معلومة

هل يحدث تبديل الصنف في كل من الخلايا البائية وخلايا البلازما؟

هل يحدث تبديل الصنف في كل من الخلايا البائية وخلايا البلازما؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أفهم أن فئة الخلية تتحول لتغيير نوع الغلوبولين المناعي الذي تنتجه. تنتج الخلية B مستقبلات الخلية B المرتبطة بالغشاء (BCR) بينما تنتج خلية البلازما الشكل المفرز لـ Ig ، وهو الجسم المضاد. الآن ، تختلف الأنماط المتساوية في مناطقها الثابتة وأفترض أن التبديل مهم فقط إذا كان جسمًا مضادًا. (الاختلافات في النفاذية ، والنفاذية ، ومستقبلات الأجسام المضادة ، وما إلى ذلك)

كيف يمكن لمستقبل الخلية البائية (Ig المرتبط بالغشاء) الاستفادة من تبديل الفئة؟ هل يحدث تبديل الفصل حتى في الخلايا البائية المنشطة؟ أم أنها عملية تقتصر على خلايا البلازما؟ قرأت أن BCR يحتوي أيضًا على 5 أنواع متشابهة.

ما هي المعالم الزمنية المحددة التي يحدث فيها تبديل الفئة في خلايا البلازما والخلايا البائية (إذا حدث ذلك)؟


اجابة قصيرة : تتحول فئة الخلايا البائية إلى خلايا بلازما في المركز الجرثومي للعقدة الليمفاوية.

اجابة طويلة :

هناك نوعان من المفاهيم الهامة التي تم تناولها في السؤال. الأول هو هيكل الغلوبولين المناعي - النمط المتماثل والغشاء / النوع القابل للذوبان. والآخر هو نموذج الخلية البائية للمركز الجرثومي. يعد فهم كلا المفهومين شرطًا أساسيًا لفهم إجابة المشكلة.

بادئ ذي بدء ، يمكن أن يكون الغلوبولين المناعي المركب بواسطة الخلايا الليمفاوية إما مرتبطًا بالغشاء (المعروف باسم مستقبل الخلية B (BCR)) أو الجسم المضاد القابل للذوبان. بعد إعادة ترتيب الجينات ، تبدأ الخلية B (التي لا تزال غير ناضجة) في إنتاج IgM / IgD المرتبط بالغشاء. يستمر هذا حتى في الخلية B الناضجة. يحتوي الغشاء المرتبط بـ Ig أو mIg على تسلسل إضافي (راجع الصورة) على طرف الكربوكسيل مضيفًا عددًا قليلاً من متواليات الأحماض الأمينية الكارهة للماء بحيث يتم تثبيته جيدًا في الجزء المقاوم للماء من الغشاء. يوجد أيضًا في النهاية سلسلة من المخلفات المحبة للماء تشارك في إشارات الخلية في اتجاه مجرى النهر.

تبديل الفصل هو عملية تؤدي إلى تغيير في النمط المتماثل لـ Ig الذي تنتجه الخلية. يتضمن تبديل الصنف استئصال الحمض النووي مما يعني أن الخلية لا يمكنها العودة إلى إنتاج Ig بمجرد أن اعتادت على ذلك. وبالتالي يصبح تسلسل الأجزاء الجينية على جين السلسلة الثقيلة مهمًا.

عندما يكون هناك تعرض لأول مرة لمستضد ، فإن الخلايا البائية الناضجة تتبع نموذجًا كلاسيكيًا لمولدات المضادات المعتمدة على الخلايا التائية ، والذي يظهر في هذه الصورة أدناه.

يحدث تبديل الصنف في الخلايا البائية التي تشارك في تفاعل مركز جرثومي ، بعد تنشيط الخلية البائية الساذجة بواسطة مستضد وخلية تائية مشابهة. هناك أيضًا تبديل فئة مستقل في المركز الجرثومي نتجاهله هنا.

بعد أن خضعت الخلية البائية للطفرة الجسدية المفرطة والتبديل الطبقي لجين الغلوبولين المناعي الخاص بها ، فقد يتم أو لا يتم اختيارها بشكل إيجابي للتمييز إلى بلازما بلازما. تتكاثر البلازمات بسرعة قبل التمايز النهائي لخلايا البلازما ، التي تفرز الأجسام المضادة الناضجة ذات التقارب الطبقي. بعبارة أخرى ، يقتصر إعادة تركيب مفتاح الفصل إلى حد كبير على الخلايا B الجرثومية النشطة. تبديل فئة الخلايا B هذه ، كواحدة من العديد من العمليات لإنتاج أجسام مضادة قابلة للذوبان تنتج خلايا البلازما.

خلايا البلازما والخلايا البائية ليست واحدة فقط. تخضع الخلايا البائية لسلسلة من العمليات لتشكيل خلايا البلازما التي تختلف أيضًا في التشكل.

كما سبق ذكره ، يجب أن نتذكر أن تبديل الصنف يتضمن استئصال الحمض النووي المتداخل بين إكسون VDJ المعاد ترتيبها والإكسونات الثابتة التي يتم التبديل إليها ، مما يعني أنه يتم حذفها من الأليل. وبالتالي ، فإن الخلية B التي تحتوي على فئة تحولت من IgM إلى ، على سبيل المثال ، IgG ستحذف exons لسلسلة ثقيلة IgM و IgD على هذا الأليل ، وستقتصر على IgG (أو IgE و IgA ، اللذين يقعان في اتجاه مجرى النهر).

لكن بعد ذلك ، إذا كانت الخلايا البائية التي تحمل IgM قد تحولت بالفعل إلى صنف (إلى نظيراتها المحتملة في اتجاه التيار) ، فكيف يمكن أن تكون الاستجابة المناعية الأولية مهيمنة على IgM؟ كيف يمكن أن تأتي الأجسام المضادة IgM من خلايا البلازما المتبدلة؟

هذا لأن مشهد المركز الجرثومي بأكمله يستغرق وقتًا حتى يحدث ، وفي غضون ذلك ، توجد آليات خارج الجريبات لإنتاج الأجسام المضادة في مكانها في بؤر خارج الجريبات في الطحال أو في الحبال النخاعية للعقد الليمفاوية. نظرًا لأن الأجسام المضادة التي تم تطويرها بطريقة تعتمد على المركز الجرثومي (IgG) هي من خلايا مفرطة التحور جسديًا ، فإن لديها تقاربًا أكبر مع المستضد من IgM الذي تنتجه البلازما المستقلة في المركز الجرثومي.

بشكل عام ، يحتوي BCR على نوعين فقط ، mIgM و mIgD. إذا كان هناك مفتاح الفصل ، فإنها تتحول إلى الأجسام المضادة القابلة للذوبان (IgG / IgA / IgD).

يشير الجسم المضاد الإفرازي هنا إلى الجسم المضاد القابل للذوبان الذي يتم طرده من خلايا الدم البيضاء ، وليس IgA الموجود في إفرازات الجسم.

مرجع ، اعتمادات الصورة:

  1. تستعرض الطبيعة علم المناعة والمراكز الجرثومية: دورها في فسيولوجيا الخلايا البائية والأورام الخبيثة
  2. كوبي المناعة. الطبعة السادسة
  3. المراجعات الرئوية ، استجابات الأجسام المضادة خارج الجريبات

الخلايا التنظيمية المسامية التائية

يؤدي التعرض لمسببات الأمراض إلى إنتاج أجسام مضادة عالية الانجذاب يتم تحفيزها بواسطة الخلايا التائية المساعدة الجريبية (Tfh) في تفاعل المركز الجرثومي. توفر خلايا Tfh كلاً من السيتوكينات التحفيزية والتكلفة للخلايا البائية لتسهيل نضج التقارب ، وإعادة تركيب مفتاح الفصل ، وتمايز خلايا البلازما داخل المركز الجرثومي. في ظل الظروف العادية ، ينتج عن تفاعل المركز الجرثومي أجسامًا مضادة تستهدف بدقة مسببات الأمراض الأجنبية مع الحد من المناعة الذاتية والالتهاب المفرط. من أجل الحصول على هذه الدرجة من التحكم ، يضمن الجهاز المناعي أن يتم تنظيم مساعدة الخلايا البائية التي تتوسطها Tfh محليًا في المركز الجرثومي. يمكن أن تنتقل مجموعة الخلايا الفرعية المنظمة للجريب T (Tfr) التي تم تحديدها مؤخرًا إلى المركز الجرثومي وتمنع تنشيط الخلايا B التي تتوسطها Tfh وإنتاج الجسم المضاد. على الرغم من أن العديد من جوانب بيولوجيا الخلية Tfr لا تزال غير واضحة ، فقد بدأت البيانات الحديثة في تحديد الأدوار المتخصصة لخلايا Tfr في التحكم في تفاعل المركز الجرثومي. نناقش هنا الفهم الحالي لتمايز خلايا Tfr ووظيفتها وكيف توفر هذه المعرفة رؤى جديدة للتنظيم الديناميكي للمراكز الجرثومية ، وتقترح استراتيجيات لقاح أكثر فعالية وطرقًا لعلاج الأمراض التي تتوسط فيها الأجسام المضادة.

الكلمات الدالة: Tfh Tfr مركز جرثومي خلطي مناعة تنظيمية للخلايا التائية.


فئة الخلايا البائية الناضجة التي تم تحويلها إلى IgD تكون ذاتية الحركة في الأفراد الأصحاء

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

اعثر على مقالات بواسطة Koelsch، K. في: JCI | PubMed | منحة جوجل

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

اعثر على مقالات بواسطة Mathias، M. في: JCI | PubMed | منحة جوجل

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

يعد تحديد أصل ومصير الخلايا البائية ذاتية النشاط أمرًا بالغ الأهمية لفهم أمراض المناعة الذاتية وعلاجها. لقد أبلغنا أنه على الرغم من اشتقاقها من الأشخاص الأصحاء ، فإن الأجسام المضادة من الخلايا البائية التي لها صنف تحولت إلى IgD عبر إعادة التركيب الجيني (وبالتالي تحولت إلى فئة الخلايا Cδ [Cδ-CS]) تكون شديدة التفاعل مع المستضدات الذاتية. يرتبط أكثر من نصف الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B بالمضادات الذاتية على خلايا خط الخلايا الظهارية البشرية 2 (HEp-2) أو المستضدات المضادة للنواة ، وربع الحمض النووي مزدوج الشريطة ، وكلا المجموعتين من الأجسام المضادة تكون في كثير من الأحيان متعددة التفاعلات. ومن المثير للاهتمام ، أن بعض خلايا Cδ-CS B قد تراكمت بقايا أساسية في مناطق الجسم المضاد المتغيرة التي تتوسط تفاعل مضاد للحمض النووي من خلال فرط التحول الجسدي والاختيار ، في حين أن خلايا Cδ-CS B الأخرى ذاتية التفاعل بشكل طبيعي. على الرغم من أن النسبة الإجمالية كانت أقل بشكل ملحوظ من خلايا Cδ-CS ، إلا أن 31 ٪ من الأجسام المضادة لخلايا الذاكرة IgG كانت ذاتية إلى حد ما ، وكما هو متوقع ، كانت حوالي 24 ٪ من الأجسام المضادة للخلايا الساذجة ذاتية النشاط. نفسر هذه النتائج للإشارة إما إلى أنه يمكن تحفيز الخلايا البائية ذاتية التنشيط على التحول إلى فئة IgD أو أن الخلايا البائية النشطة التي تستخدم IgD كمستقبل للخلايا البائية لا يتم حذفها بشكل فعال. قد يكون تحديد الآلية التي تكون بها غالبية خلايا Cδ-CS B ذاتية التفاعل مهمًا في فهم آليات التحمل المحيطية وقد يوفر نظرة ثاقبة للوظيفة الغامضة للجسم المضاد IgD.

عادة ما يتم التحكم في الخلايا البائية الذاتية عن طريق الحذف النسيلي (1 ، 2) ، وتحرير المستقبلات (3 ، 4) ، والحساسية النسيليّة (5 ، 6). على الرغم من هذه الآليات ، فإن الخلايا الليمفاوية البائية التي تعبر عن الغلوبولين المناعي السطحي التي يمكن أن ترتبط بالمستضدات الذاتية شائعة إلى حد ما في ذخيرة الخلايا البائية البشرية الناضجة (7 ، 8). معظم المعرفة حول آليات تحمل الخلايا البائية مستمدة من التجارب التي أجريت على الفئران المعدلة وراثيًا والتي تحمل أضدادًا ذاتية معاد تجميعها مسبقًا ، ولا يُعرف الكثير عن مصير الخلايا البائية ذاتية التفاعل لدى البشر. نظرًا لأن الخلايا البائية ذاتية النشاط قد تكون السلائف لتوليد الأجسام المضادة الذاتية المرضية في العديد من أمراض المناعة الذاتية مثل الذئبة الحمامية الجهازية (SLE) أو التهاب المفاصل الروماتويدي ، فإن فهم مصيرها في البشر الأصحاء أمر بالغ الأهمية. يتم تقديم الدليل هنا على أنه في الأشخاص الأصحاء ، تكون الخلايا البائية المحولة إلى النمط النظري IgD ذاتية التأثير في الغالب.

في الخلايا البائية الناضجة التي لم يتم تنشيطها للمستضد (الخلايا الساذجة) ، يتم ترميز الأجسام المضادة IgM و IgD في نفس الوقت بواسطة exons C و Cδ عبر الربط التفاضلي mRNA لنسخة VDJ-Cμ-Cδ واحدة. بعد التنشيط ، يمكن تحفيز الخلايا البائية الساذجة على تبديل الفئة. يتخصص تبديل فئة الغلوبولين المناعي في وظيفة الأجسام المضادة من خلال استبدال exons الجيني IgM و IgD (C μ و Cδ) بإكسونات IgG (Cγ) أو IgA (Cα) أو IgE (Cε) عن طريق إعادة التركيب الجيني. ومع ذلك ، فإن نسبة صغيرة من الخلايا البائية (1٪ - 3٪) تتحول فعليًا من Cμ إلى Cδ على المستوى الجيني باستخدام مناطق التبديل المشفرة بين Cμ و Cδ exons وينتج عنها النمط الظاهري IgM - IgD +. يُشار إلى هذه الخلايا بتبديل فئة الخلايا البائية إلى خلايا Cδ (Cδ-CS) (9 ، 10) ويبدو أنها نتجت عن استجابة مناعية تنشط بالمستضد لأنه يمكن عزلها كخلايا GC ، فهي نسيلي للغاية (مما يشير إلى انقسام الخلايا) ، والجينات المتغيرة لها طفرات جسدية واسعة النطاق (11 ، 12). تعبر خلايا Cδ-CS B أيضًا في الغالب عن سلاسل l-light ويمكن أن تتمايز في خلايا الذاكرة والبلازما (13 ، 14). يشير الاستخدام السائد لسلاسل l-light إلى أن معظم الأجسام المضادة IgD المفرزة في الأمصال البشرية (

1 ٪ من جميع الأجسام المضادة) مأخوذة من خلايا Cδ-CS B ، حيث أن IgD في الدم هو أيضًا في الغالب l-light chain المشفرة (15). تستخدم خلايا Cδ-CS B مجموعة فرعية من جينات المنطقة المتغيرة للجلوبيولين المناعي المرتبطة منذ فترة طويلة بالنشاط الذاتي (16) وربما تكون قد تعرضت لتحرير المستقبل أثناء تطور الخلايا البائية (12 ، 16 ، 17). تشير هذه الملاحظات المختلفة إلى أن خلايا Cδ-CS B إما تتولد عن طريق آلية تحمل مناعي أو أنها تتهرب من التحمل المناعي. لقد شرعنا هنا في تحديد ما إذا كانت خلايا Cδ-CS B تعمل تلقائيًا في البشر الأصحاء.

لقد وجدنا أن الخلايا الليمفاوية Cδ-CS B البشرية كانت ذاتية الحركة ، حيث أنها تشفر الأجسام المضادة التي غالبًا ما تربط خلايا خط الخلايا الظهارية البشرية 2 (HEp-2) ، ومضادات النوى (ANAs) ، والحمض النووي أحادي الجديلة (ssDNA) ، والحمض النووي المزدوج (DNA) ( dsDNA) ، وكانوا في كثير من الأحيان متعدد التفاعلات. تمشيا مع تقرير حديث من تيلر وزملائه ، كان لخلايا ذاكرة IgG البشرية نشاط ذاتي منخفض الكثافة وكانت تفاعلية متعددة بتردد عالٍ بشكل مدهش (8) ، على الرغم من أن تواتر وشدة ارتباط المستضدات الذاتية كانت أقل بكثير من تلك الموجودة في خلايا Cδ-CS B . ومن المثير للاهتمام ، أن التفاعل المضاد للحمض النووي كان إما مشفرًا بشكل طبيعي بواسطة الجينات المتغيرة غير المحورة أو المكتسبة أثناء الاستجابة المناعية عبر الطفرات الجسدية. وبالتالي ، فإن الأجسام المضادة للدنا الناتجة على ما يبدو عن الاستجابة المناعية قد تكون قادرة على الظهور في الأشخاص الأصحاء. توفر هذه النتائج تقدمًا مهمًا في فهم آليات التحمل التي تتحكم في الخلايا البائية ذاتية التفاعل التي قد تتعطل في المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية.

تحديد خصوصية الجسم المضاد لخلايا Cδ-CS B. خلايا Cδ-CS B هي سلالة فريدة موجودة في اللوزتين والدم التي هي IgD + IgM - ويمكن عزلها كخلايا GC (CD38 +) أو خلايا بلازما (CD38 ++) من اللوزتين البشرية (11 ، 14) (الشكل 1 أ) أو كخلايا ذاكرة (CD27 +) من الدم المحيطي (13) (الشكل 1 ب). من أجل اختبار خصوصية خلايا Cδ-CS B ، تم إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المؤتلفة من جينات المنطقة المتغيرة لخلايا مفردة معزولة. استخدمنا استراتيجية معدلة مشابهة لتلك الموصوفة في التقارير السابقة (7 ، 18) ، حيث تم فرز الخلايا البائية المفردة عن طريق قياس التدفق الخلوي إلى 96 طبقًا جيدًا وتضخيم الجينات المتغيرة بواسطة RT-PCR متعدد الخلايا وحيدة الخلية لتحديد واستنساخ جينات الغلوبولين المناعي ثقيلة السلسلة وسلسلة خفيفة من تشكيلة عشوائية من الخلايا (الجينات المتغيرة المستخدمة مدرجة في المواد التكميلية للجدول 1 التكميلي المتاحة عبر الإنترنت مع هذه المقالة doi: 10.1172 / JCI27628DS1). ثم تم استنساخ هذه الجينات المتغيرة في نواقل التعبير والتعبير عنها بمناطق IgG الثابتة في خط الخلية البشرية 293A. تم إنتاج ما مجموعه 100 من الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS GC B (IgD + IgM - CD38 + الشكل 1A) معزولة من 3 متبرعين باللوزتين (بواسطة المتبرع ، ن = 45 و 34 و 21 جسمًا مضادًا) ومقارنة بـ 78 جسمًا مضادًا من خلايا ب ساذجة من 3 متبرعين (IgD + IgM + CD38 - حسب المتبرع ، ن = 37 و 27 و 14 جسمًا مضادًا) و 64 جسمًا مضادًا من خلايا ذاكرة IgG من 4 متبرعين (IgD - IgM - CD27 + حسب المتبرع ، ن = 25 و 12 و 7 و 20 من الأجسام المضادة). من الجدير بالملاحظة أن الخلايا البائية الساذجة كما تم تعريفها هنا قد تحتوي على مجموعة صغيرة من الخلايا البائية التي كانت خلايا انتقالية ولكنها لا تزال تمثل في الغالب الذخيرة الساذجة للخلايا البائية البشرية.كان من المهم تجنب تلويث الخلايا البائية الساذجة بخلايا الذاكرة IgM + D + - نظرًا لأن خلايا ذاكرة IgM من البشر غير نشطة بشكل متكرر (19) ، فإن التلوث قد يجعلنا نقلل من التكرار الحقيقي للأجسام المضادة المكتشفة. بالإضافة إلى تحليل خلايا CD27 ، لتجنب تلويث خلايا الذاكرة IgD + IgM + ، استخدمنا فقط الأجسام المضادة من الخلايا الساذجة التي لا تحتوي على طفرات جسدية (أي التي كان لها تردد أقل من تبادل أساسي واحد لكل جين متغير) . تم التحقق من هوية خلايا Cδ-CS B المصنفة بناءً على الخصائص المعروفة لذخيرة الجينات المتغيرة بما في ذلك الطفرات الجسدية واسعة النطاق (الشكل 1C) (11) والاستخدام الوفير لـ Jح6 قطعة الجينات (الشكل 1 د) (16). كنا مهتمين بمعرفة ما إذا كانت الجينات المتغيرة من خلايا ذاكرة الدم المحيطية Cδ-CS ، كما تنبأت نتائج كلاين وزملائه (13) ، مشابهة لخلايا Cδ-CS GC وخلايا البلازما. في الواقع ، كان للجينات المتغيرة المستنسخة عشوائيًا من خلايا ذاكرة Cδ-CS أيضًا طفرات جسدية مفرطة وتفضيلًا لاستخدام J المرتبط بالمناعة الذاتية.ح6 شرائح جينية (الشكل 1 ، C و D) (7 ، 16 ، 20). كما هو موضح أدناه ، تم اختبار الأجسام المضادة من خلايا الذاكرة Cδ-CS GC ، والساذجة ، و IgG للتفاعل مع خلايا HEp-2 عن طريق التألق المناعي وربط ANA عن طريق المقايسات المناعية التجارية وتم فحصها بواسطة ELISA للتفاعل مع الحمض النووي أو التفاعل المتعدد.

النمط الظاهري لخلايا Cδ-CS B. (أ و ب) بوابات فرز التدفق الخلوي المستخدمة لعزل أنواع الخلايا البائية المختلفة التي تم تحليلها من الدم أو اللوزتين ، بما في ذلك خلايا Cδ-CS GC (IgD + IgM - CD38 +) ، وخلايا B ساذجة (IgD + IgM + و CD38 - اللوزتين أو CD27 - الدم ) وخلايا الذاكرة B (IgD - CD27 + من مربع "الذاكرة" في ب). كمبيوتر شخصي ، خلية بلازما. تحليل تردد الطفرة الجسدية (ج) واستخدام Jح6 قطعة الجينات (د) يوضح أن جميع مجموعات الخلايا الفرعية Cδ-CS B وتلك التي تم التعبير عنها هنا فريدة بالمثل من خلايا IgG و IgM B. (ج) الموضح هو النسبة المئوية لـ V.ح الجينات مع العدد المشار إليه من الطفرات لكل مجموعة فرعية تم تحليلها. (د) استخدام أنواع مختلفة من J.ح شرائح الجينات. تم تضمين نصوص من 625 جينات متغيرة لخلايا Cδ-CS GC من 11 متبرعًا (بواسطة المتبرع ، ن = 44 ، 44 ، 57 ، 44 ، 62 ، 34 ، 225 ، 59 ، 16 ، 21 ، 19) ، 78 جينات متغيرة لخلايا البلازما Cδ-CS من متبرع واحد ، 124 جينات متغيرة لخلايا الذاكرة Cδ-CS من 4 متبرعين (بواسطة جهات مانحة، ن = 20 و 20 و 28 و 56) و 620 IgG GC والذاكرة وجينات متغيرة لخلايا البلازما من 14 متبرعًا (حسب المتبرع ، ن = 18 و 28 و 174 و 40 و 108 و 37 و 25 و 21 و 18 و 22 و 15 و 24 و 19 و 71) ، 681 جينات IgM GC والذاكرة ومتغير خلايا البلازما من 18 متبرعًا (حسب المتبرع ، ن = 18 و 91 و 51 و 158 و 17 و 10 و 16 و 48 و 30 و 19 و 28 و 11 و 36 و 29 و 13 و 22 و 20 و 64) ، و 267 جينًا متغيرًا ساذجًا من 6 متبرعين (حسب المتبرع) و ن = 47 و 30 و 24 و 15 و 24 و 127).

ترتبط الأجسام المضادة المشتقة من خلايا Cδ-CS B بالمستضدات الذاتية. اختبار HEp-2 Slide هو اختبار التشخيص السريري الكلاسيكي المستخدم لاكتشاف النشاط الذاتي وربط الأجسام المضادة للنواة بواسطة الأجسام المضادة في المصل كما يظهر في أمراض المناعة الذاتية مثل مرض الذئبة الحمراء. يستخدم هذا الاختبار استخدام الخلايا من خط خلية ورم ظهاري بشري مثبت على شريحة مجهرية ، ثم يتم اكتشافه عن طريق التألق المناعي بعد الحضانة بالمصل (21). لتحديد ما إذا كانت الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B مرتبطة بمستضدات ذاتية بتردد أعلى من تلك الموجودة في الخلايا الساذجة أو خلايا الذاكرة B ، تم اختبار الأجسام المضادة من كل مجموعة من أجل التفاعل مع المستضدات على خط خلايا HEp-2. بالإضافة إلى ذلك ، تم فحص جميع الأجسام المضادة للارتباط بـ ANA باستخدام مقايسة الممتز المناعي التجارية المصممة للكشف عن تفاعل ANA السريري (مجموعة QUANTA Lite ANA ، INOVA Diagnostics Inc.). تم تسجيل الأجسام المضادة التي كان لها ارتباط قابل للاكتشاف أكبر من تلك الموجودة في مصل التحكم السلبي في مقايسة التألق المناعي HEp-2 على أنها إيجابية. لمقايسة ANA ، تم إنشاء قيمة الامتصاصية التي سمحت بإجراء تقييم كمي أكثر. نظرًا لأن الخلايا الساذجة كانت المجموعة الضابطة ، فقد اعتبرنا أن الأجسام المضادة موجبة لـ ANA إذا أنتجت امتصاصًا بتركيز 25 ميكروغرام / مل أكبر من متوسط ​​± SD لامتصاص جميع الأجسام المضادة للخلايا الساذجة. كان متوسط ​​امتصاص الأجسام المضادة الساذجة ± SD 0.4293 ± 0.2235 OD415، لذا فإن الاختبارات الإيجابية كانت تحتوي على نسبة امتصاص 0.6829 أو أكثر. أظهرت التقارير السابقة أنه عند تركيزات من 25 إلى 50 ميكروغرام / مل ، فإن حوالي 70 ٪ من الأجسام المضادة من الخلايا B غير الناضجة المبكرة (قبل الاختيار) تربط مستضدات خلايا HEp-2 ، في حين أن 18 ٪ فقط من الأجسام المضادة من الخلايا البائية الناضجة الناضجة تفاعل ملحوظ HEp-2 (7). وجدنا تكرارًا مشابهًا للأجسام المضادة التفاعلية HEp-2 و ANA من الخلايا الساذجة التي تم اختبارها (16 من 70 ، أو 23٪ الشكل 2A). من المثير للدهشة ، ولكن بما يتفق مع تقرير حديث عن تفاعل الجسم المضاد IgG البشري (8) ، فإن 27 ٪ (17 من 64) من الأجسام المضادة من خلايا ذاكرة IgG كانت تفاعلية HEp-2 أو ANA. في المقابل ، تفاعلت 60٪ (53 من 89) من الأجسام المضادة المشتقة من Cδ-CS مع مستضدات HEp-2 أو ANA. كانت الزيادة في تواتر الأجسام المضادة التفاعلية للخلايا HEp-2 من خلايا Cδ-CS مقارنة بتلك الموجودة في الخلايا الساذجة أو خلايا الذاكرة IgG مهمة للغاية عند مقارنة جميع الأجسام المضادة ككل (الشكل 2A-2 ، ص & lt 0.0001) وعند مقارنتها بمتوسط ​​التكرار بين المتبرعين (الشكل 2B للطالب ر اختبار، ص & lt 0.05 مقابل الأجسام المضادة الساذجة أو IgG).

غالبًا ما تكون الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B ذاتية النشاط. (أ) الأجسام المضادة المشتقة من Cδ-CS شديدة التفاعل مع مستضدات HEp-2 و ANA مقارنة بالأجسام المضادة الساذجة والمشتقة من IgG. تضمنت الأجسام المضادة التي تم اختبارها 89 جسمًا مضادًا لـ Cδ-CS (من 3 متبرعين ، ن = 37 و 18 و 34) ، 70 من الأجسام المضادة الساذجة للخلايا البائية (من 3 متبرعين ، ن = 39 و 14 و 17) و 64 جسمًا مضادًا من خلايا ذاكرة IgG (من 4 متبرعين ، ن = 25 و 5 و 12 و 20). تم تحديد تواتر الأجسام المضادة التفاعلية HEp-2 عن طريق فحص الأجسام المضادة عن طريق التألق المناعي باستخدام شرائح HEp-2 المعدة تجاريًا (الشكل التكميلي 1) ، وتكرار الأجسام المضادة التفاعلية لـ ANA باستخدام المقايسات المناعية لـ ANA التجارية (انظر الطرق). تم اعتبار الأجسام المضادة التي تربط شرائح HEp-2 بشكل أكثر كثافة من أمصال التحكم السلبية التي توفرها الشركة المصنعة أو التي تربط ANA بشكل أكثر كثافة من متوسط ​​± SD لجميع الأجسام المضادة للخلايا الساذجة إيجابية في الفحصين. أشارت النتائج إلى أن حدوث النشاط الذاتي كان أعلى بشكل ملحوظ في الأجسام المضادة المشتقة من Cδ-CS مقارنة بالأجسام المضادة الساذجة أو المشتقة من IgG (χ 2 ، ص & lt 0.0001). (ب) تردد تفاعل HEp-2 و ANA حسب الجهة المانحة. ترتبط الأجسام المضادة لـ Cδ-CS أكثر من الأجسام المضادة IgG أو الأجسام المضادة المشتقة من الخلايا الساذجة (Student’s ر اختبار، ص & lt 0.05). (ج) على الرغم من أن خلايا IgG كانت بشكل عام أكثر تفاعلًا في فحوصات ANA من الخلايا الساذجة ، إلا أن التفاعل كان منخفض الكثافة. في المقابل ، يرتبط عدد أكبر بكثير من الأجسام المضادة لـ Cδ-CS بـ ANA بكثافة عالية. تشير الخطوط الحمراء إلى متوسط ​​امتصاص ANA. تشير الخطوط المتقطعة إلى عتبات التسجيل الإيجابي (يشير الخط المتقطع السفلي إلى ANA + التي تعني الخلية الساذجة ± يشير الخط المتقطع العلوي SD إلى ارتفاع ANA) تم تحقيق مستوى الامتصاص العالي بشكل أكثر شيوعًا للأجسام المضادة Cδ-CS.

ترتبط الأجسام المضادة Cδ-CS أيضًا بـ ANA (الشكل 2C) ومستضدات HEp-2 (الشكل التكميلي 1) بكثافة أكبر من الأجسام المضادة لخلايا الذاكرة الساذجة أو IgG. تم اختبار أحد عشر بالمائة من الأجسام المضادة لـ Cδ-CS المرتبطة بـ ANA بكثافة عالية بشكل خاص (ANA عالي) مقارنة بـ 3٪ من IgG ولا يوجد أي من الأجسام المضادة الساذجة (الشكل 3C-2 ، ص = 0.05). من الجدير بالملاحظة أن ما يقرب من نصف الأجسام المضادة IgG لها ارتباط منخفض المستوى بمستضدات ANA التي كانت أكبر من تلك الموجودة في الأجسام المضادة الساذجة ولكن ليس أكثر من SD المتوسط ​​وبالتالي تم تسجيلها على أنها سلبية. تبين مؤخرًا أن هذا التفاعل الطفيف لخلايا ذاكرة IgG ناتج عن الطفرات الجسدية المتراكمة (8) وتسبب في زيادة متوسط ​​الامتصاص بشكل عام. كانت خلايا Cδ-CS بدورها تتمتع بأكبر متوسط ​​كثافة ربط ANA (الشكل 2C 0.4593 ± 0.2235 OD415 للخلايا الساذجة ، 0.6691 ± 0.5092 OD415 لـ IgG و 0.8004 ± 0.6906 OD415 للأجسام المضادة Cδ-CS). أخيرًا ، كانت المستضدات الذاتية المرتبطة بـ HEp-2 متغيرة وتضمنت أنماطًا هيوليًا بالإضافة إلى أنماط ANA الكلاسيكية (الشكل التكميلي 1) ، وبالتالي فإن التفاعل الذاتي لا يستهدف مستضدًا ذاتيًا واحدًا. في الختام ، فإن الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B عادة ما تربط مستضدات مختلفة على خلايا HEp-2 وفي فحوصات ANA التجارية ، مما يدل على أنها ذاتية التفاعل بشكل عام.

تم قياس الارتباط بـ ssDNA أو dsDNA أو LPS أو الأنسولين بواسطة الأجسام المضادة المعبر عنها بواسطة ELISA. درجة الارتباط بألواح ميكروتيتر المغلفة بالمستضد (الامتصاصية [OD415]) بتركيزات الأجسام المضادة من 6.67 × 10 –8 ، 1.67 × 10 –8 ، 4.17 × 10 –9 ، و 1.04 × 10 –9 م (وهي 1 ميكروغرام / مل وثلاث تخفيفات متسلسلة 4 أضعاف ، x محور). تشتمل جميع ELISA على 3H9 (خطوط حمراء مع الماس) و H241 (خطوط حمراء مع مربعات) أجسام مضادة أحادية النسيلة ذات مقاومة عالية ومتوسطة للحمض النووي أو تفاعل متعدد ، على التوالي. تم تطبيع المقايسات على أساس امتصاص الجسم المضاد 3H9. تشير النسب المئوية إلى عدد الأجسام المضادة التي تم تسجيلها على أنها إيجابية. إجمالي 78 جسمًا مضادًا من الخلايا البائية الساذجة المعزولة من 3 متبرعين (عن طريق المتبرع ، ن = 37 و 27 و 14 جسمًا مضادًا) تمت مقارنتها مع 100 جسم مضاد من خلايا Cδ-CS B من 3 متبرعين (بواسطة المتبرع ، ن = 45 و 34 و 21 جسمًا مضادًا) و 64 جسمًا مضادًا من خلايا ذاكرة IgG من 4 متبرعين (عن طريق المتبرع ، ن = 25 و 12 و 7 و 20 من الأجسام المضادة). تمثل الخطوط الزرقاء العتبات الإيجابية التقريبية المحددة عن طريق حساب متوسط ​​± 2 SD للأجسام المضادة الساذجة (انظر النتائج).

كثيرًا ما ترتبط الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B البشرية بالحمض النووي أحادي الجديلة ومزدوج الشريطة. السمة المميزة للنشاط الذاتي في مرض الذئبة الحمراء هي إنتاج الأجسام المضادة التي تتفاعل مع الحمض النووي ، وخاصة الحمض النووي الريبي. من أجل إجراء مزيد من التقييم للنشاط الذاتي المحتمل لسلالة Cδ-CS مقارنة بخلايا الذاكرة B الساذجة أو IgG ، تم تقييم ارتباط الحمض النووي بواسطة ELISA. تم اختبار ارتباط الحمض النووي للأجسام المضادة المختلفة عند 1 ميكروغرام / مل و 3 تخفيفات تسلسلية إضافية 4 أضعاف. يتم عرض منحنيات ربط التشبع في الشكل 3. تم تحديد تقارب ربط مضاد للحمض النووي عن طريق تركيب المنحنى. تم تسجيل الأجسام المضادة ذات الامتصاص المحسوب لتركيز 1 ميكروغرام / مل الذي كان 2 SD أعلى من متوسط ​​الامتصاص لـ 95 ٪ من الأجسام المضادة الساذجة عند هذا التركيز على أنها إيجابية ضد الحمض النووي (الشكل 3). للمقارنة باستخدام نفس نظام التعبير ، تم إنتاج الجينات المتغيرة التي تشفر 2 من الأجسام المضادة المميزة جيدًا والتي تُستخدم عادةً لدراسة تفاعل مضاد الحمض النووي على هيئة فأر خيالي / أحادي النسيلة IgG-مؤتلف بشري (الشكل 3) ، بما في ذلك 3H9 ، يستخدم كجينات محورة لاكتشاف تحرير المستقبلات (3) ، و H241 (22). وبالتالي ، يمكن مقارنة هذه الأجسام المضادة الكلاسيكية المضادة للدنا ومتعددة التفاعل مباشرة مع كواشف الكشف المتطابقة مع الأجسام المضادة البشرية المختبرة هنا. تم تطبيع جميع ELISA إلى الجسم المضاد للتحكم 3H9 المتضمن في كل لوحة ELISA.

تكون الأجسام المضادة التي تتفاعل مع ssDNA أكثر شيوعًا في الأفراد المصابين بأمراض المناعة الذاتية مقارنة بالأفراد الأصحاء ، ومع ذلك ، فهي لا تُشخص الحالة المرضية. كما هو مبين في الشكل 3 ، 8 من 78 (10٪) من الأجسام المضادة المنتجة من الخلايا البائية الساذجة كانت تفاعلية مع ssDNA. هذا يتفق مع تقرير سابق من Wardemann et al. حيث تم تحليل أجسام مضادة من 93 خلية بائية ساذجة منها عدة جزيئات ssDNA مرتبطة (7). تردد أكبر (9 من 64 ، أو 14٪) من الأجسام المضادة من خلايا ذاكرة IgG المرتبطة بـ ssDNA. في المقابل ، 21٪ (21 من 100) من الأجسام المضادة Cδ-CS تفاعلت مع ssDNA (الشكل 3 χ 2 ، ص = 0.05 لـ Cδ-CS مقابل ساذج ص = ليس مهمًا لـ Cδ-CS مقابل ذاكرة IgG).

والأكثر أهمية من الأجسام المضادة لـ ssDNA هي الأجسام المضادة لـ dsDNA ، لأنها تشير على الأرجح إلى علم الأمراض (23 ، 24). كانت الأجسام المضادة التي تتفاعل مع dsDNA أقل تواتراً من الخلايا الساذجة (6٪ ، أو 5 من 78) وخلايا الذاكرة IgG B (14٪ ، 9 من 64 الشكل 3) من خلايا Cδ-CS B. كانت الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS أكثر احتمالًا بمقدار الضعف لربط dsDNA من الأجسام المضادة من الخلايا الساذجة (21 من 100 ، أو 21 ٪ 2 ، ص = 0.006 لـ Cδ-CS مقابل ساذج). مرة أخرى ، نظرًا لأن الأجسام المضادة IgG تميل إلى أن تكون متعددة التفاعلات إلى حد ما (8) ، على الرغم من زيادة بنسبة 50٪ ، فإن الأجسام المضادة لـ Cδ-CS لم تربط الحمض النووي الريبي بشكل كبير بشكل متكرر. التباين بين الجهات المانحة لجميع فحوصات النشاط الذاتي مبين في الشكل 4 أ. كما لاحظ تيلر وزملاؤه سابقًا ، تحتوي حجرة الذاكرة IgG على مستويات متفاوتة على نطاق واسع من التفاعل المضاد للحمض النووي (8). تم أيضًا اختبار الأجسام المضادة التي تربط dsDNA للارتباط مع الخلايا الحركية لـ كريثيديا لوسيليا، لأن هذا الاختبار أكثر صرامة ويعتبر المعيار الذهبي للكشف عن تفاعل dsDNA في التشخيص السريري لـ SLE. بشكل عام ، كانت هناك مراسلات جيدة مع نتائجنا من ELISA ، حيث أن الأجسام المضادة ذات التقارب العالي لـ dsDNA بواسطة ELISA مرتبطة أيضًا كريثيديا kinetoplasts (البيانات غير معروضة). وهكذا ، على غرار نتائج فحوصات ELISA ، يرتبط أحد الأجسام المضادة الساذجة والعديد من الأجسام المضادة IgG المضادة للحمض النووي كريثيديا كان لدى kinetoplasts عالية الكثافة وأخرى من الأجسام المضادة IgG ارتباط يمكن اكتشافه بشكل طفيف. أيضًا كما تنبأت فحوصات ELISA ، ترتبط 10 من الأجسام المضادة Cδ-CS كريثيديا كان لدى kinetoplasts والعديد من الآخرين ارتباط قابل للاكتشاف ولكن منخفض الكثافة. من هذه التجارب ، نستنتج أن خلايا Cδ-CS B غالبًا ما تكون أكثر تفاعلًا مع ssDNA و dsDNA أكثر من الخلايا B الساذجة ، وأن خلايا Cδ-CS B تميل إلى أن تكون أكثر تفاعلًا من الأجسام المضادة IgG.

التباين بين الجهات المانحة وتواتر التفاعلات المتعددة. (أ) يعني ± SEM للجهات المانحة للفحوصات المختلفة التي تم إجراؤها. (ب) النسبة المئوية للأجسام المضادة من كل مجموعة (خلايا Cδ-CS B أو خلايا B ساذجة أو خلايا ذاكرة IgG B) التي تربط 0-1 أو 2 أو 3 أو جميع المستضدات الأربعة المختبرة (ssDNA و dsDNA و LPS والأنسولين) . تُعرَّف الفعالية المتعددة على أنها ارتباط أكثر من مولد ضد واحد. يشير الجزء الأصفر من الرسم البياني إلى النسبة المئوية التي ترتبط بمستضد واحد وبالتالي لم تكن تفاعلية متعددة. دلالة إحصائية (χ 2 ، ص = 0.04) لـ Cδ-CS مقابل الأجسام المضادة للخلايا B الساذجة.

عادة ما تكون الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B متعددة التفاعلات. لتحديد ما إذا كانت خلايا Cδ-CS B تميل إلى التعبير عن أجسام مضادة متعددة التفاعلات تتفاعل مع العديد من المستضدات الذاتية وغير الذاتية ، قمنا أيضًا باختبار التفاعل مع الأنسولين البشري المؤتلف وعديد السكاريد الدهني من ه. القولونية. كما هو مبين في الشكل 4 ب ، أظهر عدد أكبر بشكل ملحوظ من خلايا Cδ-CS - من الأجسام المضادة المشتقة من الخلايا الساذجة تفاعلية متعددة ، ولكن ليس أكثر من الأجسام المضادة المشتقة من خلايا IgG. في حين أن 20٪ (20 من 100) من الأجسام المضادة المشتقة من خلية Cδ-CS مرتبطة بما لا يقل عن 2 من المستضدات بواسطة ELISA ، فإن الأجسام المضادة أقل بكثير من الخلايا الساذجة (9٪ ، أو 7 من 79 2 ، ص = 0.039) مع 2 أو أكثر من المستضدات. بالنسبة لخلايا الذاكرة IgG ، كان حدوث تفاعل متعدد أقل من Cδ-CS (16٪ مقابل 20٪ ، أو 10 من 64 مقابل 20 من 100) ومع ذلك ، لم يتم الوصول إلى الأهمية. في الختام ، كانت الأجسام المضادة من الخلايا البائية التي تحولت صنفها إلى IgD أو IgG متعددة التفاعلات بشكل عام.

إجمالاً ، مع الأخذ في الاعتبار التردد العالي لتفاعل HEp-2 و ANA وتكرار مضادات الحمض النووي والتفاعل المتعدد ، خلصنا إلى أن 56 ٪ من الأجسام المضادة لـ Cδ-CS كانت ذاتية التأثير. وهكذا كانت خلايا Cδ-CS ذاتية النشاط أكثر بمرتين من الأجسام المضادة للخلايا الساذجة (24 ٪ ذاتية التفاعل ، χ 2 ، ص & lt 0.0001) و 1.8 ضعفًا أكثر تواترًا من الأجسام المضادة المشتقة من خلايا IgG (31٪ ذاتي الفعالية ، χ 2 ، ص & lt 0.001). من هذا التحليل ، خلصنا إلى أن خلايا Cδ-CS B عادة ما تكون ذاتية النشاط.

يحدث تبديل فئة IgD في كل من الخلايا البائية ذات الأجسام المضادة الطبيعية والخلايا ذات النشاط الذاتي الناتج عن فرط الطفرات الجسدية. من الممكن أن يكون التبديل الطبقي إلى IgD قد حدث فقط من أجل النشاط الذاتي الذي تم إدخاله أثناء الاستجابات المناعية بسبب الطفرات الجسدية المفرطة المميزة لخلايا Cδ-CS B (الشكل 1C) (11). وجد تقرير حديث من تيلر وزملاؤه تواترًا مرتفعًا بشكل مدهش لخلايا الذاكرة ب IgG متعددة التفاعلات ، وكان التفاعل عادةً ناتجًا عن فرط الطفرات الجسدية المتراكمة (8). بدلاً من ذلك ، من المعقول أن يكون التبديل الطبقي إلى IgD قد حدث قبل حدوث طفرة جسدية ومستقل عن تفاعل GC الطبيعي. تمشيا مع هذا التخمين ، لقد أوضحنا سابقًا أن خلايا Cδ-CS B تتراكم الطفرات الجسدية المستهدفة التي تعطل النشاط الذاتي الطبيعي للأجسام المضادة المشفرة بواسطة V.ح4-34 قطعة الجينات (16). اقترح هذا الاكتشاف أن تراكم فرط الطفرات الجسدية المفرطة في الجينات المتغيرة لخلايا Cδ-CS B ربما يكون ناتجًا عن الضغط الانتقائي لتغيير الأحماض الأمينية التي تسبب النشاط الذاتي الطبيعي بالإضافة إلى زيادة التقارب مع المستضدات الأجنبية. من أجل الحصول على نظرة ثاقبة حول أصل الخلايا البائية ذاتية النشاط التي تم تحويلها إلى فئة IgD ، قمنا بتمييز دور الطفرة الجسدية في التوسط في النشاط الذاتي. حقيقة أن 11 من 100 (11٪) من الأجسام المضادة لـ Cδ-CS التي تم التعبير عنها كانت من جينات متغيرة غير محفرة سمحت لنا بتحديد ما إذا كانت الخلايا البائية التي تم تحويلها إلى فئة IgD يمكن أن يكون لها نشاط ذاتي طبيعي (ليس بسبب الطفرات). لاحظ أن الجينات المتغيرة التي ترمز هذه النسخ كانت مشابهة لتلك الموجودة في معظم الأجسام المضادة لـ Cδ-CS مع الاستخدام التفضيلي لـ Jح6 مقطع جيني ، مناطق تحديد تكاملية طويلة 3 [CDR3s] ، واستخدام سلسلة l-light (البيانات غير معروضة). كما هو مبين في الشكل 5 أ ، كانت ترددات النشاط الذاتي لمستضد HEp-2 ، والربط بـ dsDNA ، وتعدد الاستجابة متشابهة في الأجسام المضادة المتحولة وغير المطفرة من خلايا Cδ-CS B وكانت أعلى من تواتر الأجسام المضادة الذاتية من الخلايا الساذجة وخلايا ذاكرة IgG . قدم هذا التحليل أيضًا التحقق من أن هذه الحيوانات المستنسخة Cδ-CS ذات جينات المنطقة المتغيرة غير المطفرة لا تلوث الخلايا الساذجة. بالإضافة إلى ذلك ، أشارت مقارنة التتر المضاد للحمض النووي مع تكرار بدائل الأحماض الأمينية إلى عدم وجود ارتباط بين تقارب dsDNA وتراكم الطفرات الجسدية ، حيث تميل التتر إلى أن تكون أعلى في النسخ العديدة التي لا تحتوي على طفرات (الشكل 5 ب). ). من هذه الملاحظات ، خلصنا إلى أن فئة الخلايا التي تم تحويلها إلى IgD يمكنها التعبير بشكل طبيعي عن أجسام مضادة ذاتية التفاعل (مشفرة بالخط الجرثومي) مستقلة عن فرط الطفرات الجسدية.

يمكن أن يحدث Cδ-CS للخلايا التي تعبر عن الأجسام المضادة ذاتية الحركة (الطبيعية) وكذلك تلك التي اكتسبت نشاطًا ذاتيًا عبر الطفرات الجسدية. (أ) تُظهر الأجسام المضادة Cδ-CS المشفرة بواسطة جينات متغيرة (سلالة جرثومية) مستويات من نشاط HEp-2 الذاتي ، وربط الحمض النووي ، وتعدد تفاعلات مماثلة لتلك الموجودة في الجينات المتغيرة الطافرة جسديًا. تظهر النسب المئوية للأجسام المضادة من كل مجموعة سكانية فرعية. (ب) تم استخدام منحنيات ملزمة من 1 ميكروغرام / مل من الأجسام المضادة للحمض النووي من خلايا Cδ-CS B إلى الحمض النووي لحساب الامتصاص (النقاط الزرقاء).أظهرت مقارنة هذه الامتصاصية مع تكرار بدائل الأحماض الأمينية (القضبان الحمراء) أنه لا يوجد ارتباط بين تقارب dsDNA وتراكم الطفرات الجسدية. تم إرجاع الجينات المتغيرة للنسخ 14 و 17 (العلامات النجمية) إلى تسلسل السلالة الجرثومية لتحديد ما إذا كانت الطفرات الجسدية قد تسبب ارتباطًا بالحمض النووي. (جيتم فقدان ارتباط الحمض النووي عندما يتم التعبير عن اثنين من الأجسام المضادة لـ DNA Cδ-CS (استنساخ 14 ، استنساخ مربع أزرق 17 ، دائرة زرقاء) من جينات متغيرة عادت إلى متواليات غير محفزة للخط الجرثومي (استنساخ 14 ، استنساخ مربع أسود 17 ، دائرة سوداء). تم تقييم الارتباط المضاد للحمض النووي بواسطة ELISA (الامتصاص [OD415]) نسبة إلى الجسم المضاد أحادي النسيلة 3H9 ذو التقارب العالي للحمض النووي (الخط الأحمر). GL ، خط جرثومي.

يعتبر الأرجينين أهم بقايا للربط المضاد للحمض النووي (25 ، 26). كانت الأجسام المضادة ذات التفاعل الطبيعي مع الحمض النووي وعدد من الأجسام المضادة الأخرى تحتوي على أرجينينات تم إدخالها إلى CDR3 عن طريق إعادة تركيب VDJ (كانت الحيوانات المستنسخة Cδ-CS 1 و 2 سلالة جرثومية ، لاحظ أيضًا أن الأرجينين تم إدخالها في CDRs للنسخ 4 ، 6 ، 8 و 10 و 11 و 12 و 14 و 21 الشكل التكميلي 2). كانت إحدى الملاحظات المهمة هي أن معظم الحيوانات المستنسخة Cδ-CS ذات التفاعل المضاد للحمض النووي تحتوي أيضًا على أرجينينات تم تقديمها بسبب تعديلات الكودون التي نتجت عن طفرة جسدية (الشكل التكميلي 2). في الواقع ، كان 15 من 22 (68 ٪) من استنساخ ربط Cδ-CS dsDNA يحتوي على ما يصل إلى 7 أرجينينات تم إدخالها عن طريق الطفرة في السلاسل الثقيلة و / أو الخفيفة (استنساخ 18 يحتوي على معظم أرجينينات قدم الشكل التكميلي 2). يشير هذا إلى أن النشاط الذاتي الذي لاحظناه ربما يكون قد نشأ نتيجة لطفرات جسدية تم إدخالها أثناء الاستجابات المناعية. من أجل استكشاف هذا الاحتمال ، أنشأنا وعبرنا عن نظرائنا غير المطفرة للجينات المتغيرة لـ 2 من الأجسام المضادة للحمض النووي من خلايا Cδ-CS (استنساخ 14 و 17 الشكل 5 ب). لم يرتبط أي من المتغيرات غير المحورة بالحمض النووي DNA ، مما يدل على أن التفاعل المضاد للحمض النووي الذي لاحظناه نشأ نتيجة لفرط الطفرة الجسدية (الشكل 5 ج). وبالتالي ، فإن الأجسام المضادة للحمض النووي التي تسبب في النهاية أمراض المناعة الذاتية قد تنشأ بشكل شائع نتيجة للاستجابات المناعية النوعية للمستضد لدى الأشخاص الأصحاء. مجتمعة ، تشير هذه التحليلات إلى أن خلايا Cδ-CS B يمكن أن تكون إما ذاتية التشغيل بشكل طبيعي أو أن نشاطها الذاتي يمكن أن ينشأ بسبب تغيرات الأحماض الأمينية الناتجة عن فرط الطفرات الجسدية.

توجد عدة احتمالات للمعدلات العالية للنشاط الذاتي الموجودة في خلايا Cδ-CS B. يُعتقد أن تحول الفئة إلى IgD وخلايا Cδ-CS B الناتجة تنشأ أثناء تفاعلات GC لأنها تعبر عادةً عن جينات متغيرة للغاية متغيرة ، ويتم توسيعها نسبيًا ، ولا يمكن عزلها إلا كخلايا GC أو ذاكرة أو بلازما (11) ، 13 ، 14 ، 16). لم نتمكن من تمييز ما إذا كانت الخلايا البائية ذاتية التنشيط قد تم تحفيزها لتبديل الفئة إلى IgD أو ما إذا كانت الخلايا البائية التي تعبر عن IgD ذاتية التنشيط يتم اختيارها بشكل تفضيلي. في كلتا الحالتين ، يمكن تصور عدد من النماذج الافتراضية. أولاً ، قد تكون هناك آلية موجهة يتم من خلالها استهداف منطقة التبديل المشفرة Cδ في الخلايا البائية البشرية النشطة التي تكون ذاتية التفاعل. قد تكون هذه الآلية قد تطورت لإنقاذ الخلايا البائية ذاتية التفاعل من أجل دور متخصص أو منخفض في المناعة التي تنطوي على IgD. من المثير للاهتمام اعتبار أن الوظيفة المراوغة لـ IgD قد تشارك بشكل فريد في تحمل الذات (راجع المرجع 15). ومع ذلك ، وجدت تحليلات الفئران المعدلة وراثيا التي تعبر عن IgD أو IgM وحدها كأجسام مضادة فرقا طفيفا بين IgD و IgM في تحمل الخلايا البائية أو الاختيار السلبي (27). في الواقع ، يشير عدد من الدراسات إلى أن IgD يزيد من إشارات IgM لاختيار الخلايا البائية بشكل إيجابي في المرجع الوظيفي (راجع المراجع 15 و 28). مع وضع هذه الدراسات في الاعتبار ، يمكن تصور العديد من النماذج الأخرى التي لا يلعب فيها IgD دورًا محددًا في التسامح. أحد الاحتمالات هو أن الخلايا البائية ذاتية التنشيط قد يتم تثبيطها من تبديل الفئة إلى الأنماط النظيرية Ig في اتجاه المصب (أي IgG ، IgA ، IgE) ، تاركًا فقط منطقة التبديل C المشفرة متاحة للتبديل في الخلايا التي كانت مرتبطة سابقًا بالمستضد الذاتي. قد يحدث تثبيط التبديل الطبقي كمظهر من مظاهر الحساسية. كلا النموذجين أعلاه مثيران للاهتمام لأن كل منهما يقترح أن آليات التحمل يمكن أن تتحكم بشكل مباشر في تبديل فئة الغلوبولين المناعي.

الفرضية البديلة هي أن تبديل الفئة إلى IgD عشوائي (أي أن أي خلية يمكن أن تتبدل) ، وأن اختيار خلايا Cδ-CS B يحدث بعد تبديل الفصل ، مما يتسبب في بقاء تفضيلي للنسخ المستنسخة ذاتي النشاط. على سبيل المثال ، تم اقتراح أنه ، مقارنة بمستقبلات IgM وحدها ، يوفر التعبير عن IgD بقاءًا تفضيليًا (29) وتجنيد الخلايا البائية للاستجابات المناعية التي قد تسمح بالإنقاذ عن طريق التحفيز المزمن باستخدام مستضد ذاتي (30). تفسير آخر محتمل هو أنه عندما يتم تحفيزها بواسطة مستضدات ذاتية أو بدون إشارات ملحقة مطلوبة عادة ، فإن التعبير عن IgD فقط على سطح الخلية B قد لا يؤدي إلى موت الخلية البائية. قد يوفر توضيح الآلية الفعلية التي تتسبب في تنشيط خلايا Cδ-CS B تلقائيًا رؤى مهمة حول دور IgD كمستقبل للخلايا البائية وفي الآليات الطرفية للتسامح المناعي.

عادةً ما تعبر خلايا الذاكرة B من IgG عن أجسام مضادة ذاتية منخفضة التقارب (8) ، غالبًا نتيجة للتغيرات الناتجة عن الطفرات الجسدية المتراكمة. في دراستنا ، كان لدى 31٪ من الأجسام المضادة IgG نشاط ذاتي قابل للاكتشاف. من الجدير بالملاحظة أن التحليلات الحديثة قد وجدت أن الأجسام المضادة من خلايا الذاكرة ب IgM + نادراً ما تكون ذاتية التفاعل ، ولكن عندما تم العثور على النشاط الذاتي كان سببه طفرات جسدية متراكمة (19). وبالمثل ، فإن معظم حالات النشاط الذاتي التي تظهر في خلايا الذاكرة ب IgG + المأخوذة من الأشخاص الأصحاء ناتجة عن طفرات جسدية (8). من المعروف أن خلايا الذاكرة B من IgG + قد تراكمت تقريبًا ضعفين تكرار الطفرات النقطية كخلايا ذاكرة IgM (31) وبالتالي غالبًا ما تكون ذاتية النشاط (8). تراكمت خلايا Cδ-CS B بدورها معظم الطفرات النقطية ، بمتوسط ​​21 ± 7 تبادلات أساسية لكل V.ح الجين مقارنة بـ 14 ± 5 ​​لكل جين لطفرات IgG و 8 ± 4 لكل جين لخلايا IgM GC وخلايا الذاكرة (الشكل 1C). في الوقت نفسه ، فإن خلايا Cδ-CS B هي أيضًا الأكثر نشاطًا ذاتيًا في أغلب الأحيان ، على الرغم من أنه على عكس خلايا الذاكرة IgG و IgM ، فإن 10 ٪ من خلايا Cδ-CS B غير المتحولة لا تزال ذاتية النشاط (الشكل 5 أ). قد تكون حجرة ذاكرة IgM ذات الطفرة المعتدلة أكثر تذكيرًا بمرجع الخلية B الساذج الذي يتم اختياره بعد ذلك بعد تفاعل المستضد ، وبالتالي تقليل التردد الكلي للأجسام المضادة الذاتية (19). في المقابل ، يمكن اختيار الخلايا البائية النشطة بشكل مفرط والتي تتراكم المزيد من الطفرات وتؤدي في النهاية إلى تبديل الفئة لتجنب النشاط الذاتي المرضي ، كما يتضح من التمايز التفضيلي لخلايا Cδ-CS B ، ولكن مع ذلك ، فإن المزيد من الاختلاف عن السلالة الجرثومية يؤدي إلى زيادة تواتر IgG خلايا الذاكرة B ذاتية التفاعل ومتعددة الاستجابة. أفاد كالتون وزملاؤه مؤخرًا أن هناك نقطة تفتيش انتقائية تزيل استنساخ الخلايا البائية النشطة تلقائيًا أثناء الانتقال إلى خلايا البلازما (32). يمكن لنقطة التفتيش هذه أن تكبح قدرة خلايا الذاكرة IgG النشطة على أن تصبح خلايا تفرز الأجسام المضادة في الأشخاص الأصحاء. أحد التخمينات النهائية هو أنه قد تكون هناك اختلافات نوعية بين الأجسام المضادة IgG و Cδ-CS ذاتية التنشيط ، كما هو مقترح من خلال زيادة كثافة ربط الأجسام المضادة لـ Cδ-CS بـ ANA (الشكل 2C) ومستضدات HEp-2 (الشكل التكميلي 1). على سبيل المثال ، قد يتم امتصاص أو إخفاء النشاط الذاتي المحتمل منخفض الكثافة للأجسام المضادة IgG متعددة التفاعلات من خلال تفاعل غير محدد مع جزيئات أخرى في مصل الدم ، وبالتالي لا يمثل تهديدًا كبيرًا للذات ولكنه لا يزال يمثل تهديدًا للمستضد الذي تم اختيارهم من أجله ترتبط بتقارب كبير. في المقابل ، قد تكون الخصائص المحددة في خلايا Cδ-CS B أكثر نشاطًا ذاتيًا بشكل صارخ. مطلوب تحليل أكثر تعمقًا لخصوصية IgG مقارنةً بخصوصية Cδ-CS وتقاربها مع المستضدات الذاتية لتوضيح هذا الاحتمال.

في الختام ، توضح النتائج الواردة هنا أن الخلايا البائية Cδ-CS (IgD-only) لديها معدل عالٍ من النشاط الذاتي في الأشخاص الأصحاء. قد يوفر توصيف الآلية التي تجعل غالبية خلايا Cδ-CS B ذاتية النشاط تقدمًا مهمًا في فهمنا للآليات المحيطية للتسامح المناعي وربما فهمًا أفضل للوظيفة المراوغة للنمط النظري IgD.

عزل الخلايا الليمفاوية B والقياس الخلوي. تم عزل الخلايا الليمفاوية B من اللوزتين أو الدم البشري كما هو موصوف سابقًا (11 ، 14 ، 31). تم عزل جميع الأنسجة والدم باتباع إرشادات المعاهد الوطنية للصحة الراسخة بموافقة مجلس المراجعة المؤسسية من مجلس المراجعة المؤسسية لمؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية (IRB) (الدم واللوزتين) ومركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما IRB (اللوزتين). تم الحصول على اللوزتين من مستشفى الأطفال بجامعة أوكلاهوما أثناء استئصال اللوزتين الروتينية وكان الدم من معهد أوكلاهوما للدم ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. تم إعفاء استخدام أنسجة اللوزتين والدم من الموافقة الكتابية. كان جميع المتبرعين باللوزتين أطفالًا أصحاء ولديهم تاريخ من التهاب اللوزتين (ولكن بدون أي التهاب حالي). كان الدم من المتطوعين الشباب البالغين. لفترة وجيزة ، تم استئصال الخلايا الفردية من اللوزتين. تمت تنقية الكسور المخصبة بالخلايا البائية باستخدام كواشف RosetteSep (StemCell Technologies Inc.) والتدرج الليمفاوي (CellGro Mediatech Inc.) مع إضافة rbc للأغنام. تم بعد ذلك تخصيب الخلايا البائية بالقرب من النقاء عن طريق استنفاد حبة مغناطيسية باستخدام مجموعة Miltenyi Biotec B Cell Isolation kit II. تم عزل خلايا B الساذجة مثل IgD + IgM + CD38 - (لوزة) أو CD27 - (دم) وخلايا Cδ-CS B تم عزلها على أنها IgD + IgM - CD38 + ، وتم تضخيم نصوص خلايا ذاكرة IgG في الدم المحيطي بواسطة RT-PCR من خلايا الذاكرة الإجمالية المصنفة (IgD - IgM - CD27 + الشكل 1B) باستخدام داكو Cytomation MoFlo أو مقياس التدفق الخلوي BD FACSAria. تم فرز لوحات كل من Igκ + و Igλ + من الخلايا الساذجة و Cδ-CS من 2 من المتبرعين. نظرًا لأن كسور Igκ و Igλ كانت متشابهة لجميع المقايسات ، فقد تم تجميع الكسور للتحليلات الواردة هنا. كما هو متوقع ، كانت معظم خلايا Cδ-CS B سلبية Igκ (Igλ +). تم فرز الخلايا السائبة من الأنماط الظاهرية الثلاثة واللجوء إليها في لوحات PCR ذات 96 بئرًا لضمان نقاء الخلايا المفردة (تم اكتشاف 98٪ -99٪ نقاء على نوع من الخلايا المفردة). كانت الأجسام المضادة المستخدمة في قياس التدفق الخلوي عبارة عن مضاد IgM مترافق مع APCs (Southern Biotechnology Associates) ، مضاد IgD مترافق مع PE (BD) ، مضاد حيوي لـ CD38 متبوعًا بالستربتافيدين- مترافق مع ثلاثي الألوان (Invitrogen) ، مضاد Igκ- مترافق إلى FITC (Invitrogen) ، و anti-CD27 - مترافق مع PE (Invitrogen).

وحيدة الخلية RT-PCR و PCR. تم فرز الخلايا B المفردة في لوحات PCR تحتوي على 10 ملي مولار من Tris-HCL مع 40 وحدة / ميكرولتر من مثبط RNase (Promega). تم تجميد الصفائح على الفور على الجليد الجاف وتخزينها في درجة حرارة -80 درجة مئوية. تم تضخيم كل خلية في تفاعل RT-PCR بخطوة واحدة (Qiagen) باستخدام مزيج من البادئات الحسية الخاصة بالمناطق الرائدة والبادئات المضادة للحساسية الخاصة بـ Cμ- (ساذج) ، Cδ- (Cδ-CS) ، أو Cγ- مناطق ثابتة للسلاسل الثقيلة ومناطق Cκ-Constant أو Cl-Constant للسلاسل الخفيفة. تم تضخيم ميكروليتر واحد من كل تفاعل RT-PCR في تفاعلات PCR منفصلة لعائلات الجينات الفردية الثقيلة والخفيفة باستخدام بادئات متداخلة. تم نشر جميع متواليات التمهيدي سابقًا (7 ، 18) باستثناء البادئات المضادة لـ Cδ (الخارجية ، 5′-GTGTCTGCACCCTGATGATGATG-3 ، متداخلة ، 5′-GGGAACACATCCGGAGCCTTG-3) والاشعال المضادة لـ Cγ (خارجية ، 5 ′ -TCTTGTCCACCTTGGTGTTGCT-3 ′ ، متداخلة ، 5′-AGGTGCTCTTGGAGGAGGGT-3). تم تسلسل منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل (Applied Biosystems 3730 محلل DNA). عند تحديد الجينات المتغيرة ، تم استخدام بادئات الإحساس الفريدة للجينات المتغيرة المعينة والبادئات المضادة للحواس التي تربط الجينات الوصلية المعينة لتضخيم 1 ميكرولتر من تفاعل RT-PCR لدمج مواقع التقييد في نهايات الجينات المتغيرة للاستنساخ والتعبير . بعض متواليات الجينات المتغيرة المعروضة للمقارنة في الشكل 1 و C و D ، كانت من البيانات التاريخية التي نشرها مختبرنا سابقًا (12 ، 16 ، 33 ، 34). لتوليد الجينات المتغيرة المعاد تدويرها للتجارب في الشكل 5 ، استخدمنا امتداد تداخل حبلا PCR لقوالب متغيرة ثقيلة متغيرة ومتغيرة الضوء وقوالب J وأشعال متداخلة ترميز مناطق CDR3 باستخدام بادئات V و J الخاصة بالجينات.

تعبير الجسم المضاد وحيدة النسيلة المؤتلف. بعد التنقية والهضم ، تم استنساخ cDNAs المتضخمة للجينات المتغيرة للجسم المضاد من كل خلية مفردة في نواقل التعبير التي تحتوي على مناطق IgG أو Igκ أو Igλ البشرية كما هو موضح سابقًا (7). تم نقل البلازميدات Maxi Prepar Plasmid Maxi Kit (Qiagen) التي تحتوي على جينات Ig الثقيلة والخفيفة السلسلة إلى خط الخلايا 293A باستخدام فوسفات الكالسيوم أو كاشف تعداء Roche Applied Science FuGENE 6 وفقًا للبروتوكول المقترح من الشركة المصنعة. تم السماح لخلايا 293A المنقولة بإفراز الأجسام المضادة في DMEM الخالي من المصل المضاف إليه 1 ٪ Nutridoma-SP (Roche) لمدة 4 إلى 5 أيام. تمت تنقية الأجسام المضادة باستخدام أعمدة بروتينية ثابتة (بيرس). تم التحقق من التعبير السليم عن الجسم المضاد ونقاوته بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام متعدد الأكريلاميد ، وتم تحديد تركيزات الجسم المضاد المنقى باستخدام EZQ Protein Quantitation Kit (Invitrogen).

تحليلات ELISA و HEp-2 للنشاط الذاتي. لفحص الأجسام المضادة المعبر عنها لتفاعل الحمض النووي أو التفاعل المتعدد ، تم طلاء لوحات ELISA الدقيقة (Costar Corning Inc.) بـ 10 ميكروغرام / مل من العجل الغدة الصعترية ssDNA أو dsDNA (Invitrogen) أو LPS (Sigma-Aldrich) أو الأنسولين البشري المؤتلف (Fitzgerald) . تم استخدام اتحاد الماعز المضاد للبشر IgG – peroxidase (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.) للكشف عن ارتباط الأجسام المضادة المؤتلفة ، متبوعًا بالتطور مع ركيزة بيروكسيداز الفجل (Bio-Rad). تم قياس الامتصاصية عند OD415 على قارئ صفيحة ميكروسكوبية (الأجهزة الجزيئية).

تم فحص الأجسام المضادة من أجل تفاعل HEp-2 عن طريق التألق المناعي باستخدام شرائح HEp-2 التجارية وفقًا لبروتوكول الشركات المصنعة المقترح (BION Enterprises Ltd.). تم تحليل شرائح HEp-2 باستخدام مجهر الفلورسنت Zeiss Axioplan II. تم فحص الأجسام المضادة من أجل ارتباط ANA باستخدام مجموعة QUANTA Lite ANA (INOVA Diagnostics Inc.) واكتشافها باستخدام مركب بيروكسيديز المتقارن IgG المضاد للإنسان (محدد سلسلة γ) (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.) متبوعًا بالتطوير باستخدام ركيزة بيروكسيداز الفجل. (بيو راد). تمت مقارنة كل تفاعلات HEp-2 و ANA بمصل التحكم الإيجابي من مريض الذئبة والمصل غير التفاعلي من متبرع دم سليم. تم تطبيع فحوصات QUANTA Lite ANA إلى جسم مضاد أحادي النسيلة ANA + داخلي (mAb: 050504P181L + B09).

إحصائيات. تم إجراء التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج Microsoft Excel 2003 أو برنامج GraphPad Prism 4. للتحليلات في الشكل 1 ، A و B ، والشكل 2B ، الطالب 2-الذيل ر تم إجراء الاختبارات. للتحليلات في الشكل 2 ، A و C ، الشكل 3 ، والشكل 4B ، تم إجراء اختبارات χ 2.

نشكر جوديث أ. جيمس لقراءتها النقدية للمخطوطة وتقديم اقتراحات قيمة. نشكر Larry Wysocki على توفيره ، و Martin Weigert و David Stollar للسماح لنا باستخدام أحاديات التحكم الإيجابي 3H9 و H241 المضادة للحمض النووي. تم تقديم المساعدة الفنية من قبل ليني أبراهام وشيريل كريستوفرسون من مرفق تسلسل الحمض النووي التابع لمؤسسة أوكلاهوما للأبحاث الطبية (OMRF) ، وموظفي مرفق التصوير الأساسي لـ OMRF ، وجاكوب باس وديانا هاميلتون في مرفق قياس التدفق الخلوي OMRF Flow Cytometry Core. كما نشكر مستشفى الأطفال بجامعة أوكلاهوما وخاصة سارة جونسون وجيسوس ميدينا لتوفير عينات اللوزتين. قدمت ليزا ريدجواي المساعدة الكتابية. تم تمويل هذا العمل جزئيًا من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة P20RR018758-01 و P20RR15577-02 إلى P. ويلسون.

الاختصارات غير القياسية المستخدمة: ANA ، مستضد النوى Cδ-CS ، تحولت الفئة إلى Cδ CDR ، منطقة تحديد التكامل dsDNA ، DNA HEp-2 مزدوج الشريطة ، خط خلية ورم الظهارة البشرية 2 ssDNA ، DNA أحادي الجديلة.

تضارب المصالح: أعلن الكتاب أنه لا يوجد تضارب في المصالح.

معلومات مرجعية: J. كلين. استثمار.117: 1558-1565 (2007). دوى: 10.1172 / JCI27628


مراجعة المستقبلات الموضعية والتحول الطبقي إلى IgE في التهاب الجيوب المزمن مع الاورام الحميدة الأنفية

يتميز التهاب الجيوب الأنفية المزمن المصحوب بالسلائل الأنفية (NP) والتهاب الأنف التحسسي (AR) بالتهاب Th2 الموضعي والتنظيم الأعلى لـ IgE ، ومع ذلك ، فإن IgE في NP هو `` متعدد النسيلة '' ومسبب للحساسية ، في حين أن IgE في AR هو `` قليل النسيلة '' ومسبب للحساسية . تحدث تفاعلات المركز الجرثومي (GC) في AR ، بينما يتم وصف تكوين الهياكل الشبيهة بـ GC في NP فقط. كان الهدف من هذه الدراسة هو التحقيق في تورط إنتاج IgE المحلي ، وإعادة تركيب مفتاح الفصل ، ومراجعة المستقبلات في NP.

أساليب

قارنا مستويات IgE المحلية ، ونصوص الجينات الجرثومية ، وتعبير Ig mRNA الناضج ، وجين تنشيط إعادة التركيب (RAG1 و RAG2) ، والعلامات الرئيسية لالتهاب Th2 ، وتفاعلات GC في أنسجة NP ضد AR وأنسجة التحكم. تم تحصين الغشاء المخاطي للأنف من أجل التعبير المشترك عن RAG1 و RAG2 في الخلايا البائية وخلايا البلازما والخلايا التائية ، باستخدام التألق المناعي المزدوج أو الثلاثي (IF).

نتائج

في NP ، يتم زيادة مستوى IgE المحلي والعلامات الرئيسية لتبديل الفئة المحلية مقارنةً بـ AR والضوابط العادية (NC). في NP ، تكشف نسخ دائرة التبديل عن إعادة تركيب مفتاح الفصل المحلي المستمر إلى IgE. ما يصل إلى 30٪ من الخلايا البائية وخلايا البلازما والخلايا التائية في الأورام الحميدة الأنفية تعيد التعبير عن كل من RAG1 و RAG2 المطلوبين لمراجعة المستقبلات. تزداد تركيزات RAG1 و RAG2 mRNA في NP وترتبط بحجم الالتهاب ووجود بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية السم المعوي (superantigen) - محدد IgE في الغشاء المخاطي للأنف.

استنتاج

تقدم نتائجنا الدليل الأول على مراجعة المستقبلات المحلية وتحول الفئة إلى IgE ، وتمايز الخلايا B في خلايا البلازما التي تفرز IgE في NP.


الملخص

خلايا البلازما هي الخلايا المستجيبة المتمايزة نهائياً وغير المنقسمة لسلالة الخلايا البائية. إنها مصانع خلوية مكرسة لمهمة تصنيع وإفراز آلاف الجزيئات من الأجسام المضادة الخاصة بالنسخة كل ثانية. للاستجابة لمسببات الأمراض الميكروبية بالخصوصية والسرعة اللازمتين ، يتم تنظيم الخلايا البائية بشكل رائع فيما يتعلق بكل من التطور في نخاع العظام والتنشيط في المحيط. تركز هذه المراجعة على التمايز النهائي للخلايا البائية في خلايا البلازما ، بما في ذلك المجموعات الفرعية المختلفة من الخلايا البائية التي تصبح خلايا بلازما ، وآلية تنظيم هذا الانتقال ، وعوامل النسخ التي تتحكم في كل مرحلة من مراحل النمو وخصائص البلازما طويلة العمر الخلايا.


فئة الخلايا البائية الناضجة التي تم تحويلها إلى IgD تكون ذاتية الحركة في الأفراد الأصحاء

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

اعثر على مقالات بواسطة Koelsch، K. في: JCI | PubMed | منحة جوجل

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

اعثر على مقالات بواسطة Mathias، M. في: JCI | PubMed | منحة جوجل

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

1 برنامج علم الوراثة الجزيئية ، مؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. 2 قسم علم الأمراض و 3 قسم الأحياء الدقيقة والمناعة ، مركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية.

عنوان المراسلات إلى: Patrick C. Wilson، Molecular Immunogenetics، Oklahoma Medical Research Foundation، 825 NE 13th St.، Oklahoma City، Oklahoma 73104، USA. هاتف: (405) 271-7393 ، داخلي. 34556 فاكس: (405) 271-8237 البريد الإلكتروني: [email protected]

يعد تحديد أصل ومصير الخلايا البائية ذاتية النشاط أمرًا بالغ الأهمية لفهم أمراض المناعة الذاتية وعلاجها. لقد أبلغنا أنه على الرغم من اشتقاقها من الأشخاص الأصحاء ، فإن الأجسام المضادة من الخلايا البائية التي لها صنف تحولت إلى IgD عبر إعادة التركيب الجيني (وبالتالي تحولت إلى فئة الخلايا Cδ [Cδ-CS]) تكون شديدة التفاعل مع المستضدات الذاتية. يرتبط أكثر من نصف الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B بالمضادات الذاتية على خلايا خط الخلايا الظهارية البشرية 2 (HEp-2) أو المستضدات المضادة للنواة ، وربع الحمض النووي مزدوج الشريطة ، وكلا المجموعتين من الأجسام المضادة تكون في كثير من الأحيان متعددة التفاعلات. ومن المثير للاهتمام ، أن بعض خلايا Cδ-CS B قد تراكمت بقايا أساسية في مناطق الجسم المضاد المتغيرة التي تتوسط تفاعل مضاد للحمض النووي من خلال فرط التحول الجسدي والاختيار ، في حين أن خلايا Cδ-CS B الأخرى ذاتية التفاعل بشكل طبيعي. على الرغم من أن النسبة الإجمالية كانت أقل بشكل ملحوظ من خلايا Cδ-CS ، إلا أن 31 ٪ من الأجسام المضادة لخلايا الذاكرة IgG كانت ذاتية إلى حد ما ، وكما هو متوقع ، كانت حوالي 24 ٪ من الأجسام المضادة للخلايا الساذجة ذاتية النشاط. نفسر هذه النتائج للإشارة إما إلى أنه يمكن تحفيز الخلايا البائية ذاتية التنشيط على التحول إلى فئة IgD أو أن الخلايا البائية النشطة التي تستخدم IgD كمستقبل للخلايا البائية لا يتم حذفها بشكل فعال. قد يكون تحديد الآلية التي تكون بها غالبية خلايا Cδ-CS B ذاتية التفاعل مهمًا في فهم آليات التحمل المحيطية وقد يوفر نظرة ثاقبة للوظيفة الغامضة للجسم المضاد IgD.

عادة ما يتم التحكم في الخلايا البائية الذاتية عن طريق الحذف النسيلي (1 ، 2) ، وتحرير المستقبلات (3 ، 4) ، والحساسية النسيليّة (5 ، 6). على الرغم من هذه الآليات ، فإن الخلايا الليمفاوية البائية التي تعبر عن الغلوبولين المناعي السطحي التي يمكن أن ترتبط بالمستضدات الذاتية شائعة إلى حد ما في ذخيرة الخلايا البائية البشرية الناضجة (7 ، 8). معظم المعرفة حول آليات تحمل الخلايا البائية مستمدة من التجارب التي أجريت على الفئران المعدلة وراثيًا والتي تحمل أضدادًا ذاتية معاد تجميعها مسبقًا ، ولا يُعرف الكثير عن مصير الخلايا البائية ذاتية التفاعل لدى البشر. نظرًا لأن الخلايا البائية ذاتية النشاط قد تكون السلائف لتوليد الأجسام المضادة الذاتية المرضية في العديد من أمراض المناعة الذاتية مثل الذئبة الحمامية الجهازية (SLE) أو التهاب المفاصل الروماتويدي ، فإن فهم مصيرها في البشر الأصحاء أمر بالغ الأهمية. يتم تقديم الدليل هنا على أنه في الأشخاص الأصحاء ، تكون الخلايا البائية المحولة إلى النمط النظري IgD ذاتية التأثير في الغالب.

في الخلايا البائية الناضجة التي لم يتم تنشيطها للمستضد (الخلايا الساذجة) ، يتم ترميز الأجسام المضادة IgM و IgD في نفس الوقت بواسطة exons C و Cδ عبر الربط التفاضلي mRNA لنسخة VDJ-Cμ-Cδ واحدة. بعد التنشيط ، يمكن تحفيز الخلايا البائية الساذجة على تبديل الفئة. يتخصص تبديل فئة الغلوبولين المناعي في وظيفة الأجسام المضادة من خلال استبدال exons الجيني IgM و IgD (C μ و Cδ) بإكسونات IgG (Cγ) أو IgA (Cα) أو IgE (Cε) عن طريق إعادة التركيب الجيني. ومع ذلك ، فإن نسبة صغيرة من الخلايا البائية (1٪ - 3٪) تتحول فعليًا من Cμ إلى Cδ على المستوى الجيني باستخدام مناطق التبديل المشفرة بين Cμ و Cδ exons وينتج عنها النمط الظاهري IgM - IgD +. يُشار إلى هذه الخلايا بتبديل فئة الخلايا البائية إلى خلايا Cδ (Cδ-CS) (9 ، 10) ويبدو أنها نتجت عن استجابة مناعية تنشط بالمستضد لأنه يمكن عزلها كخلايا GC ، فهي نسيلي للغاية (مما يشير إلى انقسام الخلايا) ، والجينات المتغيرة لها طفرات جسدية واسعة النطاق (11 ، 12). تعبر خلايا Cδ-CS B أيضًا في الغالب عن سلاسل l-light ويمكن أن تتمايز في خلايا الذاكرة والبلازما (13 ، 14). يشير الاستخدام السائد لسلاسل l-light إلى أن معظم الأجسام المضادة IgD المفرزة في الأمصال البشرية (

1 ٪ من جميع الأجسام المضادة) مأخوذة من خلايا Cδ-CS B ، حيث أن IgD في الدم هو أيضًا في الغالب l-light chain المشفرة (15). تستخدم خلايا Cδ-CS B مجموعة فرعية من جينات المنطقة المتغيرة للجلوبيولين المناعي المرتبطة منذ فترة طويلة بالنشاط الذاتي (16) وربما تكون قد تعرضت لتحرير المستقبل أثناء تطور الخلايا البائية (12 ، 16 ، 17). تشير هذه الملاحظات المختلفة إلى أن خلايا Cδ-CS B إما تتولد عن طريق آلية تحمل مناعي أو أنها تتهرب من التحمل المناعي. لقد شرعنا هنا في تحديد ما إذا كانت خلايا Cδ-CS B تعمل تلقائيًا في البشر الأصحاء.

لقد وجدنا أن الخلايا الليمفاوية Cδ-CS B البشرية كانت ذاتية الحركة ، حيث أنها تشفر الأجسام المضادة التي غالبًا ما تربط خلايا خط الخلايا الظهارية البشرية 2 (HEp-2) ، ومضادات النوى (ANAs) ، والحمض النووي أحادي الجديلة (ssDNA) ، والحمض النووي المزدوج (DNA) ( dsDNA) ، وكانوا في كثير من الأحيان متعدد التفاعلات. تمشيا مع تقرير حديث من تيلر وزملائه ، كان لخلايا ذاكرة IgG البشرية نشاط ذاتي منخفض الكثافة وكانت تفاعلية متعددة بتردد عالٍ بشكل مدهش (8) ، على الرغم من أن تواتر وشدة ارتباط المستضدات الذاتية كانت أقل بكثير من تلك الموجودة في خلايا Cδ-CS B . ومن المثير للاهتمام ، أن التفاعل المضاد للحمض النووي كان إما مشفرًا بشكل طبيعي بواسطة الجينات المتغيرة غير المحورة أو المكتسبة أثناء الاستجابة المناعية عبر الطفرات الجسدية. وبالتالي ، فإن الأجسام المضادة للدنا الناتجة على ما يبدو عن الاستجابة المناعية قد تكون قادرة على الظهور في الأشخاص الأصحاء. توفر هذه النتائج تقدمًا مهمًا في فهم آليات التحمل التي تتحكم في الخلايا البائية ذاتية التفاعل التي قد تتعطل في المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية.

تحديد خصوصية الجسم المضاد لخلايا Cδ-CS B. خلايا Cδ-CS B هي سلالة فريدة موجودة في اللوزتين والدم التي هي IgD + IgM - ويمكن عزلها كخلايا GC (CD38 +) أو خلايا بلازما (CD38 ++) من اللوزتين البشرية (11 ، 14) (الشكل 1 أ) أو كخلايا ذاكرة (CD27 +) من الدم المحيطي (13) (الشكل 1 ب). من أجل اختبار خصوصية خلايا Cδ-CS B ، تم إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المؤتلفة من جينات المنطقة المتغيرة لخلايا مفردة معزولة. استخدمنا استراتيجية معدلة مشابهة لتلك الموصوفة في التقارير السابقة (7 ، 18) ، حيث تم فرز الخلايا البائية المفردة عن طريق قياس التدفق الخلوي إلى 96 طبقًا جيدًا وتضخيم الجينات المتغيرة بواسطة RT-PCR متعدد الخلايا وحيدة الخلية لتحديد واستنساخ جينات الغلوبولين المناعي ثقيلة السلسلة وسلسلة خفيفة من تشكيلة عشوائية من الخلايا (الجينات المتغيرة المستخدمة مدرجة في المواد التكميلية للجدول 1 التكميلي المتاحة عبر الإنترنت مع هذه المقالة doi: 10.1172 / JCI27628DS1). ثم تم استنساخ هذه الجينات المتغيرة في نواقل التعبير والتعبير عنها بمناطق IgG الثابتة في خط الخلية البشرية 293A. تم إنتاج ما مجموعه 100 من الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS GC B (IgD + IgM - CD38 + الشكل 1A) معزولة من 3 متبرعين باللوزتين (بواسطة المتبرع ، ن = 45 و 34 و 21 جسمًا مضادًا) ومقارنة بـ 78 جسمًا مضادًا من خلايا ب ساذجة من 3 متبرعين (IgD + IgM + CD38 - حسب المتبرع ، ن = 37 و 27 و 14 جسمًا مضادًا) و 64 جسمًا مضادًا من خلايا ذاكرة IgG من 4 متبرعين (IgD - IgM - CD27 + حسب المتبرع ، ن = 25 و 12 و 7 و 20 من الأجسام المضادة). من الجدير بالملاحظة أن الخلايا البائية الساذجة كما تم تعريفها هنا قد تحتوي على مجموعة صغيرة من الخلايا البائية التي كانت خلايا انتقالية ولكنها لا تزال تمثل في الغالب الذخيرة الساذجة للخلايا البائية البشرية. كان من المهم تجنب تلويث الخلايا البائية الساذجة بخلايا الذاكرة IgM + D + - نظرًا لأن خلايا ذاكرة IgM من البشر غير نشطة بشكل متكرر (19) ، فإن التلوث قد يجعلنا نقلل من التكرار الحقيقي للأجسام المضادة المكتشفة. بالإضافة إلى تحليل خلايا CD27 ، لتجنب تلويث خلايا الذاكرة IgD + IgM + ، استخدمنا فقط الأجسام المضادة من الخلايا الساذجة التي لا تحتوي على طفرات جسدية (أي التي كان لها تردد أقل من تبادل أساسي واحد لكل جين متغير) . تم التحقق من هوية خلايا Cδ-CS B المصنفة بناءً على الخصائص المعروفة لذخيرة الجينات المتغيرة بما في ذلك الطفرات الجسدية واسعة النطاق (الشكل 1C) (11) والاستخدام الوفير لـ Jح6 قطعة الجينات (الشكل 1 د) (16). كنا مهتمين بمعرفة ما إذا كانت الجينات المتغيرة من خلايا ذاكرة الدم المحيطية Cδ-CS ، كما تنبأت نتائج كلاين وزملائه (13) ، مشابهة لخلايا Cδ-CS GC وخلايا البلازما. في الواقع ، كان للجينات المتغيرة المستنسخة عشوائيًا من خلايا ذاكرة Cδ-CS أيضًا طفرات جسدية مفرطة وتفضيلًا لاستخدام J المرتبط بالمناعة الذاتية.ح6 شرائح جينية (الشكل 1 ، C و D) (7 ، 16 ، 20). كما هو موضح أدناه ، تم اختبار الأجسام المضادة من خلايا الذاكرة Cδ-CS GC ، والساذجة ، و IgG للتفاعل مع خلايا HEp-2 عن طريق التألق المناعي وربط ANA عن طريق المقايسات المناعية التجارية وتم فحصها بواسطة ELISA للتفاعل مع الحمض النووي أو التفاعل المتعدد.

النمط الظاهري لخلايا Cδ-CS B. (أ و ب) بوابات فرز التدفق الخلوي المستخدمة لعزل أنواع الخلايا البائية المختلفة التي تم تحليلها من الدم أو اللوزتين ، بما في ذلك خلايا Cδ-CS GC (IgD + IgM - CD38 +) ، وخلايا B ساذجة (IgD + IgM + و CD38 - اللوزتين أو CD27 - الدم ) وخلايا الذاكرة B (IgD - CD27 + من مربع "الذاكرة" في ب). كمبيوتر شخصي ، خلية بلازما. تحليل تردد الطفرة الجسدية (ج) واستخدام Jح6 قطعة الجينات (د) يوضح أن جميع مجموعات الخلايا الفرعية Cδ-CS B وتلك التي تم التعبير عنها هنا فريدة بالمثل من خلايا IgG و IgM B. (ج) الموضح هو النسبة المئوية لـ V.ح الجينات مع العدد المشار إليه من الطفرات لكل مجموعة فرعية تم تحليلها. (د) استخدام أنواع مختلفة من J.ح شرائح الجينات. تم تضمين نصوص من 625 جينات متغيرة لخلايا Cδ-CS GC من 11 متبرعًا (بواسطة المتبرع ، ن = 44 ، 44 ، 57 ، 44 ، 62 ، 34 ، 225 ، 59 ، 16 ، 21 ، 19) ، 78 جينات متغيرة لخلايا البلازما Cδ-CS من متبرع واحد ، 124 جينات متغيرة لخلايا الذاكرة Cδ-CS من 4 متبرعين (بواسطة جهات مانحة، ن = 20 و 20 و 28 و 56) و 620 IgG GC والذاكرة وجينات متغيرة لخلايا البلازما من 14 متبرعًا (حسب المتبرع ، ن = 18 و 28 و 174 و 40 و 108 و 37 و 25 و 21 و 18 و 22 و 15 و 24 و 19 و 71) ، 681 جينات IgM GC والذاكرة ومتغير خلايا البلازما من 18 متبرعًا (حسب المتبرع ، ن = 18 و 91 و 51 و 158 و 17 و 10 و 16 و 48 و 30 و 19 و 28 و 11 و 36 و 29 و 13 و 22 و 20 و 64) ، و 267 جينًا متغيرًا ساذجًا من 6 متبرعين (حسب المتبرع) و ن = 47 و 30 و 24 و 15 و 24 و 127).

ترتبط الأجسام المضادة المشتقة من خلايا Cδ-CS B بالمستضدات الذاتية. اختبار HEp-2 Slide هو اختبار التشخيص السريري الكلاسيكي المستخدم لاكتشاف النشاط الذاتي وربط الأجسام المضادة للنواة بواسطة الأجسام المضادة في المصل كما يظهر في أمراض المناعة الذاتية مثل مرض الذئبة الحمراء. يستخدم هذا الاختبار استخدام الخلايا من خط خلية ورم ظهاري بشري مثبت على شريحة مجهرية ، ثم يتم اكتشافه عن طريق التألق المناعي بعد الحضانة بالمصل (21). لتحديد ما إذا كانت الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B مرتبطة بمستضدات ذاتية بتردد أعلى من تلك الموجودة في الخلايا الساذجة أو خلايا الذاكرة B ، تم اختبار الأجسام المضادة من كل مجموعة من أجل التفاعل مع المستضدات على خط خلايا HEp-2. بالإضافة إلى ذلك ، تم فحص جميع الأجسام المضادة للارتباط بـ ANA باستخدام مقايسة الممتز المناعي التجارية المصممة للكشف عن تفاعل ANA السريري (مجموعة QUANTA Lite ANA ، INOVA Diagnostics Inc.). تم تسجيل الأجسام المضادة التي كان لها ارتباط قابل للاكتشاف أكبر من تلك الموجودة في مصل التحكم السلبي في مقايسة التألق المناعي HEp-2 على أنها إيجابية. لمقايسة ANA ، تم إنشاء قيمة الامتصاصية التي سمحت بإجراء تقييم كمي أكثر. نظرًا لأن الخلايا الساذجة كانت المجموعة الضابطة ، فقد اعتبرنا أن الأجسام المضادة موجبة لـ ANA إذا أنتجت امتصاصًا بتركيز 25 ميكروغرام / مل أكبر من متوسط ​​± SD لامتصاص جميع الأجسام المضادة للخلايا الساذجة. كان متوسط ​​امتصاص الأجسام المضادة الساذجة ± SD 0.4293 ± 0.2235 OD415، لذا فإن الاختبارات الإيجابية كانت تحتوي على نسبة امتصاص 0.6829 أو أكثر. أظهرت التقارير السابقة أنه عند تركيزات من 25 إلى 50 ميكروغرام / مل ، فإن حوالي 70 ٪ من الأجسام المضادة من الخلايا B غير الناضجة المبكرة (قبل الاختيار) تربط مستضدات خلايا HEp-2 ، في حين أن 18 ٪ فقط من الأجسام المضادة من الخلايا البائية الناضجة الناضجة تفاعل ملحوظ HEp-2 (7). وجدنا تكرارًا مشابهًا للأجسام المضادة التفاعلية HEp-2 و ANA من الخلايا الساذجة التي تم اختبارها (16 من 70 ، أو 23٪ الشكل 2A). من المثير للدهشة ، ولكن بما يتفق مع تقرير حديث عن تفاعل الجسم المضاد IgG البشري (8) ، فإن 27 ٪ (17 من 64) من الأجسام المضادة من خلايا ذاكرة IgG كانت تفاعلية HEp-2 أو ANA. في المقابل ، تفاعلت 60٪ (53 من 89) من الأجسام المضادة المشتقة من Cδ-CS مع مستضدات HEp-2 أو ANA. كانت الزيادة في تواتر الأجسام المضادة التفاعلية للخلايا HEp-2 من خلايا Cδ-CS مقارنة بتلك الموجودة في الخلايا الساذجة أو خلايا الذاكرة IgG مهمة للغاية عند مقارنة جميع الأجسام المضادة ككل (الشكل 2A-2 ، ص & lt 0.0001) وعند مقارنتها بمتوسط ​​التكرار بين المتبرعين (الشكل 2B للطالب ر اختبار، ص & lt 0.05 مقابل الأجسام المضادة الساذجة أو IgG).

غالبًا ما تكون الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B ذاتية النشاط. (أ) الأجسام المضادة المشتقة من Cδ-CS شديدة التفاعل مع مستضدات HEp-2 و ANA مقارنة بالأجسام المضادة الساذجة والمشتقة من IgG. تضمنت الأجسام المضادة التي تم اختبارها 89 جسمًا مضادًا لـ Cδ-CS (من 3 متبرعين ، ن = 37 و 18 و 34) ، 70 من الأجسام المضادة الساذجة للخلايا البائية (من 3 متبرعين ، ن = 39 و 14 و 17) و 64 جسمًا مضادًا من خلايا ذاكرة IgG (من 4 متبرعين ، ن = 25 و 5 و 12 و 20). تم تحديد تواتر الأجسام المضادة التفاعلية HEp-2 عن طريق فحص الأجسام المضادة عن طريق التألق المناعي باستخدام شرائح HEp-2 المعدة تجاريًا (الشكل التكميلي 1) ، وتكرار الأجسام المضادة التفاعلية لـ ANA باستخدام المقايسات المناعية لـ ANA التجارية (انظر الطرق). تم اعتبار الأجسام المضادة التي تربط شرائح HEp-2 بشكل أكثر كثافة من أمصال التحكم السلبية التي توفرها الشركة المصنعة أو التي تربط ANA بشكل أكثر كثافة من متوسط ​​± SD لجميع الأجسام المضادة للخلايا الساذجة إيجابية في الفحصين. أشارت النتائج إلى أن حدوث النشاط الذاتي كان أعلى بشكل ملحوظ في الأجسام المضادة المشتقة من Cδ-CS مقارنة بالأجسام المضادة الساذجة أو المشتقة من IgG (χ 2 ، ص & lt 0.0001). (ب) تردد تفاعل HEp-2 و ANA حسب الجهة المانحة. ترتبط الأجسام المضادة لـ Cδ-CS أكثر من الأجسام المضادة IgG أو الأجسام المضادة المشتقة من الخلايا الساذجة (Student’s ر اختبار، ص & lt 0.05). (ج) على الرغم من أن خلايا IgG كانت بشكل عام أكثر تفاعلًا في فحوصات ANA من الخلايا الساذجة ، إلا أن التفاعل كان منخفض الكثافة. في المقابل ، يرتبط عدد أكبر بكثير من الأجسام المضادة لـ Cδ-CS بـ ANA بكثافة عالية. تشير الخطوط الحمراء إلى متوسط ​​امتصاص ANA. تشير الخطوط المتقطعة إلى عتبات التسجيل الإيجابي (يشير الخط المتقطع السفلي إلى ANA + التي تعني الخلية الساذجة ± يشير الخط المتقطع العلوي SD إلى ارتفاع ANA) تم تحقيق مستوى الامتصاص العالي بشكل أكثر شيوعًا للأجسام المضادة Cδ-CS.

ترتبط الأجسام المضادة Cδ-CS أيضًا بـ ANA (الشكل 2C) ومستضدات HEp-2 (الشكل التكميلي 1) بكثافة أكبر من الأجسام المضادة لخلايا الذاكرة الساذجة أو IgG. تم اختبار أحد عشر بالمائة من الأجسام المضادة لـ Cδ-CS المرتبطة بـ ANA بكثافة عالية بشكل خاص (ANA عالي) مقارنة بـ 3٪ من IgG ولا يوجد أي من الأجسام المضادة الساذجة (الشكل 3C-2 ، ص = 0.05). من الجدير بالملاحظة أن ما يقرب من نصف الأجسام المضادة IgG لها ارتباط منخفض المستوى بمستضدات ANA التي كانت أكبر من تلك الموجودة في الأجسام المضادة الساذجة ولكن ليس أكثر من SD المتوسط ​​وبالتالي تم تسجيلها على أنها سلبية. تبين مؤخرًا أن هذا التفاعل الطفيف لخلايا ذاكرة IgG ناتج عن الطفرات الجسدية المتراكمة (8) وتسبب في زيادة متوسط ​​الامتصاص بشكل عام. كانت خلايا Cδ-CS بدورها تتمتع بأكبر متوسط ​​كثافة ربط ANA (الشكل 2C 0.4593 ± 0.2235 OD415 للخلايا الساذجة ، 0.6691 ± 0.5092 OD415 لـ IgG و 0.8004 ± 0.6906 OD415 للأجسام المضادة Cδ-CS). أخيرًا ، كانت المستضدات الذاتية المرتبطة بـ HEp-2 متغيرة وتضمنت أنماطًا هيوليًا بالإضافة إلى أنماط ANA الكلاسيكية (الشكل التكميلي 1) ، وبالتالي فإن التفاعل الذاتي لا يستهدف مستضدًا ذاتيًا واحدًا. في الختام ، فإن الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B عادة ما تربط مستضدات مختلفة على خلايا HEp-2 وفي فحوصات ANA التجارية ، مما يدل على أنها ذاتية التفاعل بشكل عام.

تم قياس الارتباط بـ ssDNA أو dsDNA أو LPS أو الأنسولين بواسطة الأجسام المضادة المعبر عنها بواسطة ELISA. درجة الارتباط بألواح ميكروتيتر المغلفة بالمستضد (الامتصاصية [OD415]) بتركيزات الأجسام المضادة من 6.67 × 10 –8 ، 1.67 × 10 –8 ، 4.17 × 10 –9 ، و 1.04 × 10 –9 م (وهي 1 ميكروغرام / مل وثلاث تخفيفات متسلسلة 4 أضعاف ، x محور). تشتمل جميع ELISA على 3H9 (خطوط حمراء مع الماس) و H241 (خطوط حمراء مع مربعات) أجسام مضادة أحادية النسيلة ذات مقاومة عالية ومتوسطة للحمض النووي أو تفاعل متعدد ، على التوالي. تم تطبيع المقايسات على أساس امتصاص الجسم المضاد 3H9. تشير النسب المئوية إلى عدد الأجسام المضادة التي تم تسجيلها على أنها إيجابية. إجمالي 78 جسمًا مضادًا من الخلايا البائية الساذجة المعزولة من 3 متبرعين (عن طريق المتبرع ، ن = 37 و 27 و 14 جسمًا مضادًا) تمت مقارنتها مع 100 جسم مضاد من خلايا Cδ-CS B من 3 متبرعين (بواسطة المتبرع ، ن = 45 و 34 و 21 جسمًا مضادًا) و 64 جسمًا مضادًا من خلايا ذاكرة IgG من 4 متبرعين (عن طريق المتبرع ، ن = 25 و 12 و 7 و 20 من الأجسام المضادة). تمثل الخطوط الزرقاء العتبات الإيجابية التقريبية المحددة عن طريق حساب متوسط ​​± 2 SD للأجسام المضادة الساذجة (انظر النتائج).

كثيرًا ما ترتبط الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B البشرية بالحمض النووي أحادي الجديلة ومزدوج الشريطة. السمة المميزة للنشاط الذاتي في مرض الذئبة الحمراء هي إنتاج الأجسام المضادة التي تتفاعل مع الحمض النووي ، وخاصة الحمض النووي الريبي. من أجل إجراء مزيد من التقييم للنشاط الذاتي المحتمل لسلالة Cδ-CS مقارنة بخلايا الذاكرة B الساذجة أو IgG ، تم تقييم ارتباط الحمض النووي بواسطة ELISA. تم اختبار ارتباط الحمض النووي للأجسام المضادة المختلفة عند 1 ميكروغرام / مل و 3 تخفيفات تسلسلية إضافية 4 أضعاف. يتم عرض منحنيات ربط التشبع في الشكل 3. تم تحديد تقارب ربط مضاد للحمض النووي عن طريق تركيب المنحنى. تم تسجيل الأجسام المضادة ذات الامتصاص المحسوب لتركيز 1 ميكروغرام / مل الذي كان 2 SD أعلى من متوسط ​​الامتصاص لـ 95 ٪ من الأجسام المضادة الساذجة عند هذا التركيز على أنها إيجابية ضد الحمض النووي (الشكل 3). للمقارنة باستخدام نفس نظام التعبير ، تم إنتاج الجينات المتغيرة التي تشفر 2 من الأجسام المضادة المميزة جيدًا والتي تُستخدم عادةً لدراسة تفاعل مضاد الحمض النووي على هيئة فأر خيالي / أحادي النسيلة IgG-مؤتلف بشري (الشكل 3) ، بما في ذلك 3H9 ، يستخدم كجينات محورة لاكتشاف تحرير المستقبلات (3) ، و H241 (22). وبالتالي ، يمكن مقارنة هذه الأجسام المضادة الكلاسيكية المضادة للدنا ومتعددة التفاعل مباشرة مع كواشف الكشف المتطابقة مع الأجسام المضادة البشرية المختبرة هنا. تم تطبيع جميع ELISA إلى الجسم المضاد للتحكم 3H9 المتضمن في كل لوحة ELISA.

تكون الأجسام المضادة التي تتفاعل مع ssDNA أكثر شيوعًا في الأفراد المصابين بأمراض المناعة الذاتية مقارنة بالأفراد الأصحاء ، ومع ذلك ، فهي لا تُشخص الحالة المرضية. كما هو مبين في الشكل 3 ، 8 من 78 (10٪) من الأجسام المضادة المنتجة من الخلايا البائية الساذجة كانت تفاعلية مع ssDNA. هذا يتفق مع تقرير سابق من Wardemann et al. حيث تم تحليل أجسام مضادة من 93 خلية بائية ساذجة منها عدة جزيئات ssDNA مرتبطة (7). تردد أكبر (9 من 64 ، أو 14٪) من الأجسام المضادة من خلايا ذاكرة IgG المرتبطة بـ ssDNA. في المقابل ، 21٪ (21 من 100) من الأجسام المضادة Cδ-CS تفاعلت مع ssDNA (الشكل 3 χ 2 ، ص = 0.05 لـ Cδ-CS مقابل ساذج ص = ليس مهمًا لـ Cδ-CS مقابل ذاكرة IgG).

والأكثر أهمية من الأجسام المضادة لـ ssDNA هي الأجسام المضادة لـ dsDNA ، لأنها تشير على الأرجح إلى علم الأمراض (23 ، 24). كانت الأجسام المضادة التي تتفاعل مع dsDNA أقل تواتراً من الخلايا الساذجة (6٪ ، أو 5 من 78) وخلايا الذاكرة IgG B (14٪ ، 9 من 64 الشكل 3) من خلايا Cδ-CS B. كانت الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS أكثر احتمالًا بمقدار الضعف لربط dsDNA من الأجسام المضادة من الخلايا الساذجة (21 من 100 ، أو 21 ٪ 2 ، ص = 0.006 لـ Cδ-CS مقابل ساذج). مرة أخرى ، نظرًا لأن الأجسام المضادة IgG تميل إلى أن تكون متعددة التفاعلات إلى حد ما (8) ، على الرغم من زيادة بنسبة 50٪ ، فإن الأجسام المضادة لـ Cδ-CS لم تربط الحمض النووي الريبي بشكل كبير بشكل متكرر. التباين بين الجهات المانحة لجميع فحوصات النشاط الذاتي مبين في الشكل 4 أ. كما لاحظ تيلر وزملاؤه سابقًا ، تحتوي حجرة الذاكرة IgG على مستويات متفاوتة على نطاق واسع من التفاعل المضاد للحمض النووي (8). تم أيضًا اختبار الأجسام المضادة التي تربط dsDNA للارتباط مع الخلايا الحركية لـ كريثيديا لوسيليا، لأن هذا الاختبار أكثر صرامة ويعتبر المعيار الذهبي للكشف عن تفاعل dsDNA في التشخيص السريري لـ SLE. بشكل عام ، كانت هناك مراسلات جيدة مع نتائجنا من ELISA ، حيث أن الأجسام المضادة ذات التقارب العالي لـ dsDNA بواسطة ELISA مرتبطة أيضًا كريثيديا kinetoplasts (البيانات غير معروضة). وهكذا ، على غرار نتائج فحوصات ELISA ، يرتبط أحد الأجسام المضادة الساذجة والعديد من الأجسام المضادة IgG المضادة للحمض النووي كريثيديا كان لدى kinetoplasts عالية الكثافة وأخرى من الأجسام المضادة IgG ارتباط يمكن اكتشافه بشكل طفيف. أيضًا كما تنبأت فحوصات ELISA ، ترتبط 10 من الأجسام المضادة Cδ-CS كريثيديا كان لدى kinetoplasts والعديد من الآخرين ارتباط قابل للاكتشاف ولكن منخفض الكثافة. من هذه التجارب ، نستنتج أن خلايا Cδ-CS B غالبًا ما تكون أكثر تفاعلًا مع ssDNA و dsDNA أكثر من الخلايا B الساذجة ، وأن خلايا Cδ-CS B تميل إلى أن تكون أكثر تفاعلًا من الأجسام المضادة IgG.

التباين بين الجهات المانحة وتواتر التفاعلات المتعددة. (أ) يعني ± SEM للجهات المانحة للفحوصات المختلفة التي تم إجراؤها. (ب) النسبة المئوية للأجسام المضادة من كل مجموعة (خلايا Cδ-CS B أو خلايا B ساذجة أو خلايا ذاكرة IgG B) التي تربط 0-1 أو 2 أو 3 أو جميع المستضدات الأربعة المختبرة (ssDNA و dsDNA و LPS والأنسولين) . تُعرَّف الفعالية المتعددة على أنها ارتباط أكثر من مولد ضد واحد. يشير الجزء الأصفر من الرسم البياني إلى النسبة المئوية التي ترتبط بمستضد واحد وبالتالي لم تكن تفاعلية متعددة. دلالة إحصائية (χ 2 ، ص = 0.04) لـ Cδ-CS مقابل الأجسام المضادة للخلايا B الساذجة.

عادة ما تكون الأجسام المضادة من خلايا Cδ-CS B متعددة التفاعلات. لتحديد ما إذا كانت خلايا Cδ-CS B تميل إلى التعبير عن أجسام مضادة متعددة التفاعلات تتفاعل مع العديد من المستضدات الذاتية وغير الذاتية ، قمنا أيضًا باختبار التفاعل مع الأنسولين البشري المؤتلف وعديد السكاريد الدهني من ه. القولونية. كما هو مبين في الشكل 4 ب ، أظهر عدد أكبر بشكل ملحوظ من خلايا Cδ-CS - من الأجسام المضادة المشتقة من الخلايا الساذجة تفاعلية متعددة ، ولكن ليس أكثر من الأجسام المضادة المشتقة من خلايا IgG. في حين أن 20٪ (20 من 100) من الأجسام المضادة المشتقة من خلية Cδ-CS مرتبطة بما لا يقل عن 2 من المستضدات بواسطة ELISA ، فإن الأجسام المضادة أقل بكثير من الخلايا الساذجة (9٪ ، أو 7 من 79 2 ، ص = 0.039) مع 2 أو أكثر من المستضدات. بالنسبة لخلايا الذاكرة IgG ، كان حدوث تفاعل متعدد أقل من Cδ-CS (16٪ مقابل 20٪ ، أو 10 من 64 مقابل 20 من 100) ومع ذلك ، لم يتم الوصول إلى الأهمية. في الختام ، كانت الأجسام المضادة من الخلايا البائية التي تحولت صنفها إلى IgD أو IgG متعددة التفاعلات بشكل عام.

إجمالاً ، مع الأخذ في الاعتبار التردد العالي لتفاعل HEp-2 و ANA وتكرار مضادات الحمض النووي والتفاعل المتعدد ، خلصنا إلى أن 56 ٪ من الأجسام المضادة لـ Cδ-CS كانت ذاتية التأثير. وهكذا كانت خلايا Cδ-CS ذاتية النشاط أكثر بمرتين من الأجسام المضادة للخلايا الساذجة (24 ٪ ذاتية التفاعل ، χ 2 ، ص & lt 0.0001) و 1.8 ضعفًا أكثر تواترًا من الأجسام المضادة المشتقة من خلايا IgG (31٪ ذاتي الفعالية ، χ 2 ، ص & lt 0.001). من هذا التحليل ، خلصنا إلى أن خلايا Cδ-CS B عادة ما تكون ذاتية النشاط.

يحدث تبديل فئة IgD في كل من الخلايا البائية ذات الأجسام المضادة الطبيعية والخلايا ذات النشاط الذاتي الناتج عن فرط الطفرات الجسدية. من الممكن أن يكون التبديل الطبقي إلى IgD قد حدث فقط من أجل النشاط الذاتي الذي تم إدخاله أثناء الاستجابات المناعية بسبب الطفرات الجسدية المفرطة المميزة لخلايا Cδ-CS B (الشكل 1C) (11). وجد تقرير حديث من تيلر وزملاؤه تواترًا مرتفعًا بشكل مدهش لخلايا الذاكرة ب IgG متعددة التفاعلات ، وكان التفاعل عادةً ناتجًا عن فرط الطفرات الجسدية المتراكمة (8). بدلاً من ذلك ، من المعقول أن يكون التبديل الطبقي إلى IgD قد حدث قبل حدوث طفرة جسدية ومستقل عن تفاعل GC الطبيعي. تمشيا مع هذا التخمين ، لقد أوضحنا سابقًا أن خلايا Cδ-CS B تتراكم الطفرات الجسدية المستهدفة التي تعطل النشاط الذاتي الطبيعي للأجسام المضادة المشفرة بواسطة V.ح4-34 قطعة الجينات (16). اقترح هذا الاكتشاف أن تراكم فرط الطفرات الجسدية المفرطة في الجينات المتغيرة لخلايا Cδ-CS B ربما يكون ناتجًا عن الضغط الانتقائي لتغيير الأحماض الأمينية التي تسبب النشاط الذاتي الطبيعي بالإضافة إلى زيادة التقارب مع المستضدات الأجنبية. من أجل الحصول على نظرة ثاقبة حول أصل الخلايا البائية ذاتية النشاط التي تم تحويلها إلى فئة IgD ، قمنا بتمييز دور الطفرة الجسدية في التوسط في النشاط الذاتي. حقيقة أن 11 من 100 (11٪) من الأجسام المضادة لـ Cδ-CS التي تم التعبير عنها كانت من جينات متغيرة غير محفرة سمحت لنا بتحديد ما إذا كانت الخلايا البائية التي تم تحويلها إلى فئة IgD يمكن أن يكون لها نشاط ذاتي طبيعي (ليس بسبب الطفرات). لاحظ أن الجينات المتغيرة التي ترمز هذه النسخ كانت مشابهة لتلك الموجودة في معظم الأجسام المضادة لـ Cδ-CS مع الاستخدام التفضيلي لـ Jح6 مقطع جيني ، مناطق تحديد تكاملية طويلة 3 [CDR3s] ، واستخدام سلسلة l-light (البيانات غير معروضة). كما هو مبين في الشكل 5 أ ، كانت ترددات النشاط الذاتي لمستضد HEp-2 ، والربط بـ dsDNA ، وتعدد الاستجابة متشابهة في الأجسام المضادة المتحولة وغير المطفرة من خلايا Cδ-CS B وكانت أعلى من تواتر الأجسام المضادة الذاتية من الخلايا الساذجة وخلايا ذاكرة IgG . قدم هذا التحليل أيضًا التحقق من أن هذه الحيوانات المستنسخة Cδ-CS ذات جينات المنطقة المتغيرة غير المطفرة لا تلوث الخلايا الساذجة. بالإضافة إلى ذلك ، أشارت مقارنة التتر المضاد للحمض النووي مع تكرار بدائل الأحماض الأمينية إلى عدم وجود ارتباط بين تقارب dsDNA وتراكم الطفرات الجسدية ، حيث تميل التتر إلى أن تكون أعلى في النسخ العديدة التي لا تحتوي على طفرات (الشكل 5 ب). ). من هذه الملاحظات ، خلصنا إلى أن فئة الخلايا التي تم تحويلها إلى IgD يمكنها التعبير بشكل طبيعي عن أجسام مضادة ذاتية التفاعل (مشفرة بالخط الجرثومي) مستقلة عن فرط الطفرات الجسدية.

يمكن أن يحدث Cδ-CS للخلايا التي تعبر عن الأجسام المضادة ذاتية الحركة (الطبيعية) وكذلك تلك التي اكتسبت نشاطًا ذاتيًا عبر الطفرات الجسدية. (أ) تُظهر الأجسام المضادة Cδ-CS المشفرة بواسطة جينات متغيرة (سلالة جرثومية) مستويات من نشاط HEp-2 الذاتي ، وربط الحمض النووي ، وتعدد تفاعلات مماثلة لتلك الموجودة في الجينات المتغيرة الطافرة جسديًا. تظهر النسب المئوية للأجسام المضادة من كل مجموعة سكانية فرعية. (ب) تم استخدام منحنيات ملزمة من 1 ميكروغرام / مل من الأجسام المضادة للحمض النووي من خلايا Cδ-CS B إلى الحمض النووي لحساب الامتصاص (النقاط الزرقاء). أظهرت مقارنة هذه الامتصاصية مع تكرار بدائل الأحماض الأمينية (القضبان الحمراء) أنه لا يوجد ارتباط بين تقارب dsDNA وتراكم الطفرات الجسدية. تم إرجاع الجينات المتغيرة للنسخ 14 و 17 (العلامات النجمية) إلى تسلسل السلالة الجرثومية لتحديد ما إذا كانت الطفرات الجسدية قد تسبب ارتباطًا بالحمض النووي. (جيتم فقدان ارتباط الحمض النووي عندما يتم التعبير عن اثنين من الأجسام المضادة لـ DNA Cδ-CS (استنساخ 14 ، استنساخ مربع أزرق 17 ، دائرة زرقاء) من جينات متغيرة عادت إلى متواليات غير محفزة للخط الجرثومي (استنساخ 14 ، استنساخ مربع أسود 17 ، دائرة سوداء). تم تقييم الارتباط المضاد للحمض النووي بواسطة ELISA (الامتصاص [OD415]) نسبة إلى الجسم المضاد أحادي النسيلة 3H9 ذو التقارب العالي للحمض النووي (الخط الأحمر). GL ، خط جرثومي.

يعتبر الأرجينين أهم بقايا للربط المضاد للحمض النووي (25 ، 26). كانت الأجسام المضادة ذات التفاعل الطبيعي مع الحمض النووي وعدد من الأجسام المضادة الأخرى تحتوي على أرجينينات تم إدخالها إلى CDR3 عن طريق إعادة تركيب VDJ (كانت الحيوانات المستنسخة Cδ-CS 1 و 2 سلالة جرثومية ، لاحظ أيضًا أن الأرجينين تم إدخالها في CDRs للنسخ 4 ، 6 ، 8 و 10 و 11 و 12 و 14 و 21 الشكل التكميلي 2). كانت إحدى الملاحظات المهمة هي أن معظم الحيوانات المستنسخة Cδ-CS ذات التفاعل المضاد للحمض النووي تحتوي أيضًا على أرجينينات تم تقديمها بسبب تعديلات الكودون التي نتجت عن طفرة جسدية (الشكل التكميلي 2). في الواقع ، كان 15 من 22 (68 ٪) من استنساخ ربط Cδ-CS dsDNA يحتوي على ما يصل إلى 7 أرجينينات تم إدخالها عن طريق الطفرة في السلاسل الثقيلة و / أو الخفيفة (استنساخ 18 يحتوي على معظم أرجينينات قدم الشكل التكميلي 2). يشير هذا إلى أن النشاط الذاتي الذي لاحظناه ربما يكون قد نشأ نتيجة لطفرات جسدية تم إدخالها أثناء الاستجابات المناعية. من أجل استكشاف هذا الاحتمال ، أنشأنا وعبرنا عن نظرائنا غير المطفرة للجينات المتغيرة لـ 2 من الأجسام المضادة للحمض النووي من خلايا Cδ-CS (استنساخ 14 و 17 الشكل 5 ب). لم يرتبط أي من المتغيرات غير المحورة بالحمض النووي DNA ، مما يدل على أن التفاعل المضاد للحمض النووي الذي لاحظناه نشأ نتيجة لفرط الطفرة الجسدية (الشكل 5 ج). وبالتالي ، فإن الأجسام المضادة للحمض النووي التي تسبب في النهاية أمراض المناعة الذاتية قد تنشأ بشكل شائع نتيجة للاستجابات المناعية النوعية للمستضد لدى الأشخاص الأصحاء. مجتمعة ، تشير هذه التحليلات إلى أن خلايا Cδ-CS B يمكن أن تكون إما ذاتية التشغيل بشكل طبيعي أو أن نشاطها الذاتي يمكن أن ينشأ بسبب تغيرات الأحماض الأمينية الناتجة عن فرط الطفرات الجسدية.

توجد عدة احتمالات للمعدلات العالية للنشاط الذاتي الموجودة في خلايا Cδ-CS B. يُعتقد أن تحول الفئة إلى IgD وخلايا Cδ-CS B الناتجة تنشأ أثناء تفاعلات GC لأنها تعبر عادةً عن جينات متغيرة للغاية متغيرة ، ويتم توسيعها نسبيًا ، ولا يمكن عزلها إلا كخلايا GC أو ذاكرة أو بلازما (11) ، 13 ، 14 ، 16). لم نتمكن من تمييز ما إذا كانت الخلايا البائية ذاتية التنشيط قد تم تحفيزها لتبديل الفئة إلى IgD أو ما إذا كانت الخلايا البائية التي تعبر عن IgD ذاتية التنشيط يتم اختيارها بشكل تفضيلي. في كلتا الحالتين ، يمكن تصور عدد من النماذج الافتراضية. أولاً ، قد تكون هناك آلية موجهة يتم من خلالها استهداف منطقة التبديل المشفرة Cδ في الخلايا البائية البشرية النشطة التي تكون ذاتية التفاعل. قد تكون هذه الآلية قد تطورت لإنقاذ الخلايا البائية ذاتية التفاعل من أجل دور متخصص أو منخفض في المناعة التي تنطوي على IgD. من المثير للاهتمام اعتبار أن الوظيفة المراوغة لـ IgD قد تشارك بشكل فريد في تحمل الذات (راجع المرجع 15). ومع ذلك ، وجدت تحليلات الفئران المعدلة وراثيا التي تعبر عن IgD أو IgM وحدها كأجسام مضادة فرقا طفيفا بين IgD و IgM في تحمل الخلايا البائية أو الاختيار السلبي (27). في الواقع ، يشير عدد من الدراسات إلى أن IgD يزيد من إشارات IgM لاختيار الخلايا البائية بشكل إيجابي في المرجع الوظيفي (راجع المراجع 15 و 28). مع وضع هذه الدراسات في الاعتبار ، يمكن تصور العديد من النماذج الأخرى التي لا يلعب فيها IgD دورًا محددًا في التسامح. أحد الاحتمالات هو أن الخلايا البائية ذاتية التنشيط قد يتم تثبيطها من تبديل الفئة إلى الأنماط النظيرية Ig في اتجاه المصب (أي IgG ، IgA ، IgE) ، تاركًا فقط منطقة التبديل C المشفرة متاحة للتبديل في الخلايا التي كانت مرتبطة سابقًا بالمستضد الذاتي. قد يحدث تثبيط التبديل الطبقي كمظهر من مظاهر الحساسية. كلا النموذجين أعلاه مثيران للاهتمام لأن كل منهما يقترح أن آليات التحمل يمكن أن تتحكم بشكل مباشر في تبديل فئة الغلوبولين المناعي.

الفرضية البديلة هي أن تبديل الفئة إلى IgD عشوائي (أي أن أي خلية يمكن أن تتبدل) ، وأن اختيار خلايا Cδ-CS B يحدث بعد تبديل الفصل ، مما يتسبب في بقاء تفضيلي للنسخ المستنسخة ذاتي النشاط. على سبيل المثال ، تم اقتراح أنه ، مقارنة بمستقبلات IgM وحدها ، يوفر التعبير عن IgD بقاءًا تفضيليًا (29) وتجنيد الخلايا البائية للاستجابات المناعية التي قد تسمح بالإنقاذ عن طريق التحفيز المزمن باستخدام مستضد ذاتي (30). تفسير آخر محتمل هو أنه عندما يتم تحفيزها بواسطة مستضدات ذاتية أو بدون إشارات ملحقة مطلوبة عادة ، فإن التعبير عن IgD فقط على سطح الخلية B قد لا يؤدي إلى موت الخلية البائية. قد يوفر توضيح الآلية الفعلية التي تتسبب في تنشيط خلايا Cδ-CS B تلقائيًا رؤى مهمة حول دور IgD كمستقبل للخلايا البائية وفي الآليات الطرفية للتسامح المناعي.

عادةً ما تعبر خلايا الذاكرة B من IgG عن أجسام مضادة ذاتية منخفضة التقارب (8) ، غالبًا نتيجة للتغيرات الناتجة عن الطفرات الجسدية المتراكمة. في دراستنا ، كان لدى 31٪ من الأجسام المضادة IgG نشاط ذاتي قابل للاكتشاف. من الجدير بالملاحظة أن التحليلات الحديثة قد وجدت أن الأجسام المضادة من خلايا الذاكرة ب IgM + نادراً ما تكون ذاتية التفاعل ، ولكن عندما تم العثور على النشاط الذاتي كان سببه طفرات جسدية متراكمة (19). وبالمثل ، فإن معظم حالات النشاط الذاتي التي تظهر في خلايا الذاكرة ب IgG + المأخوذة من الأشخاص الأصحاء ناتجة عن طفرات جسدية (8). من المعروف أن خلايا الذاكرة B من IgG + قد تراكمت تقريبًا ضعفين تكرار الطفرات النقطية كخلايا ذاكرة IgM (31) وبالتالي غالبًا ما تكون ذاتية النشاط (8). تراكمت خلايا Cδ-CS B بدورها معظم الطفرات النقطية ، بمتوسط ​​21 ± 7 تبادلات أساسية لكل V.ح الجين مقارنة بـ 14 ± 5 ​​لكل جين لطفرات IgG و 8 ± 4 لكل جين لخلايا IgM GC وخلايا الذاكرة (الشكل 1C). في الوقت نفسه ، فإن خلايا Cδ-CS B هي أيضًا الأكثر نشاطًا ذاتيًا في أغلب الأحيان ، على الرغم من أنه على عكس خلايا الذاكرة IgG و IgM ، فإن 10 ٪ من خلايا Cδ-CS B غير المتحولة لا تزال ذاتية النشاط (الشكل 5 أ). قد تكون حجرة ذاكرة IgM ذات الطفرة المعتدلة أكثر تذكيرًا بمرجع الخلية B الساذج الذي يتم اختياره بعد ذلك بعد تفاعل المستضد ، وبالتالي تقليل التردد الكلي للأجسام المضادة الذاتية (19).في المقابل ، يمكن اختيار الخلايا البائية النشطة بشكل مفرط والتي تتراكم المزيد من الطفرات وتؤدي في النهاية إلى تبديل الفئة لتجنب النشاط الذاتي المرضي ، كما يتضح من التمايز التفضيلي لخلايا Cδ-CS B ، ولكن مع ذلك ، فإن المزيد من الاختلاف عن السلالة الجرثومية يؤدي إلى زيادة تواتر IgG خلايا الذاكرة B ذاتية التفاعل ومتعددة الاستجابة. أفاد كالتون وزملاؤه مؤخرًا أن هناك نقطة تفتيش انتقائية تزيل استنساخ الخلايا البائية النشطة تلقائيًا أثناء الانتقال إلى خلايا البلازما (32). يمكن لنقطة التفتيش هذه أن تكبح قدرة خلايا الذاكرة IgG النشطة على أن تصبح خلايا تفرز الأجسام المضادة في الأشخاص الأصحاء. أحد التخمينات النهائية هو أنه قد تكون هناك اختلافات نوعية بين الأجسام المضادة IgG و Cδ-CS ذاتية التنشيط ، كما هو مقترح من خلال زيادة كثافة ربط الأجسام المضادة لـ Cδ-CS بـ ANA (الشكل 2C) ومستضدات HEp-2 (الشكل التكميلي 1). على سبيل المثال ، قد يتم امتصاص أو إخفاء النشاط الذاتي المحتمل منخفض الكثافة للأجسام المضادة IgG متعددة التفاعلات من خلال تفاعل غير محدد مع جزيئات أخرى في مصل الدم ، وبالتالي لا يمثل تهديدًا كبيرًا للذات ولكنه لا يزال يمثل تهديدًا للمستضد الذي تم اختيارهم من أجله ترتبط بتقارب كبير. في المقابل ، قد تكون الخصائص المحددة في خلايا Cδ-CS B أكثر نشاطًا ذاتيًا بشكل صارخ. مطلوب تحليل أكثر تعمقًا لخصوصية IgG مقارنةً بخصوصية Cδ-CS وتقاربها مع المستضدات الذاتية لتوضيح هذا الاحتمال.

في الختام ، توضح النتائج الواردة هنا أن الخلايا البائية Cδ-CS (IgD-only) لديها معدل عالٍ من النشاط الذاتي في الأشخاص الأصحاء. قد يوفر توصيف الآلية التي تجعل غالبية خلايا Cδ-CS B ذاتية النشاط تقدمًا مهمًا في فهمنا للآليات المحيطية للتسامح المناعي وربما فهمًا أفضل للوظيفة المراوغة للنمط النظري IgD.

عزل الخلايا الليمفاوية B والقياس الخلوي. تم عزل الخلايا الليمفاوية B من اللوزتين أو الدم البشري كما هو موصوف سابقًا (11 ، 14 ، 31). تم عزل جميع الأنسجة والدم باتباع إرشادات المعاهد الوطنية للصحة الراسخة بموافقة مجلس المراجعة المؤسسية من مجلس المراجعة المؤسسية لمؤسسة أوكلاهوما للبحوث الطبية (IRB) (الدم واللوزتين) ومركز العلوم الصحية بجامعة أوكلاهوما IRB (اللوزتين). تم الحصول على اللوزتين من مستشفى الأطفال بجامعة أوكلاهوما أثناء استئصال اللوزتين الروتينية وكان الدم من معهد أوكلاهوما للدم ، أوكلاهوما سيتي ، أوكلاهوما ، الولايات المتحدة الأمريكية. تم إعفاء استخدام أنسجة اللوزتين والدم من الموافقة الكتابية. كان جميع المتبرعين باللوزتين أطفالًا أصحاء ولديهم تاريخ من التهاب اللوزتين (ولكن بدون أي التهاب حالي). كان الدم من المتطوعين الشباب البالغين. لفترة وجيزة ، تم استئصال الخلايا الفردية من اللوزتين. تمت تنقية الكسور المخصبة بالخلايا البائية باستخدام كواشف RosetteSep (StemCell Technologies Inc.) والتدرج الليمفاوي (CellGro Mediatech Inc.) مع إضافة rbc للأغنام. تم بعد ذلك تخصيب الخلايا البائية بالقرب من النقاء عن طريق استنفاد حبة مغناطيسية باستخدام مجموعة Miltenyi Biotec B Cell Isolation kit II. تم عزل خلايا B الساذجة مثل IgD + IgM + CD38 - (لوزة) أو CD27 - (دم) وخلايا Cδ-CS B تم عزلها على أنها IgD + IgM - CD38 + ، وتم تضخيم نصوص خلايا ذاكرة IgG في الدم المحيطي بواسطة RT-PCR من خلايا الذاكرة الإجمالية المصنفة (IgD - IgM - CD27 + الشكل 1B) باستخدام داكو Cytomation MoFlo أو مقياس التدفق الخلوي BD FACSAria. تم فرز لوحات كل من Igκ + و Igλ + من الخلايا الساذجة و Cδ-CS من 2 من المتبرعين. نظرًا لأن كسور Igκ و Igλ كانت متشابهة لجميع المقايسات ، فقد تم تجميع الكسور للتحليلات الواردة هنا. كما هو متوقع ، كانت معظم خلايا Cδ-CS B سلبية Igκ (Igλ +). تم فرز الخلايا السائبة من الأنماط الظاهرية الثلاثة واللجوء إليها في لوحات PCR ذات 96 بئرًا لضمان نقاء الخلايا المفردة (تم اكتشاف 98٪ -99٪ نقاء على نوع من الخلايا المفردة). كانت الأجسام المضادة المستخدمة في قياس التدفق الخلوي عبارة عن مضاد IgM مترافق مع APCs (Southern Biotechnology Associates) ، مضاد IgD مترافق مع PE (BD) ، مضاد حيوي لـ CD38 متبوعًا بالستربتافيدين- مترافق مع ثلاثي الألوان (Invitrogen) ، مضاد Igκ- مترافق إلى FITC (Invitrogen) ، و anti-CD27 - مترافق مع PE (Invitrogen).

وحيدة الخلية RT-PCR و PCR. تم فرز الخلايا B المفردة في لوحات PCR تحتوي على 10 ملي مولار من Tris-HCL مع 40 وحدة / ميكرولتر من مثبط RNase (Promega). تم تجميد الصفائح على الفور على الجليد الجاف وتخزينها في درجة حرارة -80 درجة مئوية. تم تضخيم كل خلية في تفاعل RT-PCR بخطوة واحدة (Qiagen) باستخدام مزيج من البادئات الحسية الخاصة بالمناطق الرائدة والبادئات المضادة للحساسية الخاصة بـ Cμ- (ساذج) ، Cδ- (Cδ-CS) ، أو Cγ- مناطق ثابتة للسلاسل الثقيلة ومناطق Cκ-Constant أو Cl-Constant للسلاسل الخفيفة. تم تضخيم ميكروليتر واحد من كل تفاعل RT-PCR في تفاعلات PCR منفصلة لعائلات الجينات الفردية الثقيلة والخفيفة باستخدام بادئات متداخلة. تم نشر جميع متواليات التمهيدي سابقًا (7 ، 18) باستثناء البادئات المضادة لـ Cδ (الخارجية ، 5′-GTGTCTGCACCCTGATGATGATG-3 ، متداخلة ، 5′-GGGAACACATCCGGAGCCTTG-3) والاشعال المضادة لـ Cγ (خارجية ، 5 ′ -TCTTGTCCACCTTGGTGTTGCT-3 ′ ، متداخلة ، 5′-AGGTGCTCTTGGAGGAGGGT-3). تم تسلسل منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل (Applied Biosystems 3730 محلل DNA). عند تحديد الجينات المتغيرة ، تم استخدام بادئات الإحساس الفريدة للجينات المتغيرة المعينة والبادئات المضادة للحواس التي تربط الجينات الوصلية المعينة لتضخيم 1 ميكرولتر من تفاعل RT-PCR لدمج مواقع التقييد في نهايات الجينات المتغيرة للاستنساخ والتعبير . بعض متواليات الجينات المتغيرة المعروضة للمقارنة في الشكل 1 و C و D ، كانت من البيانات التاريخية التي نشرها مختبرنا سابقًا (12 ، 16 ، 33 ، 34). لتوليد الجينات المتغيرة المعاد تدويرها للتجارب في الشكل 5 ، استخدمنا امتداد تداخل حبلا PCR لقوالب متغيرة ثقيلة متغيرة ومتغيرة الضوء وقوالب J وأشعال متداخلة ترميز مناطق CDR3 باستخدام بادئات V و J الخاصة بالجينات.

تعبير الجسم المضاد وحيدة النسيلة المؤتلف. بعد التنقية والهضم ، تم استنساخ cDNAs المتضخمة للجينات المتغيرة للجسم المضاد من كل خلية مفردة في نواقل التعبير التي تحتوي على مناطق IgG أو Igκ أو Igλ البشرية كما هو موضح سابقًا (7). تم نقل البلازميدات Maxi Prepar Plasmid Maxi Kit (Qiagen) التي تحتوي على جينات Ig الثقيلة والخفيفة السلسلة إلى خط الخلايا 293A باستخدام فوسفات الكالسيوم أو كاشف تعداء Roche Applied Science FuGENE 6 وفقًا للبروتوكول المقترح من الشركة المصنعة. تم السماح لخلايا 293A المنقولة بإفراز الأجسام المضادة في DMEM الخالي من المصل المضاف إليه 1 ٪ Nutridoma-SP (Roche) لمدة 4 إلى 5 أيام. تمت تنقية الأجسام المضادة باستخدام أعمدة بروتينية ثابتة (بيرس). تم التحقق من التعبير السليم عن الجسم المضاد ونقاوته بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام متعدد الأكريلاميد ، وتم تحديد تركيزات الجسم المضاد المنقى باستخدام EZQ Protein Quantitation Kit (Invitrogen).

تحليلات ELISA و HEp-2 للنشاط الذاتي. لفحص الأجسام المضادة المعبر عنها لتفاعل الحمض النووي أو التفاعل المتعدد ، تم طلاء لوحات ELISA الدقيقة (Costar Corning Inc.) بـ 10 ميكروغرام / مل من العجل الغدة الصعترية ssDNA أو dsDNA (Invitrogen) أو LPS (Sigma-Aldrich) أو الأنسولين البشري المؤتلف (Fitzgerald) . تم استخدام اتحاد الماعز المضاد للبشر IgG – peroxidase (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.) للكشف عن ارتباط الأجسام المضادة المؤتلفة ، متبوعًا بالتطور مع ركيزة بيروكسيداز الفجل (Bio-Rad). تم قياس الامتصاصية عند OD415 على قارئ صفيحة ميكروسكوبية (الأجهزة الجزيئية).

تم فحص الأجسام المضادة من أجل تفاعل HEp-2 عن طريق التألق المناعي باستخدام شرائح HEp-2 التجارية وفقًا لبروتوكول الشركات المصنعة المقترح (BION Enterprises Ltd.). تم تحليل شرائح HEp-2 باستخدام مجهر الفلورسنت Zeiss Axioplan II. تم فحص الأجسام المضادة من أجل ارتباط ANA باستخدام مجموعة QUANTA Lite ANA (INOVA Diagnostics Inc.) واكتشافها باستخدام مركب بيروكسيديز المتقارن IgG المضاد للإنسان (محدد سلسلة γ) (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.) متبوعًا بالتطوير باستخدام ركيزة بيروكسيداز الفجل. (بيو راد). تمت مقارنة كل تفاعلات HEp-2 و ANA بمصل التحكم الإيجابي من مريض الذئبة والمصل غير التفاعلي من متبرع دم سليم. تم تطبيع فحوصات QUANTA Lite ANA إلى جسم مضاد أحادي النسيلة ANA + داخلي (mAb: 050504P181L + B09).

إحصائيات. تم إجراء التحليلات الإحصائية باستخدام برنامج Microsoft Excel 2003 أو برنامج GraphPad Prism 4. للتحليلات في الشكل 1 ، A و B ، والشكل 2B ، الطالب 2-الذيل ر تم إجراء الاختبارات. للتحليلات في الشكل 2 ، A و C ، الشكل 3 ، والشكل 4B ، تم إجراء اختبارات χ 2.

نشكر جوديث أ. جيمس لقراءتها النقدية للمخطوطة وتقديم اقتراحات قيمة. نشكر Larry Wysocki على توفيره ، و Martin Weigert و David Stollar للسماح لنا باستخدام أحاديات التحكم الإيجابي 3H9 و H241 المضادة للحمض النووي. تم تقديم المساعدة الفنية من قبل ليني أبراهام وشيريل كريستوفرسون من مرفق تسلسل الحمض النووي التابع لمؤسسة أوكلاهوما للأبحاث الطبية (OMRF) ، وموظفي مرفق التصوير الأساسي لـ OMRF ، وجاكوب باس وديانا هاميلتون في مرفق قياس التدفق الخلوي OMRF Flow Cytometry Core. كما نشكر مستشفى الأطفال بجامعة أوكلاهوما وخاصة سارة جونسون وجيسوس ميدينا لتوفير عينات اللوزتين. قدمت ليزا ريدجواي المساعدة الكتابية. تم تمويل هذا العمل جزئيًا من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة P20RR018758-01 و P20RR15577-02 إلى P. ويلسون.

الاختصارات غير القياسية المستخدمة: ANA ، مستضد النوى Cδ-CS ، تحولت الفئة إلى Cδ CDR ، منطقة تحديد التكامل dsDNA ، DNA HEp-2 مزدوج الشريطة ، خط خلية ورم الظهارة البشرية 2 ssDNA ، DNA أحادي الجديلة.

تضارب المصالح: أعلن الكتاب أنه لا يوجد تضارب في المصالح.

معلومات مرجعية: J. كلين. استثمار.117: 1558-1565 (2007). دوى: 10.1172 / JCI27628


تحدث إعادة تركيب الأجسام المضادة بمفتاح الفصل قبل تكوين المركز الجرثومي.

أبرز الملامح: ذروتها نصوص السلالة الجرثومية قبل تكوين GC والانخفاض السريع في الخلايا الجذعية.
تم العثور على الحيوانات المستنسخة التي يسيطر عليها IgM في المتأخرات GCs ، مما يجادل ضد التبديل المستمر Ig
تتوقف المسؤولية الاجتماعية للشركات إلى حد كبير عند ظهور فرط الحركة الجسدية
انخفاض المسؤولية الاجتماعية للشركات بسبب انخفاض تعبير GLT و APE1 ربما يكون منسقًا بواسطة BCL6 (المصدر: Roco et al.، Graphical Abstract. Immunity)

يُعتقد أنه عند التحصين ، تحدث عمليتان مهمتان تغيران وظيفة وتفاعل الأجسام المضادة (الغلوبولين المناعي ، Ig) مما يؤدي إلى حماية مناعية طويلة الأمد. إحدى العمليات هي التغيير في تفاعل المستضد للخلايا البائية بسبب تحرير جانب التعرف على المستضد من الجسم المضاد (عملية تسمى فرط الحركة الجسدية ، SHM) مع الاختيار النسيلي اللاحق ، والعملية الأخرى هي إعادة التركيب بمفتاح الفصل (CSR). إعادة تركيب مفتاح الفصل هو إعادة ترتيب موضع السلسلة الثقيلة للجلوبيولين المناعي (Ig). يمكن لخلايا B الناضجة ، بموجب هذا ، التبديل من النمط المتماثل IgD-IgM إلى فئات النمط المتماثل IgA أو IgG أو IgE التي لها وظائف مستجيب مختلفة ، مع الحفاظ على خصوصية المستضد الخاص بها. يُعتقد أن كلا العمليتين تحدث في المراكز الجرثومية (GCs) ، وهي بيئة مكروية متخصصة في الأعضاء اللمفاوية الثانوية. في المقالة الأخيرة من Roco et al. ، أظهروا أن CSM يحدث بالفعل قبل تكوين GC ويغير فهمنا الحالي لاستجابات الأجسام المضادة.

استخدم المؤلفون نموذجًا للتحصين تلقت فيه الفئران خلايا B معينة من ليسوزيم بيض الدجاج (HEL) وبروتين HEL ، ووجدوا أن الدليل على إعادة تركيب CSR حدث في وقت مبكر بعد 1.5 يومًا من التحصين (عند الخلية التائية: حدود الخلية البائية) ، مسبقًا لتشكيل GC في 3.5 أيام. لمعالجة هذه الظاهرة في ذخيرة متعددة النسيلة ، قاموا بتحليل المراكز الجرثومية المعزولة للفئران المحصنة وتقييم عدد الطفرات التي تم الحصول عليها والنمط الإسوي للغلوبولين المناعي المحدد. أظهرت تحليلات علم الوراثة أن تبديل الصنف حدث قبل الحصول على طفرات في المنطقة المتغيرة من الجسم المضاد. قد يكون تناقص المسؤولية الاجتماعية للشركات عند تكوين GC ناتجًا عن تنظيم مثبط النسخ BCL6 ، وهو أمر ضروري لتكوين المركز الجرثومي ، حيث أن BCL6 مرتبط بمنطقة المروج لـ APEX1 (مطلوب لـ CSR) وليس APEX2 (مطلوب لـ SHM) ، وبالتالي يحتمل حظر عمل APEX1.

تلقي هذه النتائج ضوءًا جديدًا على توقيت المسؤولية الاجتماعية للشركات ، حيث إن المسؤولية الاجتماعية للشركات داخل GC من شأنها أن تحرف توزيع النظائر ولا تدعم GCs التي يهيمن عليها IgM التي أبلغ عنها Roco et al. بالإضافة إلى ذلك ، قد تمثل صيانة خلايا الذاكرة ب IgM + في الواقع خزانًا لذاكرة الخلايا البائية التي يمكن أن تخضع لاحقًا للمسؤولية الاجتماعية للشركات عند إعادة التنشيط للتكيف مع التفاعلات المختلفة. قد يستفيد المرضى الذين يعانون من اضطرابات مناعية بوساطة الخلايا البائية من هذه الأفكار حول كيفية تنظيم الخلايا البائية للمسؤولية الاجتماعية للشركات حيث يحدد هذا نافذة معينة للتدخل السريري المحتمل.


6. تنشيط الخلايا البائية وتمايز خلايا البلازما

الشكل 1: المراحل الخلوية لتمايز الخلايا البائية المتأخرة. توجد غالبية الخلايا البائية الناضجة في بصيلات الأعضاء اللمفاوية وتعرف باسم الخلايا البائية الجريبية. تشمل المجموعات الفرعية المتخصصة الأخرى من الخلايا B خلايا المنطقة B الهامشية ، والتي تتمركز في المنطقة الواقعة بين اللب الأحمر والأبيض في الطحال ، وخلايا B1 الموجودة في التجويف البريتوني والجنبي. تعبر جميع مجموعات الخلايا B الناضجة عن عوامل النسخ المقترنة ببروتين الصندوق 5 (PAX5). PU.1 عامل مضاد للفيروسات 8 (IRF8) و BTB و CNC homologue 2 (BACH2) ، في حين أن المستويات المنخفضة من IRF4 ناتجة عن إشارات مستقبلات المستضد. الخلايا البائية التي يتم تنشيطها بواسطة المستضد (يُطلق عليها أيضًا الأرومات اللمفاوية B) قادرة على الانتشار السريع ، وإعادة تركيب تبديل فئة الغلوبولين المناعي ، والتمايز إلى البلازما قصيرة العمر التي تعبر عن مستويات عالية من IRF4 وبروتين ربط X-box 1 (XBP1) ، ومتوسط (وسط) مستويات بروتين النضج 1 الناجم عن الخلايا الليمفاوية B (BLIMP1) والأجسام المضادة المفرزة. يمكن للخلايا B الجريبية أيضًا تنظيم سرطان الغدد الليمفاوية للخلايا البائية 6 (BCL-6) وقمع تعبير IRF4 أثناء تفاعل المركز الجرثومي (GC) حيث يحدث نضج تقارب مستقبلات المستضد. تخرج الخلايا البائية ذات مستقبلات المستضدات عالية التقارب من GC وتتمايز إما إلى خلايا الذاكرة B ، والتي تعبر عن توقيع نسخي مماثل للخلايا B الناضجة ، أو خلايا البلازما طويلة العمر ، والتي تعبر عن مستويات عالية من BLIMP1 و IRF4 و XBP1 وتنتج كميات كبيرة كميات من الجسم المضاد. على الرغم من أن خلايا البلازما BLIMP1h مشتقة من خلايا BLIMP1mid ، إلا أنه لا يزال من غير المعروف ما إذا كانت خلايا البلازما مشتقة من البلازما (المشار إليها بالسهم المتقطع) أو من مرحلة سابقة ملتزمة بخلايا البلازما. كما تتميز مساهمة خلايا المنطقة B وخلايا B1 في حجرة خلايا البلازما طويلة العمر بشكل سيء. [Nutt et al.، Nature Reviews Immunology، 2015]

تفاعل المركز الجرثومي (GC)

  • المراكز الجرثومية (GCs) هي مناطق داخل الأعضاء الليمفاوية الثانوية التي تتطور بعد التعرض للخلايا التائية والمستضد المعتمد على المستضد. هذه المناطق هي مصادر للأجسام المضادة عالية التقارب.
  • أحد المسارات الأساسية اللازمة لتفاعل GC هو التفاعل بين خلايا CD4 T (Tfh) المساعدة والخلايا البائية.
  • تعتبر خلايا Tfh ضرورية لتفاعل GC لأنها تلعب دورًا في زيادة كفاءة استجابات الجسم المضاد
  • تعبر خلايا GC Tfh عن IL-21 عند مستويات عالية. هذا السيتوكين مهم لتمايز وعمل خلايا Tfh. تنتج هذه الخلايا أيضًا IL-4 و IFN- و gamma و IL-2 بمستويات معتدلة / متغيرة. Bcl-6 هو عامل نسخ وعلامة مهمة لخلايا Tfh. عامل النسخ هذا مهم لتطوير خلايا Tfh وخلايا B الجراثيم.
  • لقد ثبت أن خلايا Tfh تلعب دورًا مهمًا في إنتاج استجابات الأجسام المضادة عالية التقارب وطويلة الأمد للقاحات وأمراض المناعة الذاتية والحساسية وحتى السرطان. هذه الخلايا مهمة في فيروس نقص المناعة البشرية لأنها تساعد في تطوير الأجسام المضادة المحايدة على نطاق واسع والتي يمكن أن تمنع دخول الفيروسات عبر الأنواع الفرعية المختلفة لفيروس نقص المناعة البشرية.
  • تنتقل الخلايا البائية الملتزمة بالـ GC إلى الجريب المركزي بسبب فقدان EBI2 وبدء تفاعل GC.
  • يمثل تفاعل GC نقطة تفتيش حيث يتم تغيير ذخيرة BCR الخاصة بالمستضد بشكل عشوائي في خلايا GC B شديدة التكاثر في المنطقة المظلمة (DZ) من خلال فرط التحور الجسدي (SHM) الناجم عن التنشيط الناجم عن ديميناز السيتدين (AID).
  • يتم اختيار الخلايا البائية المتحولة التي اكتسبت طفرات تعزيز التقارب بواسطة الخلايا التائية في منطقة الضوء (LZ) من GC أو قد تهاجر مرة أخرى إلى DZ وتخضع لجولة أخرى من SHM عندما لا يكون تقاربها منافسًا.
  • وبالتالي ، يتم اختيار الخلايا البائية بشكل إيجابي من خلال الدورات التكرارية وسيوفر توضيح الآليات الأساسية معلومات مهمة لتطوير اللقاح.
  • تفاعل GC مطلوب أيضًا لإعادة تركيب مفتاح الفصل (CSR). خلايا البلازما عالية التقارب التي تهاجر مرة أخرى إلى BM هي نقطة النهاية لتفاعل GC.

الشكل 2: عدم التجانس والتمايز بين الخلايا التائية في المركز الجرثومي. يعتمد التزام الخلايا التائية في تعزيز استجابات الخلايا البائية للمركز الجرثومي ضد المستضدات المناعية إلى حد كبير على الأقل مبدئيًا على مشاركة TCR وتقدير تكلفة CD28 بواسطة الخلايا المتغصنة التي تقدم المستضد. عند تحريض BCL6 العابر بعد التنشيط ، تؤدي الخلايا التائية الساذجة CD4 + (Tnaive) إلى ظهور خلايا T (قبل Tfh) المساعدة قبل الجرثومية والتي تتطلب لاحقًا الاتصال بالخلايا B المماثلة لتلقي إشارات إعادة الإنفاذ عبر ICOS و PD1 و إشارات SAP لتحقيق استقرار BCL6 والالتزام بمسار تمايز الخلايا Tfh في المركز الجرثومي (GC). يعتبر اقتران الخلايا البائية وإشارات SAP مهمين أيضًا لتكوين خلايا NK Tfh من خلايا NKT (iNKT) الثابتة واستجابتها تجاه المستضدات المحتوية على الجليكوليبيد. يتم التوسط في قمع الخلايا التائية بوساطة الخلايا البائية النشطة و / أو غير الخاصة بالمستضد بواسطة خلايا CD8 + التنظيمية T (CD8 + Treg) المقيدة بـ Qa-1 (التي تمنع بشكل مباشر خلايا Tfh) والتنظيم الجريبي (Tfr) الخلايا. تتطور خلايا Tfr من الخلايا التائية التنظيمية CD4 + المعتمدة على BCL6 (nTregs) التي تستقبل إشارات TCR و CD28 وكذلك الإشارات التي تتوسطها SAP أثناء تفاعلات الخلايا البائية المتشابهة. Fo B ، الخلايا B الجرابية GC B ، ذاكرة الخلية B في المركز الجرثومي ، خلية الذاكرة B. [آر ، راميسكال وأمبير سي ، فينيسيا. المراجعات المناعية لعام 2013 Vol.252: 146 & # x2013155]


هل يحدث تبديل الصنف في كل من الخلايا البائية وخلايا البلازما؟ - مادة الاحياء

خلايا البلازما هي خلايا الدم البيضاء اللمفاوية البائية المتمايزة القادرة على إفراز الغلوبولين المناعي أو الجسم المضاد. تلعب هذه الخلايا دورًا مهمًا في الاستجابة المناعية التكيفية ، أي كونها الخلايا الرئيسية المسؤولة عن المناعة الخلطية. بدون وجودهم ، يقال أن الفرد مصاب بضخم غاما غلوبولين الدم ويكون شديد التأثر بالعدوى المتكررة. تتم هنا مراجعة النسب المكونة للدم وهيكل ووظيفة خلايا البلازما ، جنبًا إلى جنب مع العروض السريرية الناشئة عن نمو وتطور خلايا البلازما بشكل غير لائق.

وظيفة

تتطور خلايا البلازما من الخلايا الليمفاوية B التي تنشط بالمستضد في الأعضاء اللمفاوية الثانوية ، مثل الغدد الليمفاوية والطحال ، بعد تحفيز المستضد.من المعروف أن عوامل النسخ Blimp-1 و IRF4 و XBP-1 ضرورية لتمييز الخلايا البائية الناضجة إلى خلايا البلازما. تمايز خلايا البلازما ، مع عمل Blimp-1 في بداية XBP-1. [3] [4] [5] [6] & # 160 يرتبط أيضًا تمايز خلايا البلازما بتنشيط مسار إشارات استجابة البروتين غير المطوية (UPR). [5] ] [7] & # 160 UPR يساعد التنشيط في خلايا البلازما وقدرة rsquos على التكيف باستمرار مع البيئة المتغيرة باستمرار على الرغم من أن وظيفة UPR & rsquos لا تزال قيد التحقيق ، والاعتقاد السائد هو أن UPR يلعب دورًا في مراقبة تناسق الغلوبولين المناعي وتعديله و / أو قمع إفراز الغلوبولين المناعي.

إن أكثر خلايا الدم غير الناضجة & # 160 خلية & # 160 سلالة هي & # 160 بلازما. & # 160 يمكن للبلازما أن تتكاثر وتفرز كميات صغيرة من الأجسام المضادة. خلايا البلازما المتمايزة نهائياً أو الناضجة غير قابلة للتكاثر ، وهي أكبر بكثير من الخلايا البائية ، ويمكن أن تفرز كميات كبيرة من الأجسام المضادة. خلال عمرهم الممتد من 2 & # 160 إلى 3 أيام ، يقومون باستمرار بتوليف وإفراز الأجسام المضادة مع تحديد المستضد الذي يحفز سلائف خلايا البلازما على التكاثر والتمايز. تشير التقديرات إلى أن خلية بلازما واحدة يمكن أن تفرز مئات الآلاف من جزيئات الجسم المضاد في الثانية ، وهو مقياس رائع لقوة الاستجابة المناعية لمكافحة مسببات الأمراض. تعد خلايا البلازما ، كمصانع للأجسام المضادة ، من العوامل الهامة المساهمة في المناعة الخلطية.

على الرغم من أنه كان يُعتقد منذ فترة طويلة أن إنتاج الأجسام المضادة وإفرازها هما الوظائف الوحيدة لخلايا البلازما ، إلا أن الدراسات الحديثة تشير إلى تورط خلايا البلازما في تنظيم الاستجابة المناعية. ضمن هذه السعة ، وجد البحث أن خلايا البلازما تمنع نمو الخلايا المساعدة الجريبية. [9] الخلايا ، والتي بدورها تنتج IL-21 ، وهو بروتين مهم لعمليات نضج التقارب ، وطول عمر المركز الجرثومي ووظيفته ، والتمايز الطرفي للخلايا البائية. لذلك ، يمكن أن يؤدي نقص خلايا البلازما إلى تغيير نشاط المركز الجرثومي جنبًا إلى جنب مع المصائر المتغيرة و / أو مستويات الخلايا الليمفاوية البائية. في المقابل ، يبدو أن الخلايا التائية المساعدة الجريبية المحدودة و IL-21 ترفع من الوسط التنافسي لفسيولوجيا المركز الجرثومي النشط ، مما يؤدي إلى تقارب ونضج معزز للخلايا اللمفاوية البائية. مجتمعة ، تقترح هذه النتائج وجود حلقة تغذية مرتدة سلبية خاصة بمستضد ، مما يعدل إنتاج خلايا البلازما ، وبالتالي يخفف من أعداد خلايا البلازما الزائدة غير الضرورية والمحتملة المرضية. [9] [10]

كيمياء الأنسجة والكيمياء الخلوية

تتميز جميع خلايا البلازما ، وإن كانت طبيعية أو خبيثة ، بتعبيرها عن CD38 و CD138. [11] & # 160 يحفز السابق تخليق وتحلل الريبوز الدوري ، مما يؤدي إلى الحفاظ على مستويات الكالسيوم داخل الخلايا. [12] & # 160 على النقيض من ذلك ، فإن CD138 ، المعروف أيضًا باسم syndecan-1 ، يسمح لخلية البلازما بالارتباط ببروتينات المصفوفة خارج الخلية. وجدت الأبحاث الحديثة أنه بالإضافة إلى دور CD138 في التصاق خلايا البلازما ، يلعب CD138 دورًا إضافيًا في العمل كمستقبل مشترك لعامل النمو الظهاري (EGF) ، لا سيما في سياق المايلوما المتعددة. # 160 على الرغم من أن خلايا البلازما الخبيثة تعبر عن CD38 و CD138 جنبًا إلى جنب مع نظيراتها الطبيعية غير الخبيثة ، فإن السمة المميزة الفريدة لخلايا البلازما الخبيثة هي فقدان تعبير CD19 جنبًا إلى جنب مع التعبير الشاذ المحتمل عن CD56 ، وهي سمة مميزة للخلايا القاتلة الطبيعية (NK) . [11] [13]. ومع ذلك ، تجدر الإشارة إلى أنه ليس كل خلايا المايلوما تعبر عن CD56.

علامة إضافية جديرة بالملاحظة لخلايا البلازما هي CD79a. يلعب البروتين دورًا مهمًا في نقل إشارة مستضد الخلايا الليمفاوية البائية وتطور الخلايا اللمفاوية البائية بشكل عام وتثبيتها. من التعبير في عينات معينة من أورام خلايا البلازما.

ضوء الفحص المجهري

تختلف خلايا البلازما في الحجم من 14 إلى 20 ميكرومتر. إنها خلايا مستديرة إلى بيضاوية تحتوي على سيتوبلازم أزرق عميق وفير مع منطقة محيط نواة شاحبة تتوافق مع جهاز جولجي. لديهم نواة مستديرة موضوعة بشكل غريب الأطوار مع كروماتين خشن مرتبة في نمط وجه الساعة (عجلة فنية). [15] قد تحتوي على شوائب هيولي تسمى أجسام راسل أو شوائب كروية متعددة معبأة في السيتوبلازم (موت ، أو عنب ، أو خلايا خلوية). أجسام راسل وشوائب خلايا موت هي صهاريج شبكية إندوبلازمية متوسعة تحتوي على غلوبولين مناعي مكثف.

مجهر الكترون

يكشف الفحص المجهري الإلكتروني أن خلايا البلازما تحتوي على نواة دائرية غريبة الأطوار مع كروماتين مكثف ونواة متطورة. يعطي الكروماتين المرتبط بالغشاء النووي نوى خلايا البلازما الناضجة مظهرًا دائريًا في أقسام نسيجية. يحتوي السيتوبلازم على صفائف متوازية من الشبكة الإندوبلازمية الخشنة ، والألياف السيتوبلازمية ، والعديد من الميتوكوندريا متعددة الأشكال. يحتوي السيتوبلازم أيضًا على مركب جولجي المجاور للنواة مباشرةً. شوائب داخل الهيولى من أنواع مختلفة و mdashelliptical أو دائرية أو شبيهة بالإبرة بلورية و mdashare. يشكل تراكم كبير من الغلوبولين المناعي هذه الادراج.

الأهمية السريرية

يمكن أن يؤدي الانحراف عن تكاثر خلايا البلازما المناسبة إلى عدد من الأمراض السريرية. & # 160 تصنف هذه على أنها أورام خلايا البلازما ونقص المناعة لخلايا البلازما. & # 160

تتميز أورام خلايا البلازما بأنها تكاثر شاذ لخلايا البلازما النسيليّة التي تنتج الغلوبولين المناعي أحادي النسيلة وثقيل السلسلة والمُبدّل بالفئة ، ويُشار إليه بالبروتين M. من خلال هذا الانتشار ، يمكن تصنيف أورام خلايا البلازما إلى عدة حالات مرضية محددة. يتضمن تحديد مدى انتشار الأورام تقييمًا تشخيصيًا كاملًا ، والذي يتضمن الاختبارات والملاحظات المحددة التالية: CBC الكامل مع الرحلان الكهربي لبروتين مصل الدم التفاضلي (لتقييم البروتين M) المناعي (لتحديد كمية ونوع الغلوبولين المناعي) سلسلة خفيفة خالية من المصل تحليل المسح الكامل للهيكل العظمي (لتقييم وجود الآفات التحليلية) وخزعة نخاع العظم (لتحديد النسبة المئوية لخلايا البلازما النسيلة والتحليل الوراثي الخلوي المحتمل).

أورام خلايا البلازما

الاعتلال الجامائي وحيد النسيلة ذو الأهمية غير المحددة ، والمعروف أيضًا باسم MGUS ، هو أقل مظاهر شدة لأورام خلايا البلازما. تصنف MGUS على أنها مجموعة نسيلية من خلايا البلازما التي تفرز الغلوبولين المناعي ، على الرغم من أن تركيز بروتين M في الدم لا يتجاوز 3 جم / ديسيلتر. [18] & # 160 وبالمثل ، لا تتجاوز خلايا البلازما النسيلة 10٪ من نخاع العظام. غالبًا ما يكون المرضى بدون أعراض ، والعديد من مرضى MGUS لا يتطورون إلى ورم خبيث. & # 160 أظهرت الأبحاث أن انتشار MGUS يؤثر على 1٪ & # 160 إلى 2٪ من السكان في الولايات المتحدة وأوروبا. [19] & # 160 يتأثر الرجال أكثر من النساء ، وتزداد الإصابة مع تقدم العمر. علاوة على ذلك ، حددت الأبحاث انتشارًا أعلى بين الأفراد المنحدرين من أصل أفريقي ([20]).

تشير دراسات التركيب المناعي للبروتين أحادي النسيلة إلى أن حوالي 70٪ من حالات MGUS هي IgG و 15٪ IgM و 12٪ IgA و 3٪ ثنائية النسيلة. [21] & # 160 المحتوى على نوع الغلوبولين المناعي ، غالبًا ما يتم تصنيف MGUS إلى نوعين رئيسيين مع تطور سريري محتمل متميز. المرضى الذين يعانون من IgM MGUS قد يتطورون إلى ورم الغدد الليمفاوية اللمفاوية أو Waldenstr & oumlm macroglobulinemia. على النقيض من ذلك ، فإن تطور الحالات غير IgM MGUS يظهر على شكل ورم نقوي مشتعل أو المايلوما المتعددة.

المشتعلة المايلوما

مع استمرار تكاثر خلايا البلازما بشكل شاذ ، قد يتقدم الفرد إلى ما وراء معايير MGUS وهي مرحلة تم تحديدها سريريًا على أنها الورم النخاعي المشتعل. على النقيض من MGUS ، فإن مستويات بروتين M في الدم تساوي أو تزيد عن 3 جم / ديسيلتر ، وخلايا البلازما النسيلة & # 160 تضم 10٪ إلى 59٪ من نخاع العظام. [18] & # 160 حسب التعريف ، مريض مصاب بالورم النخاعي المشتعل لا تظهر مع آفات CRAB. تظهر آفات # 160CRAB ارتفاع الكالسيوم ، وعدم فعالية الكلى ، وفقر الدم ، وأمراض العظام (الآفات). إنها مظهر محتمل يظهر في المايلوما المتعددة ، كما هو موضح في القسم الفرعي التالي.

على غرار MGUS ، فإن وجود معايير احتراق المايلوما يظهر بدون أعراض. المايلوما إلى الورم النقوي المتعدد هو 10٪ سنويًا في السنوات الخمس الأولى 3٪ سنويًا على مدى السنوات الخمس المقبلة و 1٪ كل عام فصاعدًا.

المايلوما المتعددة

إن أخطر ظهور لأورام خلايا البلازما هو الورم النقوي المتعدد. على الرغم من أنها تشبه المايلوما المشتعلة في وجود تركيزات بروتين M في الدم لا تقل عن 3 جم / ديسيلتر ، إلا أن معايير المايلوما المتعددة تتطلب وجود خاصية إضافية واحدة على الأقل. يتضمن ذلك وجود أكثر من آفات CRAB ، وخلايا بلازما نسيلي لنخاع العظم تتجاوز 60٪ ، ونسبة سلسلة خفيفة خالية من المصل تساوي أو تزيد عن 100 ، وآفة بؤرية واحدة على الأقل تم اكتشافها في التصوير بالرنين المغناطيسي. [18] & # 160

يمثل المايلوما المتعددة حوالي 10٪ من جميع الأورام المكونة للدم. [19] & # 160 تختلف الأعراض من فرد لآخر وتتراوح من العلامات البؤرية غير المحددة إلى التورط الجهازي. تشمل الأعراض التي تظهر بشكل شائع فقر الدم ، وعادةً ما يكون ألمًا طبيعيًا وسويًا في العظام ، خاصةً في الصدر والفشل الكلوي الخلفي (ارتفاع الكرياتينين) ، والتعب ، والعدوى ، وفقدان الوزن. الوفاة بسبب العدوى أو الفشل الكلوي. يتراوح متوسط ​​البقاء على قيد الحياة من 2.5 إلى 5 سنوات وهو متغير بدرجة كبيرة.

أورام خلايا البلازما الأخرى

يُصنف الداء النشواني على أنه ترسب ليفية من سلسلة خفيفة من الغلوبولين المناعي من خلايا البلازما النسيليّة ، وغالبًا ما تكون من تركيبة لامدا. يمكن أن يحدث هذا بشكل مستقل أو كعقابيل لـ MGUS ، أو الورم النقوي المحترق ، أو الورم النقوي المتعدد. تؤكد صبغة الكونغو الحمراء الإيجابية على وجود الأميلويد ، ويتجلى ذلك باللون الأحمر / الوردي تحت الفحص المجهري الضوئي والتألق على شكل تفاح أخضر و # 160 انكسار عند الاستقطاب. تشمل أورام خلايا البلازما الإضافية ورم البلازما الانفرادي للعظام والورم البلازمي الزائد.

نقص خلايا البلازما

لمواجهة الاضطرابات السابقة ، التي تتميز بزيادة خلايا البلازما أو نواتجها الثانوية ، ينتج نقص المناعة المتغير الشائع (CVID) عن نقص أعداد خلايا البلازما الكافية. يتم تحديد تشخيص الاضطراب من خلال انخفاض مستويات IgG و IgA و / أو IgM. [23] & # 160 على وجه التحديد ، لوحظ CVID بمستوى IgG & lt 400 مجم / ديسيلتر. يؤدي نقص الغلوبولين المناعي إلى قابلية متزايدة للإصابة بالعدوى البكتيرية. علاوة على ذلك ، فإن الأفراد المصابين بـ CVID معرضون للعديد من الأمراض المزمنة ، بما في ذلك أمراض الرئة المزمنة ومرض التهاب الأمعاء واضطرابات المناعة الذاتية وتضخم اللمفاويات. نظرًا لأن هذا التشخيص هو التشخيص الذي سيبقى مع الفرد طوال حياته أو حياتها ، فإن عيار الأجسام المضادة لمسببات الأمراض الشائعة (أي & # 160المستدمية النزلية، MMR، varicella، pneumococcus) يجب أن تخضع لاختبارات متسقة. [23] & # 160 إذا انخفضت مستويات IgG إلى أكثر من 200 مجم / ديسيلتر ، فإن العلاج ببدائل الغلوبولين المناعي هو التوصية.

بالإضافة إلى CVID ، يُعزى أكثر من 100 نقص مناعي أولي إلى التطور غير السليم للخلايا اللمفاوية البائية و / أو وظيفتها ، بما في ذلك إنتاج الغلوبولين المناعي غير السليم. يتميز agammaglobulinemia (XLA) المرتبط بالكروموسوم X بطفرة BTK الجين (Bruton & rsquos tyrosine kinase) ، مما يثبط تكوين الخلايا السابقة B. [24] & # 160 والنتيجة هي تناقص عدد الخلايا الليمفاوية B الناضجة ، بما في ذلك خلايا البلازما ، وبالتالي انخفاض إنتاج الغلوبولين المناعي وإفرازه. بالنظر إلى وراثة XLA و rsquos ، يتأثر الذكور بشكل حصري تقريبًا. في المقابل ، يؤثر نقص IgA الانتقائي (SIGAD) ، وهو أكثر أنواع نقص المناعة الأولية شيوعًا ، على الذكور والإناث بالتساوي. ، وفكرة الطفرات المتعددة التي تسبب SIGAD قيد التحقيق. كما هو مذكور في الاسم ، فإن المرضى الذين يعانون من نقص IgA الانتقائي يفتقرون إلى IgA الموجود في مصل الدم ومستويات IgM و IgG في الغشاء المخاطي طبيعية. لذلك ، يبدو أن الحالة ناتجة عن التحول غير الصحيح للنمط النظوي إلى IgA و / أو نضوج الخلايا B غير المناسب لإفراز IgA. [24] من هذه الخلايا وعلم وظائف الأعضاء أمر بالغ الأهمية للتقدم السليم في العلوم الصحية.


الامتثال لإرشادات الأخلاق

تضارب المصالح

تم دعم هذا العمل من قبل وزارة التعليم والبحث الفيدرالية الألمانية (BMBF 01 EO 0803) إلى Marta Rizzi ، وصندوق أبحاث السرطان الألماني من خلال المنحة 109138 و DFG من خلال TRR130 إلى Hermann Eibel و Helene Kraus تم دعم Anne-Kathrin Kienzler من قبل مركز أكسفورد للبحوث الطبية الحيوية NIHR.

يعلن Heiko Sic أنه ليس لديه تضارب في المصالح.

حقوق الإنسان والحيوان والموافقة المستنيرة

لا تحتوي هذه المقالة على أي دراسات أجريت على موضوعات حيوانية بواسطة أي من المؤلفين. فيما يتعلق ببحوث المؤلفين المذكورة في هذه الورقة ، تم اتباع جميع الإجراءات وفقًا للمعايير الأخلاقية للجنة المسؤولة عن التجارب البشرية ومع إعلان هلسنكي لعام 1975 ، بصيغته المنقحة في عامي 2000 و 2008.


مناقشة

ظلت خصائص الخلايا البائية الساذجة غامضة. توضح دراستنا أن الخلايا البائية الساذجة ، التي لا تعبر عن CD27 وتحمل التسلسلات غير المحورة لجين منطقة Ig V ، يمكن أن تحفز CSR و AID وجميع الأنماط المتشابهة Ig باستثناء IgA. تم العثور على الخلايا البائية الساذجة ، مثل خلايا الذاكرة ب CD27 + ، لتتكاثر وتتمايز إلى خلايا بلازما دون تحور جسدي ملحوظ ، مما يشير إلى أن الأجسام المضادة المنتجة منخفضة التقارب.

يمكن تحفيز إنتاج IgG و IgM وليس IgA من الخلايا B الساذجة في تجربتنا عن طريق تحفيز مستقبلات Ig بواسطة إشارات SAC و CD40 بالتزامن مع السيتوكينات مثل IL-2 و IL-10. أفاد العديد من الباحثين 15،26 أن خلايا IgD + B المستخدمة كخلايا B ساذجة أنتجت Igs ، على الرغم من أن المجموعة تحتوي على خلايا CD27 + B. تشير نتائجهم إلى أن خلايا IgD + B السطحية اللوزية تنتج IgG1 و IgG2 و IgM في وجود SAC + IL-10 + CD40 / CD32T27 وتمتلك ميلًا فريدًا لتوليد IgM استجابة للربط المتقاطع المتزامن لـ Igs السطحي و CD40 .15

كل من إشارات IL-4 و CD40 ضرورية لتخليق IgE .27-29 لقد أبلغنا سابقًا أن CD27 - الخلايا البائية الساذجة لم تنتج IgE مع IL-4 + anti-CD40 mAb وحده. ومع ذلك ، في هذه التجربة ، ليس فقط خلايا الذاكرة ب CD27 + ولكن أيضًا CD27 - يمكن أن تنتج الخلايا البائية الساذجة IgE عندما يتم تحفيز الخلايا البائية باستخدام IL-4 + CD40 / CD32T. لوحظ تمايز خلايا CD27 - B إلى خلايا بلازما ، وإن كان بدرجة طفيفة ، في وجود IL-4 + CD40 / CD32T. في هذا الصدد ، أثبت we9 وآخرون 30 أنه يمكن إنتاج IgE بواسطة الخلايا البائية الساذجة في مرضى متلازمة فرط IgM المرتبطة بـ X. وبالتالي ، من الواضح أن كلاً من ذاكرة CD27 + و CD27 - الخلايا البائية الساذجة لديها القدرة على إنتاج IgE استجابة لـ IL-4 وإشارات CD40 الكافية. ومع ذلك ، فإن إشارات IL-4 و CD40 تسببت في مستويات هامشية فقط من إنتاج IgG و IgM بواسطة خلايا CD27 البالغة - وخلايا CB B (البيانات غير معروضة).

تم العثور على TGF-لمنع نمو الخلايا الليمفاوية وإفراز IgG و IgM من الخلايا البائية. أنظمة 23،24 بالإضافة إلى تبديل فئة IgA الموجه من TGF-β في الخلايا البشرية B في وجود استنساخ الخلايا التائية + CD4 المنشط PWM +. الإنتاج من خلايا IgD + البشرية المضادة لـ CD40 المنشط وفي تثبيط إنتاج IgA من خلايا IgD-B. + TGF-β + CD154 ناقلة للعدوى. وجدت نفس الدراسة أن TGF-قلل بشكل غير متوقع من إنتاج IgA وكذلك IgG و IgM من الخلايا B غير المنفصلة أو خلايا الذاكرة B في وجود SAC + IL-10 + IL-2 + CD40 / CD32T ، بينما CD27 - لم تنتج الخلايا البائية أي IgA في دراستنا حتى بعد إضافة TGF-في وجود SAC + IL-10 + IL-2 + CD40 / CD32T. أسباب هذا التناقض في نتائج إنتاج IgA بين البيانات المنشورة سابقًا وبياناتنا غير واضحة. أحد التفسيرات المحتملة هو أن الخلايا البائية الساذجة المستخدمة في التجارب المختلفة مختلفة. استخدم الباحثون الآخرون 15،34 خلايا IgD + B كخلايا B ساذجة على الرغم من أن خلايا IgD + B تحتوي على خلايا ذاكرة B IgD + CD27 + في خلايا B البالغة.

يسبق تخليق الخلايا البائية Ig نسخ من السلالة الجرثومية mRNA ، وتم التعبير عن mRNA الناضج بعد CSR. يحل CSR محل جينات المنطقة الثابتة Ig الثقيلة التي يتم التعبير عنها من C إلى جينات CH الأخرى. تأخذ CSR أماكن بين منطقتين عريضتين محاطتين بمناطق S ، مما يؤدي إلى حذف حلقات لجزء من الحمض النووي المتداخل .16 نظرًا لأن الخلايا البائية الساذجة في دراستنا أنتجت IgG و IgM و IgE ، فقد بحثنا أيضًا في قابلية CSR بواسطة الخلايا البائية الساذجة بعد التحفيز. أظهرت النتائج التي توصلت إليها أن الخلايا البائية الساذجة عبرت عن السلالة الجرثومية والنصوص الناضجة أن الخلايا لديها القدرة على حدوث CSR مع المحفزات المناسبة. على عكس الخلايا البائية الساذجة ، فإن خلايا الذاكرة B ، التي تحتوي على مستقبلات Ig مثل IgA و IgM و IgG و IgE في سطحها ، يتم التعبير عنها بشكل أساسي في نسخ ناضجة دون تحفيز.

AID - / - خلايا الطحال فشلت في الخضوع للمسؤولية الاجتماعية للشركات على الرغم من أنها عبرت عن نصوص السلالة الجرثومية .16 قد يكون AID متورطًا في تنظيم أو تحفيز خطوة تعديل الحمض النووي لكل من تبديل الفئة وفرط الحركة الجسدية .16 ربما يكون تعبير AID مطلوبًا قبل CSR. لتوضيح هذه النقطة ، قمنا بالتحقيق في تعبير AID بواسطة الخلايا البائية الساذجة. عبرت الخلايا البائية الساذجة بشكل ملحوظ عن AID عند التحفيز ، وربما تشارك في دقة CSR نتيجة لذلك. نظرًا لأن CD27 ، وهو علامة خلايا الذاكرة B ، تم تحفيزها أيضًا بواسطة الخلايا B الساذجة ، فقد يكون AID متورطًا في تعبير CD27 وقد ينظم التمايز في خلايا الذاكرة B مع فرط الحركة الجسدية.

نظرًا لأن فرط الحركة الجسدية قد يحدث في الخلايا الجذعية السرطانية ، حيث يتم تنشيط الخلايا البائية وتكاثرها ، وتعزز إشارات CD40 أو BCR بشكل كبير تكاثر الخلايا البائية ، فإن تفاعل CD40-CD154 أو مستضد BCR لا يزال مرشحًا لمحفز فرط التحور الجسدي . بالإضافة إلى ذلك ، فإن الربط المتقاطع لـ CD40 بواسطة مضاد CD40 mAb + CD32T مع أو بدون IL-4 عزز بشكل كبير تكاثر الخلايا B وإنتاج IgE مقارنةً بمضاد CD40 mAb وحده. لتوضيح تأثيرات تفاعل CD40-CD154 ومشاركة BCR على تحريض الطفرة الجسدية ، استخدمنا خلايا CB B و PB CD27 البالغة - خلايا B ساذجة ، وكلاهما يحمل تسلسلات غير مخففة في Ig Vح5 جينات المنطقة. لم تتسبب إشارات CD40 في حدوث طفرات جسدية من CB والنوع النقي IgD + CD27 البالغ - الخلايا البائية الساذجة. بالإضافة إلى ذلك ، لم يتم تحريض فرط الطفرات الجسدية بواسطة خلايا CB B في وجود CD40 / CD32T وخلايا T البالغة التي تنشط CD3 في أيدينا (البيانات غير معروضة). تم الإبلاغ عن أن خلايا CD5 + B تعمل بشكل أساسي في إنتاج الأجسام المضادة منخفضة التقارب ، وتعبير 35 و CD5 على CB وخلايا PB CD27 - B البالغة مختلفة. ومن ثم ، فإن وظيفة خلايا CB والبالغ CD27 - B قد تكون مختلفة ، وقد لا تمثل خلايا CB B هدفًا مثاليًا لدراسة فرط التحول الجسدي. في هذا الصدد ، فإن النتيجة التي توصلنا إليها هي أنه لا يوجد فرق في تحريض فرط الطفرة الجسدية بين البالغين CD27 - الخلايا البائية الساذجة وخلايا CB B (البيانات غير معروضة).

أثناء العدوى ذات الصلة سريريًا ، يتم تكوين الأجسام المضادة المعادلة قريبًا ، وتكون هذه الأجسام المضادة خالية من فرط الطفرات الجسدية في جينات منطقة Ig V الخاصة بها. 30 من خلال الطفرة الجسدية. لذلك قمنا بتحليل فرط الحركة الجسدية في جينات منطقة Ig V التي تم الحصول عليها من خلايا البلازما المتولدة من خلايا B ساذجة مع تحفيز SAC + IL-10 + IL-2 + CD40 / CD32T. كشف تحليل التسلسل لجينات منطقة Ig V أن خلايا البلازما المتولدة من الخلايا البائية الساذجة في نظامنا كانت تتكون في الغالب من مقصورات غير محفرة ، مما يشير إلى أنها تنتج أجسامًا مضادة منخفضة التقارب (الجدول 4). درسنا أيضًا فرط الطفرة الجسدية لخلايا البلازما المستحثة بعد 14 يومًا من التحفيز في المزرعة. في هذه التجربة ، لم يكن تواتر طفرات خلايا البلازما المستحثة من خلايا CB B المنشطة مختلفًا بين ثقافة لمدة 8 أيام وثقافة لمدة 14 يومًا (البيانات غير معروضة). أظهرت العديد من التقارير أن فرط الحركة الجسدية للخلايا البائية وبعض خلايا سرطان الغدد الليمفاوية البائية يمكن تحريضها في المختبر بمساعدة الخلايا التائية وعند ارتباط BCR.

يظهر مخطط افتراضي للمسؤولية الاجتماعية للشركات ، والطفرات الجسدية ، وتوليد خلايا البلازما من الخلايا البائية الساذجة (الشكل 8). تخضع الخلايا البائية الساذجة للمسؤولية الاجتماعية للشركات والطفرات الجسدية المفرطة في الخلايا الجذعية في الجسم الحي. ومع ذلك ، فقد تم عرض التنظيم المستقل للتبديل بين الفئات والطفرات الجسدية المفرطة في أنظمة مختلفة ، باستخدام أشياء مثل خط خلية سرطان الغدد الليمفاوية Burkitt ، أو 41 خلية بشرية GC B ، أو الماوس في نظام المختبر. القدرة على تحفيز تبديل الصنف والطفرات الجسدية المفرطة باستخدام IgD + CD27 البشري - الخلايا البائية الساذجة النظيفة. في نظامنا المختبر CSR ، تم تحقيق تمايز خلايا البلازما وإنتاج Ig ، ولكن ليس فرطًا جسديًا ملحوظًا بواسطة IgD + CD27 - خلايا B ساذجة ، مما يشير إلى العملية المختلفة لتبديل الفئة والطفرات الجسدية المفرطة في الخلايا البائية الساذجة. توضح هذه الملاحظة بعض آليات القابلية للإصابة بالعدوى عند الولدان وبعض حالات نقص المناعة الأولية.

العملية المختلفة للتبديل الطبقي وفرط الطفرة الجسدية والتوليد المقترح لخلايا البلازما في البشر.

بعد أن تنجح سلائف الخلايا البائية في توليد مستقبلات مستضدات وظيفية في نخاع العظم ، يتم إطلاقها في تجمع الخلايا البائية كخلايا بائية ساذجة. تخضع الخلايا البائية الساذجة التي لا تحتوي على CD27 للتوسع قليل النسيلة ، والتبديل الطبقي ، والطفرات الجسدية المفرطة في الخلايا الجذعية ، ويتم التعبير عن CD27 على سطحها ، مما يؤدي إلى تمايزها إلى خلايا الذاكرة ب. قد تنتج خلايا البلازما المولدة من خلايا الذاكرة B ، والتي تحمل حمولة عالية من الطفرات الجسدية ، أجسامًا مضادة عالية التقارب (IgG ، IgM ، IgA ، IgE). قد تنتج خلايا البلازما من الخلايا البائية غير المحورة خارج الخلايا الجذعية السرطانية أو من خلال الخلايا الجذعية قبل حمل فرط الطفرة الجسدية أجسامًا مضادة منخفضة التقارب (IgG ، IgM ، IgE).

العملية المختلفة للتبديل الطبقي وفرط الطفرة الجسدية والتوليد المقترح لخلايا البلازما في البشر.

بعد أن تنجح سلائف الخلايا البائية في توليد مستقبلات مستضدات وظيفية في نخاع العظم ، يتم إطلاقها في تجمع الخلايا البائية كخلايا بائية ساذجة. تخضع الخلايا البائية الساذجة التي لا تحتوي على CD27 للتوسع قليل النسيلة ، والتبديل الطبقي ، والطفرات الجسدية المفرطة في الخلايا الجذعية ، ويتم التعبير عن CD27 على سطحها ، مما يؤدي إلى تمايزها إلى خلايا الذاكرة ب. قد تنتج خلايا البلازما المولدة من خلايا الذاكرة B ، والتي تحمل حمولة عالية من الطفرات الجسدية ، أجسامًا مضادة عالية التقارب (IgG ، IgM ، IgA ، IgE). قد تنتج خلايا البلازما من الخلايا البائية غير المحورة خارج الخلايا الجذعية السرطانية أو من خلال الخلايا الجذعية قبل حمل فرط الطفرة الجسدية أجسامًا مضادة منخفضة التقارب (IgG ، IgM ، IgE).

يشكر المؤلفون الدكاترة S.Nonoyama و T. Kobata و S. Ito و C. Morimoto على دعمهم.


شاهد الفيديو: تحويل خلايا جذعية إلى خلايا رئوية وظيفية (ديسمبر 2022).