معلومة

هل تنمو الخميرة على أطباق أجار LB؟

هل تنمو الخميرة على أطباق أجار LB؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أود أن أزرع خلايا الإشريكية القولونية على السيلوفان أعلى صفيحة LB ، ثم تنمو خلايا الخميرة على نفس صفيحة LB. هل (أو إلى أي مدى) تنمو الخميرة على أطباق LB؟ هل توجد وسائط تركيب يمكن أن تكون جيدة لكل من الإشريكية القولونية والخميرة؟ هل قام أي شخص بهذه التجربة؟


ليس جيدًا ، فهم بحاجة إلى سكر العنب. استخدم YBT:

20 جم ببتون الكازين Tpe-M 10 جم خلاصة الخميرة 20 جم سكر العنب 17 جم أجار

ف. إلى 975 مل في الماء.

الرقم الهيدروجيني إلى 6.2 واط 5M هيدروكسيد الصوديوم

ف. إلى 1 لتر مع ثنائي الماء.

الأوتوكلاف لمدة 45 دقيقة عند 121 درجة مئوية

الاستغناء معقم و مطهر في أطباق بتري.

تخزينها في 4C لمدة تصل إلى 12 أسبوعًا.

إذا كنت ترغب في تنمية الثقافة المشتركة ، فافعل ذلك في LB مع 20g / L Dex.


4.2: وسط نمو الخميرة

  • بمساهمة من Clare M. O & rsquoConnor
  • أستاذ مشارك فخري (علم الأحياء) في كلية بوسطن

بالنسبة للثقافة الروتينية ، يستخدم العلماء عادةً وسائط غنية توفر جميع العناصر الغذائية التي تحتاجها الخلايا لتنمو. غالبًا ما تكون المكونات الفردية للوسائط الغنية غير محددة.على سبيل المثال ، تُزرع الخميرة عادةً في وسط يُعرف باسم YPD، وهو بسيط وغير مكلف للتحضير. ldquo وص& rdquo في YPD يشير إلى مستخلص الخميرة ، الذي يحتوي على المركبات القابلة للذوبان في الماء التي تتولد عندما تضطر الخميرة إلى الهضم الذاتي. (قد يكون أولئك الذين زاروا أستراليا قد واجهوا مستخلص الخميرة في الانتشار الشعبي ، Marmite.)ص& rdquo يشير إلى الببتون ، وهو خليط من الببتيدات والأحماض الأمينية التي يتم تحضيرها عن طريق هضم البروتين الحيواني بالبروتياز. ldquo ود& rdquo يشير إلى سكر العنب ، أو الجلوكوز ، وهو مصدر الكربون المفضل للخميرة (شيرمان ، 2002).

نظرًا لأن YPD يتكون إلى حد كبير من مستخلصات خام ، فقد يُظهر تكوينه تباينًا كبيرًا من دفعة إلى أخرى. نادرًا ما يكون هذا الاختلاف مشكلة ، لأن YPD يحتوي على ما يكفي من العناصر الغذائية الأساسية لتلبية متطلبات التمثيل الغذائي للخلايا. ومع ذلك ، تتطلب العديد من التجارب وسائط ذات ملف معرف تكوين. لتلبية هذه الحاجة ، طور مجتمع الخميرة مجموعة متنوعة من الوسائط الاصطناعية. يمكن التلاعب بالمكونات الفردية للوسائط التركيبية لتلائم احتياجات التجربة. (في وقت لاحق من الفصل الدراسي ، سوف نستخدم وسائط محددة لاختيار أنماط وراثية معينة.)

يمكن أن تنمو الخميرة في مزارع سائلة أو على سطح الصفائح التي تحتوي على وسائط صلبة. يستخدم Agar عادة لتصلب وسط النمو السائل عند تحضير الأطباق. عادة ما يتم الحفاظ على السلالات على لوحات أجار للاستخدام الروتيني. تنمو الخلايا في مستعمرات على أطباق. الخلايا في المستعمرة متشابهة جدًا من الناحية الجينية ، إن لم تكن متطابقة ، لأنها مشتقة من نفس الخلية السلفية. يمكن تخزين معظم سلالات الخميرة على أطباق في الثلاجة لعدة أشهر مع الحد الأدنى من فقدان الصلاحية.


كيفية صنع لوحات أجار LB

  1. تزن 7.5 جرام أجار ، 5 جرام تريبتون ، 5 جرام كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) و 2.5 جرام مستخلص الخميرة ويضاف إلى زجاجة دوران سعة 1 لتر.
  2. قم بقياس 400 مل من الماء المقطر وأضفه إلى زجاجة دوران.
  3. رج الزجاجة لإذابة الكواشف.
  4. بمجرد أن تذوب الكواشف تمامًا ، اضبط درجة الحموضة إلى 7.0 باستخدام محلول هيدروكسيد الصوديوم (NaOH) (1 نيوتن).
  5. بمجرد تعديل الأس الهيدروجيني ، قم بتعبئة المحلول إلى 500 مل باستخدام الماء المقطر.اختياري: ضبط حمام مائي على 55 درجة مئوية.
  6. لتعقيم الحل ، الأوتوكلاف على دورة السائل (20 دقيقة في 15 رطل / بوصة مربعة).
  7. اترك المحلول ليبرد حتى 55 درجة مئوية تقريبًا أو دافئًا بما يكفي ليحمله في يدك دون حرقه ، وإذا لم يكن لديك الوقت الكافي لمراقبة درجة الحرارة ، ضع الزجاجة في حمام مائي. هذا سوف يمنع الحل من الاستقرار قبل الأوان.
  8. عندما يبرد ، أضف المضاد الحيوي المناسب إلى المحلول ولفه حتى يمتزج.
  9. قم بإعداد أطباق بتري في بيئة معقمة (يتم تنظيف الأسطح بنسبة 70٪ من الإيثانول وما إلى ذلك). صب بعناية طبقة رقيقة من المحلول في أطباق بتري لتغطية الجزء السفلي من اللوحة (حوالي 10-20 مل لكل لوحة). حاول تجنب نقل أو إنشاء أي فقاعات.
  10. اترك الألواح لتستقر قبل تخزينها في الثلاجة (انظر أدناه).

هل تنمو الخميرة على أطباق أجار LB؟ - مادة الاحياء

الخميرة لها احتياجات غذائية بسيطة. غير قادر على إجراء عملية التمثيل الضوئي ، فهي تتطلب مصدرًا منخفضًا للكربون يمكن أن يكون مركبًا بسيطًا مثل الأسيتات. بالإضافة إلى ذلك ، فإنها تتطلب أيضًا مصدرًا للنيتروجين مثل كبريتات الأمونيوم. يمكن أن تستخدم الخميرة مجموعة متنوعة من مركبات النيتروجين العضوية ، بما في ذلك اليوريا والأحماض الأمينية المختلفة. المركب المعقد الآخر الوحيد الذي يحتاجونه هو فيتامين والبيوتين. بالطبع ، تتطلب أيضًا مجموعة متنوعة من الأملاح والعناصر النزرة.

خاصية أخرى لمعظم الخميرة ، بما في ذلك S. الخباز، هو أنهم يقسمون بالبراعم وليس على الانشطار الثنائي (بايرز 1981). ينبثق برعم صغير من سطح الخلية الأم ويتضخم حتى يصبح بحجم الوالد تقريبًا.

بينما يحدث هذا الكروموسومات من الوالد تكرار. عند الانقسام ، عندما تنقسم النواة ، يتم نقل إحدى النوى إلى البرعم ، ثم تنفصل الخليتان.

Schizosaccharomyces pombe ، خميرة شائعة أخرى ، تشبه بشكل ملحوظ S. خزف ، إلا أنها تنمو كخلايا أسطوانية تتمدد وتنقسم إلى نصفين عن طريق الانشطار الثنائي ، مثل البكتيريا. إن انقسام الخلية مناسب جدًا لملاحظة أن هذه الخميرة لديها أيضًا إمكانية استخدامها في تدريس علم الأحياء.

تتضمن دورة حياة الخميرة ، مثلها مثل جميع الكائنات الحية الأعلى ، خطوة تُعرف باسم الانقسام الاختزالي ، حيث تنفصل أزواج من الكروموسومات لإعطاء مجموعات جديدة من السمات الجينية.

تشتهر الفطريات الزائدة ، مثل خميرة الخباز ، بأبحاث علم الوراثة لأن الأبواغ الأسكوية التي تنتجها في كل أسكوس هي نتاج الانقسام الاختزالي. عندما تتعرض الخميرة للإجهاد الغذائي ، على سبيل المثال بالحرمان من مصدر الكربون أو مصدر النيتروجين ، ثنائي الصيغة الصبغية سوف تتكاثر الخميرة. تمر النواة ثنائية الصبغة الانقسام الاختزالي، تنتج أربعة أحادي العدد النوى التي يتم دمجها بعد ذلك في أربعة أبواغ أسكسية مقاومة للإجهاد ، مغلفة في أسكوس (انظر الشكل 1). هذه العبوة الخاصة بأربعة منتجات انتصافية تجعل التحليل الجيني بسيطًا بشكل خاص.

السهولة التي يمكن بها الحفاظ على خميرة الخباز كخلايا أحادية الصيغة الصبغية أو خلايا ثنائية الصبغيات هي خاصية أخرى تجعلها جذابة لعلماء الوراثة.

ما فائدة الخميرة؟

استخدم الناس الخميرة ، وهي بلا شك واحدة من أقدم الكائنات الحية المستأنسة ، من أجل التخمير المتحكم فيه للطعام والشراب وللتخمير في الخبز عبر التاريخ المسجل. اليوم ، يتم استخدامها أيضًا في مجموعة متنوعة من عمليات التخمير التجاري وتحويل الكتلة الحيوية. تعتمد فائدتها على قدرتها على تحويل السكريات ومصادر الكربون الأخرى إلى إيثانول في غياب الهواء (اللاهوائي) ، وإلى ثاني أكسيد الكربون والماء في وجود الهواء (الهوائية). يعتبر الإيثانول بديلاً قيمًا للبترول كوقود وكمواد خام لتصنيع العديد من المواد الكيميائية التجارية الهامة.

الخميرة هي أيضا طعام جيد. إنه غني بالبروتين وهو مصدر جيد بشكل غير مألوف لفيتامينات ب. يوفر مصدرًا قيمًا للعناصر الغذائية المهمة في الأنظمة الغذائية قليلة اللحوم أو النظم الغذائية النباتية. ولكن في حين أن القليل من الانبعاث من المطبخ محير تمامًا مثل رائحة الخميرة للخبز ، يتفق معظم الناس على أن الخميرة النقية مذاقها سيئ للغاية.

أجناس الخميرة الأخرى لها أيضًا استخدامات عملية. يمكن للبعض استخدام الهيدروكربونات ، مثل البترول ، كمصدر للكربون. يمكن لهذه الكائنات الحية تحويل البترول إلى بروتين حرفيًا. يتم استخدامها لإزالة البترول كمادة ملوثة من البيئة وتحويل الهيدروكربونات منخفضة الجودة إلى بروتين لاستهلاك الحيوانات.

هل هناك أي شيء سيء عن الخميرة؟

يمكن أن تكون الخميرة بالفعل جراثيم. في الواقع ، هناك خميرة ممرضة شائعة للغاية ، المبيضات البيض، يحمله معظم الناس في شكل حميد (Fincham & Day 1971). في حين أنه غير ضار في الأشخاص الأصحاء ، إلا أنه في الأشخاص الذين تضعف استجابتهم المناعية يمكن أن يصبح معديًا ويتحول إلى عامل ممرض خطير. يصعب السيطرة على هذه العدوى بشكل خاص لدى البشر لأن استقلاب الخميرة يشبه إلى حد كبير ما لدينا. الأدوية السامة للخميرة هي أيضًا سامة للإنسان. الخميرة الممرضة الأخرى السيئة بشكل خاص ، المستخفية الحديثة، التهاب السحايا الذي يهدد الحياة. تُعرف هذه الخمائر باسم "مسببات الأمراض الانتهازية" لأنها تشكل تهديدًا خطيرًا فقط للأشخاص الذين يعانون من ضعف الاستجابات المناعية مثل المصابين بالإيدز.

كيف تنمو الخميرة؟

تنقسم كل من خلايا الخميرة أحادية الصيغة الصبغية والثنائية الصبغية عن طريق التبرعم (انظر الشكل 2). تبدأ دورة الانقسام الخلوي بخلية واحدة غير متراصة (Pringle & Hartwell 1981 Byers 1981). تتبرعم هذه الخلية ، وينمو البرعم إلى حجم الخلية الأصلية تقريبًا ، وتنقسم النواة ، وتنقسم الخليتان إلى خليتين غير مرتبتين. ثم تبدأ الدورة مرة أخرى لكل من الخلايا. والنتيجة هي زيادة أسية في عدد الخلايا بوقت مضاعف يساوي متوسط ​​وقت دورة انقسام الخلية. يختلف هذا باختلاف السلالة ووسط النمو ودرجة الحرارة ، ولكن يمكن أن تصل إلى ساعة واحدة. بهذا المعدل ، يمكن لخلية واحدة أن تنمو لتصبح مستعمرة بالكاد مرئية في يوم واحد.

يشبه سلوك نمو مزارع الخميرة سلوك نمو البكتيريا. عندما يتم تلقيح وسط النمو ، تتطلب الخلايا فترة من التحضير قبل أن تبدأ في الانقسام. بعد فترة التأخر هذه التي قد تصل إلى عدة ساعات ، يدخلون بسرعة المرحلة الأسية التي يتضاعف خلالها عددهم وكتلتهم على فترات زمنية متساوية. بعد فترة من النمو بمعدل أسي ثابت نسبيًا ، تصبح بعض الظروف البيئية تحد من النمو بحيث يتضاءل معدل الزيادة ويتوقف النمو في النهاية. عدد السكان والكتلة ثابتان. تظل المزرعة ثابتة وتظل الخلايا قابلة للحياة لعدة ساعات إذا تم تبريد المستنبت ، تظل الخلايا قابلة للحياة لعدة أشهر. في النهاية تموت الخلايا ، وفي درجة حرارة الغرفة أو أكثر ستخضع لها التحلل الذاتي: تصبح إنزيماتها الهضمية نشطة وتقوم بهضم نفسها حرفيًا ، مما يؤدي إلى تقليل البروتينات والأحماض النووية إلى مكوناتها الأبسط ، مما ينتج عنه رائحة كريهة بشكل خاص في هذه العملية.

يمكن أن تنمو الخميرة الطبيعية أيضًا هوائي، في وجود الأكسجين أو لاهوائي، في حالة عدم وجود الأكسجين. في ظل ظروف النمو الهوائية ، يمكنهم دعم النمو عن طريق أكسدة مصادر الكربون البسيطة ، مثل الإيثانول أو الأسيتات أو الجلسرين. إذا كان لديهم كمية كافية من الأكسجين ، فسوف يؤكسدون مصادر الكربون الخاصة بهم تمامًا ، وعادةً السكريات ، إلى ثاني أكسيد الكربون والماء. ومع ذلك ، في ظل الظروف اللاهوائية ، وحرمانها من الأكسجين ، يمكن للخميرة تحويل السكريات فقط إلى ثاني أكسيد الكربون والإيثانول ، واستعادة قدر أقل من الطاقة. في كلتا الحالتين ، سيقتصر النمو على بعض العناصر الغذائية الأساسية أو تراكم السم.

تنمو الخميرة جيدًا بشكل متساوٍ في وسط سائل أو على سطح مغذي مثل صفيحة أجار أو سطح مكشوف لنوع من الطعام. في السائل يجب تقليبها أو رجها إذا كانت ستبقى هوائية وإلا فإنها تستقر في قاع الحاوية وتستهلك الأكسجين المذاب وتنمو بشكل لاهوائي. على سطح المغذيات في حاوية جيدة التهوية ، فإنها تنمو بشكل هوائي مع تشكيل كل خلية مستعمرة مرئية تصل إلى 100 مليون خلية في غضون 2 أو 3 أيام.

دورة حياة الخميرة: دورة جنسية كاملة

في الكائنات الجنسية ، تتكون دورة الحياة (انظر الشكل 3) من سلسلة من الأحداث التي تتناوب بين أ أحادي العدد المرحلة وأ ثنائي الصيغة الصبغية المرحلة (Fincham & Day 1971). الانتقال من المرحلة ثنائية الصيغة الصبغية إلى الطور أحادي الصيغة الصبغية هو نتيجة لتقسيم الخلية المتخصص - الانقسام الاختزالي - حيث تنقسم النواة مرتين بعد تكرار واحد للكروموسومات. ينتج الانقسام الاختزالي أربعة نوى أحادية العدد. أثناء الانقسام الاختزالي ، الكروموسومات المتجانسة المقترنة في أجزاء تبادل النواة ثنائية الصبغيات ويتم توزيعها في نوى أحادية الصيغة الصبغية مما ينتج عنه توليفات جديدة من السمات الوراثية. في الكائنات الحية الأعلى ، يتم تمييز خط الخلايا الجرثومية عن خلايا الجسم (الجسدية). ينتج خط الخلايا الجرثومية الخلايا التناسلية التي تشكل الأمشاج. الأمشاج هي الخلايا التي تنقل المعلومات الجينية إلى الجيل التالي بينما تشكل الخلايا الجسدية بقية الكائن الحي ولا تلعب دورًا مباشرًا في الوراثة.

ينتج الانتقال من الطور أحادي العدد إلى الطور ثنائي الصبغة عن التزاوج (الاقتران الجنسي) بين الأمشاج. هذا يؤدي إلى تشكيل اللاقحة حيث تندمج نواتان أبويتان أحاديتان لتشكيل نواة ثنائية الصبغيات. في الكائنات الحية الأعلى ، الأمشاج عبارة عن خلايا خط جرثومية متمايزة. في الحيوانات الأعلى ، يتم إنتاج الأمشاج المختلفة بواسطة أفراد من الجنس الآخر. ومع ذلك ، في النباتات العليا ، يتم إنتاجها بواسطة هياكل مختلفة ، إما في نفس النبات أو في نباتات مختلفة.

في الخميرة ، كما هو الحال في الكائنات الحية الدقيقة الجنسية الأخرى ، توجد الدورة الجنسية الكاملة ولكنها أبسط بكثير مما هي عليه في النباتات والحيوانات الأعلى. لا يحدث تمايز دائم بين الخط الجرثومي والخلايا الجسدية. بدلاً من ذلك ، تحدث التمايزات العابرة في ظل ظروف مناسبة لتسهيل الأحداث الأساسية. توفر بساطة الدورة الجنسية في الخميرة والسهولة التي يمكن بها التلاعب بجميع الأحداث ومراقبتها فرصة فريدة لتعليم هذه العملية الغامضة والمجردة عادةً من خلال ملاحظات بسيطة ومباشرة وملموسة.

التزاوج في الخميرة التي تتوسطها جزيئات قابلة للانتشار - الفيرومونات - يمكن إثباتها بسهولة (Manney، Duntze & Betz 1981). عندما يتم خلط خلايا من نوع التزاوج المعاكس على سطح وسط نمو أجار في صفيحة بتري ، تصبح التغييرات واضحة في غضون ساعتين إلى ثلاث ساعات. نظرًا لأن كل نوع من الخلايا يفرز فرمونها في الوسط ، فإنه يستجيب للنوع الذي ينتجه النوع المعاكس (MacKay & Manney 1974). يستجيب كل منهم من خلال التمييز في شكل وظيفي متخصص ، أ مشيج. تتوقف الخلايا عن الانقسام وتغير شكلها (انظر الشكل 1). يستطيلون ويصبحون على شكل كمثرى. وقد أُطلق على هذه الخلايا المميزة اسم "الشموس" بسبب تشابهها مع الحيوانات الأسطورية المحبوبة في الشريط الهزلي "ليل أبنر". تتحد الخلايا من أنواع التزاوج المعاكسة التي تكون على اتصال أو قريبة من السطح وتندمج معًا لتشكل شكلًا مميزًا "الفول السوداني" مع انقباض مركزي - شمووسان مندمجان عند نهايتيهما الصغيرتين. تندمج النواتان الأحاديتان داخل كل زوج متصل في نواة ثنائية الصبغيات ، وتشكل نواة حقيقية اللاقحة. يتبرعم ثنائي الصيغة الصبغية على الفور عند الانقباض ، ويشكل شخصية "ورقة البرسيم" المميزة. يمكن للمرء أن يلاحظ بسهولة كل هذه المراحل تحت المجهر.

فرمونات التزاوج التي تفرزها الخلايا أحادية الصيغة الصبغية هي جزيئات ببتيدية صغيرة تنتشر من خلال أجار (Betz، Manney & Duntze 1981). وبالتالي ، من السهل إثبات وجودها وتأثيرها على خلايا أنواع التزاوج المعاكس. إذا نمت خلايا من نوع التزاوج بين عشية وضحاها على وسط أجار ، يتراكم تركيز عالي من الفرمون في الأجار المحيط بالنمو. ثم إذا كانت الخلايا من نوع التزاوج أ يتم وضعها على هذا الأجار ، ويبدأون في الخضوع لعملية التحول "shmoo" في غضون ساعتين. التأثير مذهل للغاية. يمكن للمرء أن يبرهن على نفس التأثير في وسط سائل نمت فيه خلايا نوع التزاوج. في الواقع ، عندما تم دراسة الخميرة لأول مرة ، استخدم علماء أحياء الخميرة هذه الطرق البسيطة لعزل وتوصيف الفيرومونات.

شموس إذن ، هي الأمشاج الموجودة في الخميرة. وهي تختلف عن الخلايا أحادية الصيغة الصبغية الخضرية العادية فقط عند وجود خلية من نوع التزاوج المعاكس. بطريقة مماثلة ، يمكن لأي خلية ثنائية الصيغة الصبغية أن تمر عبر الانقسام الاختزالي لتشكل أحاديات الصبغيات التي لديها القدرة على أن تصبح أمشاج (Esposito & Klapholz 1981 Fowell 1969b). الانقسام الاختزالي هو جزء من عملية التبويض التي تبدأ عندما يتم نقل الخلايا ثنائية الصبغيات إلى وسط غير متوازن من الناحية التغذوية. لكن التغييرات تظهر تحت المجهر فقط بعد ثلاثة إلى خمسة أيام عندما يصبح أسشي مميزًا تمامًا. من الناحية النظرية ، يجب أن تحتوي جميع الأبواغ على أربعة أبواغ ، ولكن في الممارسة العملية ، يحتوي العديد منها على اثنين أو ثلاثة فقط. أسكوس له شكل متكتل ، يشبه إلى حد كبير البرتقال داخل كيس من القماش. ستؤدي معالجة خليط التبويغ بمستحضر خام متاح بسهولة من الإنزيمات الهاضمة من قواقع الحديقة إلى إزالة جدار الأسكوس ، وتحرير الجراثيم. عندما يتم إرجاع الجراثيم ، سواء داخل أسكوس أو بعد تحريرها ، إلى بيئة مناسبة من الناحية التغذوية ، فإنها تنبت وتخضع لنمو خضري في طور أحادي الصبغة المستقرة. تحدث سلالات Haploid في نوعين من التزاوج ، يسمى أ و (ألفا). داخل كل أسكوس ، عادة ما تكون جراثيم من نوع التزاوج أ والاثنان الآخران. عندما تصادف خلية من نوع تزاوج واحد نوعًا من أنواع التزاوج الأخرى ، فإنها تبدأ سلسلة من الأحداث التي تؤدي إلى الاقتران. والنتيجة هي خلية ثنائية الصبغيات ، والتي تنمو عن طريق انقسام الخلايا الانقسامية في مرحلة ثنائية الصبغيات مستقرة. إذا قام المرء فقط بنقل ثقافة الخلية المبوغة إلى وسط النمو ، فإن النتيجة هي مجموعة مختلطة من السلالات أحادية الصيغة الصبغية والسلالات ثنائية الصبغيات الجديدة التي تشبه النسل من التهجين بين الكائنات الحية الأعلى ثنائية الصبغة.

عادة ، يقوم علماء وراثة الخميرة بعزل الجراثيم ، إما بشكل عشوائي أو عن طريق المعالجة الدقيقة ، لمنع السلالات الفردية من التزاوج وتشكيل الجيل التالي. هذه الدرجة من التحكم والقدرة على مراقبة الصفات الجينية في المرحلة الفردية تجعل التحليل الجيني في الخميرة قويًا وفعالًا. يعتبر تحليل التجمعات العشوائية للجراثيم ، رغم أنه يستغرق وقتًا طويلاً ، أمرًا بسيطًا بما يكفي لطلاب المدارس الثانوية ، وهو مناسب بشكل خاص للمشاريع الفردية للطلاب المتقدمين.


DIYeast: صنع الأطباق

لذا فقد حصلت على بعض الخميرة البرية والحشرات من الفناء الخلفي أو غرفة الفاكهة أو البرميل. ربما أنت & # 8217ve تخمر معها ولديك الآن ثقافة منزلية فريدة من نوعها. هذا & # 8217s رائع. أنت نجم روك.

لكن ماذا لديك حقا؟ هل هي خميرة برية؟ هل هو شيء غير تقليدي ، مثل بريت؟ هل كل ما سبق؟ ما الذي يسبب هذا التخمر الحامض ، إن وجد؟ تعد الثقافات البرية المختلطة رائعة ، وهي أقرب ما يكون إلى تكرار ممارسات التخمير القديمة.

لا يتم ذلك حتى تقوم بعزل سلالات فردية نقية حتى تتمكن من الحصول على نوع من التحكم في ميكروباتك وتكون قادرًا على إعادة إنتاج مجموعات مماثلة بدقة. أنت & # 8217ll ستتعلم أيضًا ما الذي يجعل كل سلالة علامة ، وما هي أنماط البيرة والمكونات التي تمتزج معها بشكل أفضل. بالإضافة إلى ذلك ، بمجرد عزل سلالة الخميرة الخاصة بك ، سوف يعتقد الجميع أنك & # 8217re طفل أزيز.

قبل المتابعة ، الخروج Bootleg Biology & # 8217s مجموعة أدوات الخميرة في الفناء الخلفي. كل ما يحتاجه صانع البيرة التجريبي لالتقاط الحشرات البرية ، وإنشاء لوحات أجار ، وعزل الخميرة البرية.

ستار سان (ضع البعض في زجاجة رذاذ بلاستيكية رخيصة لتنظيف سطح عملك)

أطباق بتري بلاستيكية معقمة بأغطية (الأطباق الزجاجية قابلة لإعادة الاستخدام ولكنها أغلى ثمناً)

بارافيلم (غلاف بلاستيكي مرن بديل جيد)

بنسن أو الموقد المحمول (استخدام موقد الغاز في مطبخك أرخص وفعال تقريبًا)

  • منطقة مظلمة / دافئة لاحتضان الأطباق (كلما كانت أكثر دفئًا ، زادت سرعة معرفة ما إذا كان طبقك ملوثًا)

ضوء الأشعة فوق البنفسجية المضاد للميكروبات (غير مطلوب) 2

جميع هذه العناصر تقريبًا موجودة بالفعل في مطبخك أو في مجموعة أدوات البيرة المنزلية & # 8230 باستثناء أطباق بتري. أطباق بتري البلاستيكية غير مكلفة ويمكن العثور عليها بسهولة في أمازون. تأتي عادة بأقطار 60 مم أو 100 مم. إذا كنت تحاول عزل الميكروبات من ثقافة مختلطة مثل Wild Yeast Starter ، فمن الأفضل أن تختار الطبق الأكبر حجمًا لزيادة احتمالية عزل السلالة.

الأجار عبارة عن مادة شبيهة بالجيلاتين مصنوعة من الأعشاب البحرية ، وعند غليها مع نقيع الشعير ، يتحول الخليط بسرعة إلى وسط صلب يشبه الهلام ، ويمكن أن تنمو مستعمرات الميكروبات الفردية وتتغذى عليها.

إنشاء طبق أجار بسيط: 3

  • 300 مل من 1.040 (أو أقل) نبتة (في حالة استخدام المستخلص ، قم بغلي الماء ومزيج DME قبل إضافة مكونات الوصفة الأخرى)
  • 5 جرام من مسحوق أجار أجار (أضف المزيد إذا فشل السائل في التعيين)
  • ربت من مغذيات الخميرة (يمكن إضافة مصادر أخرى للأحماض الأمينية نظرًا لفائدتها في استقلاب الخميرة ، ولكن لا يلزم ذلك)
  • بالطبع ، يمكنك أيضًا تخطي الوصفة والاستيلاء على Wild Yeast Agar Blend من Bootleg Biology
  1. يُسخن نقيع الشعير في وعاء صغير حتى يصل إلى درجة الغليان ويقلب في أجار.
  2. يُغلى المزيج. فاز Agar and wort & # 8217t بنجاح إذا لم يتم إحضاره إلى درجة الغليان.
  3. اتركه يبرد لعدة دقائق حتى تصبح درجة الحرارة منخفضة 100 & # 8217 ثانية فهرنهايت أو حوالي 5-10 دقائق. راقب القدر الخاص بك عن كثب ، نظرًا لأن الأجار يمكن أن يضبط بسرعة كبيرة ، لا يزال الوسط بحاجة إلى أن يكون سائلًا كثيفًا عند سكبه في طبق بتري.
  4. صب طبقة صغيرة من السائل على طبق بتري وانتقل إلى منطقة التخزين الخالية من تيار الهواء. من المهم ترك السائل يبرد قبل تغطيته بغطاء طبق بتري لمنع التكثف على الغطاء ، مما يساعد على تقليل احتمالية نمو العفن.
  5. إذا تم استخدام نسبة أجار / نبتة جيدة ، فيجب ضبط ألواح الأجار في غضون بضع دقائق. إذا وجدت أن الأطباق الخاصة بك ليست في وضع & # 8217t ، فقد تحتاج إلى إعادة غلي المزيج الخاص بك مع إضافة المزيد من الأجار.
  6. لف حواف غطاء اللوحة بغطاء بلاستيكي مرن أو شرائط ممتدة 1/2 بوصة من بارافيلم. سيساعد هذا في تقليل ملوثات لوحة أجار ومنع اللوح من الجفاف إذا لم تستخدم اللوح بعد ذلك بوقت قصير.
  7. اترك الأطباق مقلوبة (تمنع التكثيف من السقوط على وسط الآجار) لبضعة أيام في مكان دافئ ومظلم للاحتضان. سيساعد هذا في تحديد اللوحات الملوثة بجراثيم العفن أو الضيوف الآخرين غير المدعوين ، مما يجعلها غير صالحة للاستعمال 2. عندما تنتهي من & # 8217 ، قم بتخزينه بالمقلوب في كيس بلاستيكي قابل لإعادة الإغلاق وقم بتبريده.

تذكر أنك & # 8217re لا تعمل في غرفة نظيفة بها غطاء ، ستصاب بألواح ملوثة. لذلك لا تحزن عندما تبدو بعض الأطباق التي أنشأتها & # 8217 على هذا النحو بعد فترة الحضانة:

الآن بعد أن قمت & # 8217 بصنع لوحة أجار الخاصة بك ، فإن آخر ما عليك فعله هو القيام بذلك اعزل الخميرة.


صنع وسائل الإعلام

1. جعل الإعلام الثقافي يتطلب الصبر والاهتمام بالتفاصيل. شاهد الفيديو 1: صنع الوسائط الميكروبيولوجية

شاهد الفيديو 1: صنع الوسائط الميكروبيولوجية بواسطة Bio-Rad. URL: https: //youtu.be/BH4ESgWU_Eo

ثانيًا. صب لوحات أجار. شاهد الفيديو 2: إعداد الوسائط الصلبة ، تم تصوير الفيديو في مختبرات الأحياء الدقيقة في ولاية نورث كارولاينا.

شاهد الفيديو 1: إعداد الوسائط الصلبة ، تم تصوير الفيديو في مختبرات الأحياء الدقيقة في ولاية نورث كارولاينا. URL: https: //youtu.be/P7M_MCXbZjc


LB Agar Lennox (MB38901)

وصف: الوسيلة الموصى بها لاختبار الإشريكية القولونية في دراسات الوراثة الجزيئية. LB Agar Lennox هو وسيط غني بالتغذية طورته Lennox من أجل نمو والحفاظ على الثقافة النقية لسلالات المؤتلف بكتريا قولونية. يوفر التربتون النيتروجين والفيتامينات والمعادن والأحماض الأمينية الأساسية للنمو. مستخلص الخميرة هو مصدر للفيتامينات ، وخاصة المجموعة ب. يوفر كلوريد الصوديوم الإلكتروليتات الأساسية للنقل والتوازن التناضحي. أجار البكتريولوجي هو عامل التصلب. إذا رغبت في ذلك ، يمكن أيضًا إضافة المضادات الحيوية.

تعليمات الإستخدام: علق 35 جرام وسط في 1 لتر ماء مقطر. تخلط جيدا وتذوب بالتسخين والتحريك. يغلي لمدة دقيقة واحدة حتى يذوب تماما. تعقيم الأوتوكلاف في درجة حرارة 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. تبرد حتى 45-50 درجة مئوية ، وتخلط جيدا وتوزع في أطباق.

تكوين:
& # 8211 Tryptone: 10 جم / لتر
& # 8211 كلوريد الصوديوم: 5 جم / لتر
& # 8211 مستخلص الخميرة: 5 جم / لتر
& # 8211 الآجار البكتريولوجي: 15 جم / لتر
(درجة الحموضة النهائية 7.0 ± 0.2 عند 25 درجة مئوية)

قابل للذوبان في: ماء

تخزين: يحفظ في درجة حرارة 2-25 درجة مئوية. بمجرد الفتح ، احتفظي بالمسحوق مغلقًا لتجنب الترطيب. حماية شكل خفيف ورطب


لوحة أجار

ان لوحة أجار هو طبق بتري يحتوي على وسط نمو مقوى بالأجار ، يستخدم في استنبات الكائنات الحية الدقيقة. في بعض الأحيان يتم إضافة مركبات انتقائية للتأثير على النمو ، مثل المضادات الحيوية. [1]

لوحة أجار
الاستخداماتالثقافة الميكروبيولوجية
فن
الأصناف ذات الصلةطبق بتري
متوسطة النمو

ستنمو الكائنات الحية الدقيقة الفردية الموضوعة على الصفيحة إلى مستعمرات فردية ، كل منها نسخة مطابقة وراثيًا لكائن السلف الفردي (باستثناء معدل الطفرة المنخفض الذي لا مفر منه). وبالتالي ، يمكن استخدام اللوحة إما لتقدير تركيز الكائنات الحية في مزرعة سائلة أو التخفيف المناسب لتلك الثقافة باستخدام عداد مستعمرة ، أو لتوليد مزارع نقية وراثيًا من ثقافة مختلطة لكائنات مختلفة وراثيًا.

تتوفر عدة طرق لخروج الخلايا. تُعرف إحدى التقنيات باسم "الخطوط". في هذه التقنية ، يتم وضع قطرة من المزرعة في نهاية حلقة رفيعة ومعقمة من السلك ، والتي تُعرف أحيانًا باسم المُلقِّح ، عبر سطح الأجار تاركة وراءها الكائنات الحية ، ورقمًا أعلى في بداية الخط و a عدد أقل في النهاية. في مرحلة ما خلال "خط" ناجح ، سيكون عدد الكائنات المودعة على هذا النحو بحيث تنمو مستعمرات فردية متميزة في تلك المنطقة والتي يمكن إزالتها لمزيد من الاستزراع ، باستخدام حلقة معقمة أخرى. من الضروري العمل معقم لمنع التلوث على الألواح. [1]

طريقة أخرى لطلاء الكائنات ، بجانب الخطوط ، على ألواح أجار هي تحليل البقعة. غالبًا ما يستخدم هذا النوع من التحليل للتحقق من صلاحية الخلايا ويتم إجراؤه باستخدام دبابيس (غالبًا ما تسمى أيضًا الضفادع). الطريقة الثالثة المستخدمة هي استخدام حبات زجاجية معقمة لتلوين الخلايا. في هذه التقنية ، تُزرع الخلايا في مزرعة سائلة يتم وضع حجم صغير منها على صفيحة أجار ثم تنتشر بالخرز. الطلاء المتماثل هو تقنية أخرى من أجل إخراج الخلايا على ألواح أجار. هذه الأساليب الأربعة هي الأكثر شيوعًا ، لكن البعض الآخر ممكن أيضًا. من الأهمية بمكان العمل بطريقة معقمة من أجل منع التلوث على لوحات أجار. وبالتالي يتم الطلاء غالبًا في خزانة ذات تدفق رقائقي أو على طاولة العمل بجوار موقد بنسن. [2]


طعنة أجار

صنع طعنات أجار لتخزين ونقل السلالات البكتيرية.

1 لتر مكون
10 جرام تريبتون
5 جرام خلاصة الخميرة
10 جرام كلوريد الصوديوم
6 جرام أجار

فرن الضغط. قم بالتحويل إلى القوالب المبردة قبل أن تبرد الوسائط. يمكن تخزين القوارير في درجة حرارة 4 مئوية لبضعة أشهر.


شاهد الفيديو: KHASA AALA CHAHAR: LOOT LIYA Official Video. Sweta Chauhan. New Haryanvi Songs Haryanavi 2021 (ديسمبر 2022).