ، آر إم وآخرون. التأثيرات الفيروسية لإعطاء الجسم المضاد VRC01 المعادل على نطاق واسع أثناء العدوى المزمنة بفيروس العوز المناعي البشري -1. علوم. ترجمة. ميد. 7، 319ra206 (2015).

ديل ، سي وآخرون. يحمي توصيل الجينات الموجهة للأجسام المضادة المتصورة المنجلية تحدي sporozoite في الفئران. بروك. ناتل. أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 111, 12528–12532 (2014).

أولوتو ، إيه وآخرون. النهوض بالصحة العالمية من خلال شراكات التطوير والتجارب السريرية: تقييم عشوائي خاضع للتحكم الوهمي ومزدوج التعمية للسلامة والتحمل والاستمناع للقاح PfSPZ للملاريا لدى الرجال الأصحاء من Equatoguinean. أكون. جيه تروب. ميد. هيغ. 98, 308–318 (2018).

بيرجمان-ليتنر ، إي إس وآخرون. التحصين مع مستضد ما قبل كريات الدم الحمراء CelTOS من المتصورة المنجلية يثير حماية عبر الأنواع ضد التحدي غير المتجانسة مع المتصورة البرغي. بلوس واحد 5، e12294 (2010).

دي بارا ، إي وآخرون. دراسة المرحلة الأولى أ لتقييم سلامة ومناعة لقاح الملاريا الجديد المرشحين ChAd63 CS المدار بمفرده ومع MVA CS. بلوس واحد 9، e115161 (2014).

Collins، K.A، Snaith، R.، Cottingham، M.G، Gilbert، S.C & amp Hill، A.V.S. تعزيز المناعة الوقائية ضد الملاريا بلقاح جزيئي شديد المناعة يشبه الفيروس. علوم. اعادة عد. 7, 46621 (2017).

إيسين ، إم وآخرون. سلامة ومناعة GMZ2: مرشح لقاح الملاريا MSP3-GLURP بروتين الانصهار. مصل 27, 6862–6868 (2009).

Remarque، E.J، Faber، B.W، Kocken، C.H & amp Thomas، A.W نهج يغطي التنوع للتحصين باستخدام المتصورة المنجلية مستضد الغشاء القمي 1 يحث على التعرف على الأليلات واستجابات تثبيط النمو في الأرانب. تصيب. مناعة. 76, 2660–2670 (2008).

Olugbile ، S. وآخرون. إمكانات اللقاح لجزء غير منظم جوهريًا مشتق من مرحلة الدم المرتبطة المتصورة المنجلية بروتين PFF0165c. تصيب. مناعة. 77, 5701–5709 (2009).

Lusingu، J.P et al. سلامة ومناعة مرضية لقاح الملاريا MSP3 المرشح في الأطفال التنزانيين الذين تتراوح أعمارهم بين 12-24 شهرًا. مالار. ج. 8, 163 (2009).

بالاكباك ، إن إم وآخرون. المرحلة 1 ب تجربة عشوائية ودراسة متابعة في أوغندا لمرشح لقاح الملاريا في مرحلة الدم BK-SE36. بلوس واحد 8، e64073 (2013).

نيلسن ، إم إيه وآخرون. تأثير تكوين الوحدة الفرعية ونظام التعبير على استجابة الجسم المضاد الوظيفية في تطوير VAR2CSA على أساس المتصورة المنجلية لقاح الملاريا المشيمي. بلوس واحد 10، e0135406 (2015).

لي ، واي وآخرون.تعزيز نشاط المناعة ومنع انتقال لقاحات الملاريا عن طريق دمج Pfs25 في تقنية IMX313 متعددة المحاكاة. علوم. اعادة عد. 6, 18848 (2016).


شاهد الفيديو: علاج الملاريا (ديسمبر 2022).