معلومة

متوسط ​​ل Pseudomonas؟

متوسط ​​ل Pseudomonas؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

ما هو متوسط ​​الحد الأدنى الجيد ل الزائفة بكتيريا؟ هل أحتاج إلى وسائط مختلفة لمختلف الزائفة محيط؟


الزائفة ليس من الصعب نمو البكتيريا بشكل عام:

وعرة وانتهازية ، الزائفة استخدام مجموعة واسعة من المصادر الغذائية ، حتى البيئات الغذائية البسيطة جدًا التي لا تحتوي على أي مركبات عضوية. - سيجما

لأنواع معينة ، سترغب في استخدام وسط اختيار. لدى Sigma-Aldrich عددًا من المنتجات التجارية للاختيار وأنا متأكد من أنه يمكنك العثور على وصفة تناسب الأنواع الخاصة بك من خلال بحث Google.


القراءة ذات الصلة:

وسيلة للعزل الانتقائي لأعضاء جنس الزائفة من الموائل الطبيعية (جرانت وهولت ، 1977)

تقييم وسائط انتقائية مختلفة للكشف عن أنواع Pseudomonas في الحليب المبستر (Van Tassell وآخرون., 2012)


الزائفة الزنجارية و خميرة الخميرة بيوفيلم في خلايا التدفق

تمتلك العديد من الخلايا الميكروبية القدرة على تكوين مجتمعات ميكروبية لاطئة تُعرف على أنها أغشية حيوية غيرت الخصائص الفسيولوجية والمرضية مقارنة بالكائنات الحية الدقيقة الحية. غالبًا ما يكون من الصعب التحقيق في الأغشية الحيوية في الطبيعة والإقامة في ظل ظروف سيئة التحديد 1. باستخدام طبقة سفلية شفافة ، من الممكن تجهيز نظام حيث يمكن فحص الأغشية الحيوية البسيطة بطريقة غير مدمرة في الوقت الفعلي: هنا نوضح تجميع وتشغيل نظام نموذج خلية التدفق ، من أجل في المختبر دراسات ثلاثية الأبعاد للأغشية الحيوية الميكروبية تولد قابلية استنساخ عالية في ظل ظروف محددة جيدًا 2،3.

يتكون النظام من خلية تدفق تعمل كغرفة نمو للغشاء الحيوي. يتم تزويد خلية التدفق بالمغذيات والأكسجين من دورق متوسط ​​عبر مضخة تمعجية ويتم جمع الوسط المستهلك في حاوية نفايات. يسمح هذا البناء لنظام التدفق بتزويد مستمر بالمغذيات وإدارة على سبيل المثال المضادات الحيوية مع الحد الأدنى من اضطراب الخلايا المزروعة في غرفة التدفق. علاوة على ذلك ، تسمح ظروف التدفق داخل خلية التدفق بدراسات الأغشية الحيوية المعرضة لضغط القص. يقوم جهاز محاصرة الفقاعات بحصر فقاعات الهواء من الأنبوب والتي قد تؤدي بخلاف ذلك إلى تعطيل بنية الأغشية الحيوية في خلية التدفق.

يتوافق نظام خلايا التدفق مع مجهر المسح بالليزر المتحد البؤر (CLSM) ويمكنه بالتالي توفير معلومات ثلاثية الأبعاد مفصلة للغاية حول تطوير الأغشية الحيوية الميكروبية. يمكن تمييز الخلايا الموجودة في الأغشية الحيوية باستخدام مجسات الفلورسنت أو البروتينات المتوافقة مع تحليل CLSM. يتيح ذلك إمكانية التصور عبر الإنترنت ويسمح بالتحقيق في المجالات المتخصصة في تطوير الأغشية الحيوية الرقيقة. العلاقة بين الميكروبات ، والتحقيق في العوامل المضادة للميكروبات أو التعبير عن جينات معينة ، هي من بين العديد من الإعدادات التجريبية التي يمكن التحقيق فيها في نظام خلية التدفق.


وسط انتقائي لـ Pseudomonas aeruginosa يستخدم 1،10-فينانثرولين كعامل انتقائي

كان MIC لـ 1،10-فينانثرولين لـ 35 سلالة Pseudomonas aeruginosa 128 ميكروغرام / مل ، بينما 32 ميكروغرام أو أقل لكل مل تمنع جميع الكائنات الحية الدقيقة الأخرى المختبرة. على أساس هذه النتائج ، تمت صياغة أجار انتقائي لـ P. aeruginosa يحتوي على 15 جم من مرق الصويا Trypticase (BBL Microbiology Systems) ، و 15 جم من أجار ، و 0.1 جم من الفينانثرولين لكل لتر. أعطت أربعة وأربعون سلالة من P. aeruginosa متوسط ​​كفاءة للطلاء على هذا الوسط بنسبة 79 ٪ من التعدادات التي تم الحصول عليها على أجار الصويا Trypticase ، والتي كانت أعلى بكثير من تلك التي تم الحصول عليها باستخدام أجار Pseudomonas المعزول أو أجار Pseudosel. Pseudomonas cepacia و Pseudomonas fluorescens و Pseudomonas putida و Pseudomonas stutzeri وممثلو 13 جنسًا آخر (بما في ذلك قضبان سالبة الجرام وقضبان موجبة الجرام وكوتشي) ، ولم يتم استرداد الخميرة في غضون 48 ساعة عند 35 درجة مئوية عند حوالي 10 ( 7) تم طلاء CFU على هذه الوسيلة. يمكن رؤية المستعمرات الصغيرة فقط من سلالة واحدة لكل من P. fluorescens و P. putida في 3 و 7 أيام على التوالي ، وكانت كفاءة الطلاء أقل من 0.001٪. عندما تم طلاء 10 (7) CFU لأي من هذه السلالات بـ 10 (2) CFU من P. aeruginosa ، فإنها لم تتداخل مع الاسترداد الكمي لـ P. aeruginosa.


نتائج

نموذج أمثل لنمو المستعمرات المتفرعة

على عكس النماذج الفيزيائية الحيوية النموذجية ، نتعامل مع تشكيل أنماط المستعمرات كمشكلة تحسين باستخدام نموذج خشن الحبيبات. على وجه الخصوص ، نسأل كيف يعتمد النمو الكلي للمستعمرة على المعلمات الهامة التي تحدد أنماط التفرع ، بغض النظر عن كيفية ظهور هذه الأنماط من التفاعلات على المستوى الجزيئي. في نموذجنا ، يكون نمط المستعمرة مقيدًا بمعلمات معينة ويحد من نمو الخلية وحركة الخلية. نقوم بتغيير نمط المستعمرة للتحقيق في كيفية تأثير الأنماط على الوظيفة الموضوعية: كفاءة تراكم الكتلة الحيوية للمستعمرة.

في فحوصات الاحتشاد ، الزائفة تبدأ المستعمرات عادةً من التطعيمات النقطية وتشكل فروعًا تمتد في بعدين (2D) (الشكل 1 أ). مع توسع المستعمرة ، ينتج عن التشعبات في الفروع تقسيم ثابت تقريبًا لوسط الاحتشاد لكل فرع. لتسهيل النمذجة ، نعتبر أولاً سيناريو أبسط لتمديد الفرع: عند البدء من شريط ، تشكل المستعمرات فروعًا متوازية غير متفرعة تمتد من أحد طرفي لوحة مستطيلة إلى أخرى (الشكل 1 ب). يحافظ هذا الامتداد أحادي البعد (1D) على ميزة التقسيم المستمر لوسط النمو.

في هذا الإطار المبسط ، تمتد الفروع من أحد طرفي اللوحة إلى الطرف الآخر. يتم تحديد نمط التفرع بشكل فريد من خلال معلمتين (الشكل 1C): عرض الفرع (دبليو) وكثافة الفرع (د، عدد الفروع في وحدة طول واحدة). العرض الإجمالي لجميع الفروع هو WDR، ولا يمكن أن يكون أكبر من حجم المجال وبالتالي ، WDR ≤ R أو WD ≤ 1. في الحالة القصوى ، متى WD = 1 ، تصبح المستعمرة غير متفرعة أو دائرية.

ندرس كذلك ثلاث عمليات تشارك في نمو المستعمرة: استهلاك وانتشار المغذيات ، ونمو الخلايا ، وامتداد الفرع (الشكل 1C). هنا ، تنمو المستعمرة في مجال مستطيل وتستهلك مادة مغذية منتشرة (ن، المعادلة 1). كما هو موضح في الشكل 1 ج ، يتم تحديد حدود المستعمرة بواسطة دبليو, دالتي تعطى الثوابت وطول الفرع ، إل، وهو متغير يعتمد على الوقت. نمو الخلايا (ج) محصورة داخل حدود المستعمرة: مع تكاثر الخلايا ، تتراكم الكتلة الحيوية ويتم تخصيصها بشكل موحد داخل المستعمرة بأكملها (المعادلة 2). وظيفة نمو الخلايا (Fجي) هي وظيفة ن و ج تتناسب مع منحنيات النمو الزائفة في وسط حشد السوائل (الملحق الشكل S1A). تم تبسيط حركة الخلية باعتبارها امتدادًا للفرع (المعادلة 3): نفترض أن إجمالي الطاقة المستخرجة من استهلاك المغذيات يتم حفظها وتخصيصها بين النمو وتوسع المستعمرة ، وبالتالي فإن معدل امتداد الفرع يتناسب مع مقدار نمو الخلية (انظر الملحق التكميلي) طرق للحصول على التفاصيل). هنا، γ هو معامل يربط كمية الطاقة لحركة الخلية بمعدل تمدد المستعمرة. باستخدام نفس القدر من الطاقة ، مع أكبر γ، المستعمرة تتوسع بشكل أسرع ، لذلك نشير حتى الآن إلى γ ككفاءة توسع المستعمرة. يمكننا تغيير كفاءة التمدد بشكل تجريبي عن طريق تغيير كثافة أجار وسط الاحتشاد ، مثل الزائفة تتوسع المستعمرات بشكل أسرع على الوسائط ذات الكثافة المنخفضة للأجار (الملحق الشكل S2).

تتيح أنماط الفروع النمو الأمثل عندما تكون الموارد محدودة

باستخدام نموذجنا البسيط ، نفحص كيف تعتمد الكتلة الحيوية الكلية للمستعمرة على مجموعات مختلفة من عرض الفرع (دبليو) وكثافة الفرع (د) لظروف بيئية مختلفة تمليها معلمات أخرى في النموذج (الشكل 2 أ). لكل حالة ، مزيج مثالي من دبليو و د موجود لتعظيم تراكم الكتلة الحيوية. على وجه الخصوص ، عند التركيز الأولي للمغذيات (ن0) أو كفاءة تمدد الخلايا (γ) منخفضة (الشكل 2 أ ، اللوحة أ) ، يتطلب النمو الأمثل عرض فرع صغير وكثافة فرع منخفضة نسبيًا. تتناقص ميزة الأفرع الرقيقة على الأفرع العريضة إذا نمت المستعمرات بمغذيات وفيرة أو على الأسطح التي تسمح بالتوسع بشكل أسرع. مع تركيزات المغذيات العالية بما فيه الكفاية أو كفاءات التوسع ، تتراكم المستعمرات غير المتفرعة الكتلة الحيوية بشكل أكثر كفاءة (الشكل 2 أ ، اللوحات ب ، ج).

الشكل 2. أنماط المتفرعة تمكن من النمو الأمثل للمستعمرة عندما يتم تقييد المغذيات أو توسع المستعمرة

  1. يكشف نموذج التحسين المنفذ بمجموعات مختلفة من عرض الفرع والكثافة عن أنماط المستعمرات المثلى التي تنتج أعلى كتلة حيوية في ظل ظروف مختلفة. تشير الألوان إلى الكتلة الحيوية الإجمالية (الوحدة: cu mm 2 cu .: وحدة كثافة الخلية) في نفس النقطة الزمنية (ر = 24 ساعة). عند أو بعد القطر المائل لخريطة الحرارة (حيث WD = 1) تصبح المستعمرة موحدة بدون فروع. (أ) و (ب) و (ج) تتوافق مع تركيزات مختلفة من المغذيات الأولية (ن0) أو كفاءة التوسع (γ) (أ: ن0 = 8 جم / لتر ، γ = 7.5 مم / ساعة / وحدة تبريد. ب: ن0 = 30 جم / لتر ، γ = 7.5 مم / ساعة / وحدة تبريد. ج: ن0 = 8 جم / لتر ، γ = 25 مم / ساعة / وحدة تبريد). معلمات أخرى: دن = 6 مم 2 / ساعةβن = 160 جم ​​/ لتر / ساعة / ج. αج = 0.8 / ساعة كن = 0.8 جم / لتر جم = 0.05 متر مكعب
  2. الزائفة تُظهر المستعمرات ذات الأنماط المثلى التي تنبأ بها النموذج كفاءة نمو أعلى من تلك ذات الأنماط غير المثلى. عندما يتم تقييد المغذيات أو توسع المستعمرة (أ: النمو على وسط يحتوي على 4 جم / لتر من أحماض الكازمينو و 0.5 ٪ أجار ، تم تكرار التجربة بشكل مستقل مرتين ن = 5 للنوع البري و ن = 10 للسخونة المفرطة) ، من النوع البري الزائفة PA14 الذي يطور أنماطًا متفرعة ينمو بشكل أكثر كفاءة من ارتفاع درجة الحرارة التي تظهر تمددًا موحدًا. على الوسائط التي تحتوي على تركيز عالٍ من المغذيات (ب: مع 8 جم / لتر من أحماض الكازمينو و 0.5 ٪ أجار ، تم تكرار التجربة بشكل مستقل أربع مرات ن = 12 للنوع البري و ن = 24 للسخونة المفرطة) أو السطح الرطب (ج: مع 4 جم / لتر من أحماض الكازمينو و 0.4٪ أجار ، تم تكرار التجربة بشكل مستقل مرتين ن = 4 للنوع البري و ن = 8 في حالة ارتفاع درجة الحرارة المرتفعة) ، ينتج عن ارتفاع درجة الحرارة كتلة حيوية أكبر من النوع البري. تم التقاط الصور في 20 ساعة بعد التلقيح وهي تمثل التكرارات. أعيد استخدام صورة واحدة من الشكل 1 أ في (ب). شريط المقياس: 1 سم.

البيانات المصدر متاحة على الإنترنت لهذا الرقم.

لفهم سبب اختلاف الأنماط المثلى مع ظروف النمو ، نقوم بفحص ديناميكيات النظام باستخدام النموذج (الشكل EV1). يكشف توزيع استهلاك المغذيات أن استخدام المغذيات يتم بشكل أساسي في مقدمة المستعمرة وحوافها عندما يكون تركيز المغذيات أو كفاءة التمدد منخفضًا ، حيث يتم استنفاد المغذيات بسرعة في المناطق المغطاة بالمستعمرة (الشكل EV1A). في هذه الحالة ، يرتبط المبلغ الإجمالي لاستخدام المغذيات بطول حدود المستعمرة ، والتي تكون أكبر في المستعمرات ذات الفروع الرقيقة منها في المستعمرات غير المتفرعة. ومع ذلك ، مع وفرة المغذيات أو كفاءة التوسع العالية ، تتوسع المستعمرات قبل استهلاك جميع العناصر الغذائية في المنطقة التي تغطيها الخلايا (الشكل EV1B و C). ومن ثم ، فإن استهلاك المغذيات يرتبط أيضًا بمنطقة المستعمرة ، والتي تكون أعلى في المستعمرات التي تتوسع بشكل موحد.

الشكل EV1. تكشف عمليات المحاكاة كيف تؤدي الظروف المختلفة إلى أنماط مستعمرة مثالية مختلفة

  • أ. عندما تكون المغذيات نادرة وكفاءة التوسع منخفضة (ن0 = 8 جم / لتر ، γ = 7.5 مم / ساعة / كوب مكعب) ، يتم استنفاد المغذيات بسرعة في المناطق المغطاة بالمستعمرة ويتم استخدام المغذيات بشكل أساسي في جبهة المستعمرة وحوافها. في هذه الحالة ، يرتبط المقدار الإجمالي لاستخدام المغذيات بطول حدود المستعمرة ، والتي تكون أعلى في المستعمرات ذات الأغصان الرقيقة ولكن يتم تقليلها في المستعمرات غير المتفرعة.
  • B ، C. عندما تكون المغذيات وفيرة (ن0 = 30 جم / لتر ، γ = 7.5 مم / ساعة / وحدة تبريد) أو كفاءة التمدد عالية (ن0 = 8 جم / لتر ، γ = 25 مم / ساعة / كوب) ، تتمدد المستعمرات قبل استهلاك جميع العناصر الغذائية في المنطقة التي تغطيها الخلايا. لذلك ، يرتبط استهلاك المغذيات أيضًا بمنطقة المستعمرة ، والتي تكون أعلى في المستعمرات التي تتوسع بشكل موحد.

لاختبار هذه التنبؤات تجريبيًا ، قارنا نمو النوع البري الزائفة الزنجارية سلالة PA14 وطفراتها شديدة الاحترار في فحوصات الحشود. حصلنا على المسوخ باستخدام التطور التجريبي كما هو موضح في Van Ditmarsch وآخرون، 2013 . الزائفة الزنجارية نمت PA14 على وسط حشد لمدة 20 ساعة ، وتم جمع المستعمرة بأكملها من اللوحة. تم تلقيح جزء صغير من الخلايا التي تم جمعها على لوحة جديدة بوسائط محتشدة. كررنا هذا الإجراء لمدة سبعة أيام متتالية وطفرات معزولة لا تطور أنماطًا متفرعة ولكنها شكلت مستعمرات غير منتظمة أو دائرية ، وهو نمط ظاهري يسمى فرط الاحترار (فان ديتمارش) وآخرون، 2013). نفس سلالتين ذكرهما فان ديتمارش وآخرون، في عام 2013 ، حددنا طفرة نقطة واحدة (V178G) في جين منظم التوليف السوطي ، FleN (PA14_45640) في طفراتنا شديدة الحرارة.

تمشيا مع تنبؤات النموذج ، عندما تنمو على وسط حشد مع مغذيات محدودة وكثافة آغار عالية ، حيث تكون كفاءة توسع المستعمرة منخفضة (الملحق الشكل S2) ، تنمو المستعمرات من النوع البري بشكل أفضل من المستعمرات غير المتفرعة (الشكل 2 ب ، لوحة أ). لا يمكن تفسير العيب في نمو المستعمرات (بمتوسط ​​45.8٪ أقل من تراكم الكتلة الحيوية من النوع البري) من خلال انخفاض معدل النمو ، والذي يقل بنسبة 7٪ عن النوع البري ويؤدي إلى متوسط انخفاض بنسبة 10.7٪ في تراكم الكتلة الحيوية في الوسط السائل بنفس تركيز المغذيات (الملحق الشكل S1B). في الوسائط أو الوسائط الغنية بالمغذيات ذات كثافة أجار منخفضة ، تتوسع المستعمرات غير المتفرعة وتنمو بشكل أكثر كفاءة من المستعمرات المتفرعة ، كما تنبأ النموذج (الشكل 2 ب ، اللوحات ب ، ج).

يوضح تحليل النمذجة لدينا كذلك أن التركيبة المثلى لـ دبليو و د يمكن ضبطها عن طريق تغيير بيئة النمو ، على سبيل المثال ، عن طريق تغيير توافر المغذيات (ن0) وكفاءة توسع المستعمرة (γ) (الشكل 3 أ). الأنماط المرصودة من النوع البري الزائفة تختلف المستعمرات باختلاف تركيبة وسط الحشد ، ويتبع الاتجاه تقريبًا تنبؤات النموذج: مع زيادة تركيز المغذيات أو انخفاض كثافة الأجار ، الزائفة تشكل مستعمرات ذات فروع أوسع ومساحات مستعمرة إجمالية أكبر (الشكلان 3 ب و EV2).

الشكل 3. أنماط المستعمرات المثلى التي تزيد من تراكم الكتلة الحيوية تختلف باختلاف ظروف النمو

  1. في ظل مجموعات مختلفة من تركيزات المغذيات الأولية وكفاءات التوسع ، تختلف كثافة وعرض الفرع الأمثل الذي ينتج عنه أعلى كتلة حيوية. تشير الألوان إلى الكتلة الحيوية الإجمالية (الوحدة: cu.mm 2) في نفس النقطة الزمنية (ر = 24 ساعة) تحجيمها إلى الحد الأدنى / الحد الأقصى للقيم في كل لوحة فرعية. عند أو بعد القطر المائل لخريطة الحرارة (حيث WD = 1) تصبح المستعمرة موحدة بدون فروع. معلمات أخرى: دن = 6 مم 2 / ساعة βن = 160 جم ​​/ لتر / ساعة / ج. αج = 0.8 / ساعة كن = 0.8 جم / لتر جم = 0.05 متر مكعب
  2. ميزات الأنماط التي طورتها الزائفة تتوافق المستعمرات في ظل ظروف نمو مختلفة بشكل عام مع الأنماط المثلى التي تنبأ بها النموذج. يتم تعديل كفاءة توسع المستعمرة عن طريق تغيير كثافة الآجار. تم التقاط صور المستعمرات بمجرد وصول المستعمرات إلى حدود الصفائح أو توقفها عن النمو. تم تكرار التجربة بشكل مستقل خمس مرات. الصور المعروضة هي ممثلين للنسخ المكررة. شريط المقياس: 1 سم.

البيانات المصدر متاحة على الإنترنت لهذا الرقم.

الشكل EV2. عرض الفرع الزائفة تزداد المستعمرات مع زيادة تركيز المغذيات وانخفاض كثافة الآجار

  1. عروض الفروع المثلى (مم الموضحة بالأرقام والألوان في الجدول) التي تنبأ بها نموذج التحسين مع مجموعات مختلفة من المعلمات البيئية.
  2. متوسط ​​عرض الفرع (مم موضح بالأرقام والألوان في الجدول) لـ الزائفة المستعمرات تحت مجموعات مختلفة من ظروف النمو. تم قياس متوسط ​​عرض فرع المستعمرة بطريقة شبه آلية (موصوفة بالتفصيل في الطرق والبروتوكولات). لكل حالة ، تم عرض متوسط ​​عرض الفرع من 2-4 مستعمرات.
  3. ظروف النمو الزائفة تنقسم المستعمرات إلى أربع مجموعات: 1. تركيز منخفض من المغذيات (4-8 جم / لتر أحماض كازامينية) وكثافة آجار عالية (0.50 - 0.55٪) II. تركيز عالٍ من العناصر الغذائية (10-16 جم / لتر من أحماض الكازامينو) وكثافة آجار عالية (0.50 - 0.55٪) III. انخفاض تركيز العناصر الغذائية (4-8 جم / لتر من أحماض الكازامينو) وانخفاض كثافة الآجار (0.40 - 0.45٪) والرابع. تركيز عالي من العناصر الغذائية (10-16 جم / لتر من أحماض الكازامينو) وكثافة أجار منخفضة (0.40- 0.45٪).
  4. متوسط ​​عرض الفرع لكل مجموعة في (ج). حجم العينة هو عدد المستعمرات التي يتم قياسها في كل مجموعة. تظهر أشرطة الخطأ الانحرافات المعيارية. غير زوجي ، ذو وجهين ر- تم استخدام الاختبارات للمقارنة بين المجموعات: I مقابل II: ***ص = 0.0004 I مقابل III: ****ص & lt 0.0001 II مقابل IV: ****ص & lt 0.0001 (مع تصحيح ويلش لأن الفروق بينهما لا تختلف اختلافًا كبيرًا) III مقابل IV: ص = 0.1485.

البيانات المصدر متاحة على الإنترنت لهذا الرقم.

التنبؤ بالأنماط المتفرعة باستخدام قاعدة التحسين

تشير نتائجنا إلى أن نمو المستعمرة المتفرعة في PA14 على وسط الحشود يتبع تقريبًا قاعدة التحسين (لمجموعة الظروف التجريبية التي تم فحصها): تحت كل حالة ، تطور المستعمرات البكتيرية النمط الأمثل الذي يزيد من كفاءة النمو. تفرض هذه القاعدة البسيطة قيدًا على عملية التفرع ، والتي تتيح التنبؤ بأنماط المستعمرات مع تغير الظروف التجريبية. مرة أخرى ، يتم فرض بدء الفروع في هذا النموذج من خلال تحديد عرض الفروع والكثافة. على وجه الخصوص ، توفر نتائج الفحص (الشكل 3 أ) تعيينًا بين ظروف النمو والتوليفات المثلى لـ دبليو و د. إذا افترضنا أن هذا التعيين يتم الحفاظ عليه محليًا ، فإنه يسمح لنا بتحديد المحلي دبليو و د من فروع المستعمرة والتنبؤ بأنماط المستعمرات في ظل ظروف أكثر تعقيدًا.

لاختبار هذه الفكرة ، قمنا أولاً بتخفيف الافتراض المبسط لتمديد الفرع أحادي الأبعاد. بدلاً من ذلك ، طبقنا نموذجًا للنمو المتفرع في ثنائي الأبعاد بدءًا من نقطة واحدة (الشكل 4 أ) أو نقاط تلقيح متعددة. يمتد كل فرع بعد التدرج الغذائي المحلي ، حيث يتم تعيين حدود الفرع دبليو، ويتم تحديد التشعبات بواسطة د (الشكلان 4 أ و EV3). على وجه التحديد ، نتتبع طرف فرع متنامي ونحسب كثافة الفرع المحلي. مع امتداد الفرع ، إذا كانت كثافة الفرع المحلي أقل من عتبة محددة مسبقًا (2/3د) ، يتم تشغيل تشعب الفرع ويبدأ فرع فرعي جديد. تتسق تنبؤات الأنماط المثلى حسب النماذج ذات تركيبات تمديد الفروع 1D أو 2D (الملحق الشكل S3).

الشكل 4. التنبؤ بأنماط المستعمرات ثنائية الأبعاد من خلال تطبيق قاعدة التحسين

  1. محاكاة التوسع ثنائي الأبعاد للأنماط المتفرعة. تبدأ المستعمرة من نقطة لقاح (دائرة مفتوحة) حيث تبدأ الفروع. تمثل الخطوط الصلبة مسارات أطراف الفروع (النقاط). يتم إعطاء كثافة الفرع المحلي عند طرف فرع معين بواسطة 1 /د، أين د هي المسافة بين طرف الفرع وأقرب جار له. عرض الفرع المحدد (دبليو) والكثافة (د) تحديد شكل وتشعب الفروع: حدود المستعمرة في دائرة نصف قطرها دبليو/ 2 من مسارات طرف الفرع يتشعب الفرع للحفاظ على كثافة الفرع المحلي حوله د. يتبع اتجاه نمو الفروع التدرج الغذائي المحلي. يتم حساب توزيع المغذيات ونمو الخلايا وامتداد الفرع كما هو موضح سابقًا (الشكل 1C).
  2. تلتقط أنماط المستعمرات المحاكاة السمات العامة للأنماط المرصودة لـ الزائفة المستعمرات. بالنسبة لعمليات المحاكاة ، في ظل كل حالة ، نقوم بتنفيذ الخيار الأمثل دبليو و د التي تعطي الكتلة الحيوية القصوى لتوليد الأنماط المثلى المتوقعة. معلمات أخرى: دن = 6.951 ملم 2 / ساعة βن = 216.9 جم / لتر / ساعة / ج. αج = 1.486 / ساعة كن = 1.156 جم / لتر جم = 0.0548 متر مكعب في التجارب ، يتم تعديل كفاءة توسع المستعمرة عن طريق تغيير كثافة الآجار. يتم إعادة استخدام الصور من الشكل 3 ب. شريط المقياس: 1 سم.

البيانات المصدر متاحة على الإنترنت لهذا الرقم.

الشكل EV3. أنماط مقلدة بمجموعات مختلفة من عرض الفروع وكثافتها

الأنماط ذات امتداد الفرع ثنائي الأبعاد الذي تم إنشاؤه بواسطة النموذج عند تنفيذ مجموعات مختلفة من عروض الفروع والكثافة. يتم الاحتفاظ بالمعلمات الأخرى للنموذج كما هي (دن = 9 ملم 2 / ساعة βن = 160 جم ​​/ لتر / ساعة / ج. αج = 1.2 / ساعة كن = 0.8 جم / لتر جم = 0.05 متر مكعب γ = 7.5 مم / ساعة / قدم مكعب. ن0 = 8 جم / لتر). يتم تهيئة الأنماط من قرص في المركز بكثافة خلية أولية موحدة ج0 = 0.5 متر مكعب يتم تعيين حدود الفرع من خلال عرض الفرع المحدد ، ويتم تحديد التشعبات حسب كثافة الفرع المحددة. يمتد كل فرع بعد التدرج الغذائي المحلي.

البيانات المصدر متاحة على الإنترنت لهذا الرقم.

الافتراض الرئيسي الجديد هو أن دبليو و د وفقًا لبيئة النمو المحلية ، والتي تعتمد على التوزيعات الأولية للمغذيات وتتغير مع توسع المستعمرة. بدءًا من نقطة تلقيح واحدة على توزيع موحد مبدئيًا لوسط النمو ، فإن الأنماط الناتجة في ظل ظروف مختلفة تلتقط بشكل موثوق أنماط التفرع التي لوحظت تجريبياً من حيث بنية الفرع والتوزيع (الشكل 4 ب).

تعتمد السمات الكمية لهذه الأنماط أيضًا على معلمات النموذج الأخرى ، مثل انتشار المغذيات (دن) ومعدل نمو الخلايا (αج). يؤدي تنوع هذه المعلمات إلى أنماط متفرعة متنوعة ، بما في ذلك التشعبات الرقيقة أو الأنماط ذات الأصابع المكتظة بكثافة (الشكل EV4). تشبه هذه الأنماط مستعمرات الأنواع البكتيرية الأخرى ، مثل Pseudomonas dendritiformis (بن يعقوب وآخرون، 2004). لذلك ، فإن نموذجنا قابل للتطبيق على الأنظمة الميكروبية الأخرى وقد يفسر سبب إنشاء المستعمرات البكتيرية المختلفة لأنماط مميزة بشكل كبير.

الشكل EV4. محاكاة أنماط مستعمرات متنوعة باستخدام النموذج بناءً على قاعدة التحسين

تؤدي المعلمات المتغيرة للنموذج إلى أنماط مستعمرات متنوعة ذات سمات كمية مميزة ، مثل التشعبات الرقيقة والأنماط ذات الأصابع المكتظة بكثافة. المعلمات المستخدمة لإنتاج هذه الأمثلة هي كما يلي: دن = 9.326 ملم 2 / ساعة βن = 152.9 جم / لتر / ساعة / ج. αج = 1.878 / ساعة كن = 0.8466 جم / لتر جم = 0.06050 قدم مكعب γ = 7.385 مم / ساعة / cu. ن0 = 4 جم / لتر (يسار) أو 5 جم / لتر (وسط) أو 8 جم / لتر (يمين). تعد كثافة وعرض الفرع المنفذين في النموذج هما الأمثلان اللذان يؤديان إلى أقصى كفاءة لتراكم الكتلة الحيوية ، كما تم العثور عليه من خلال نمذجة التحسين باستخدام صيغة تمديد الفرع ثنائي الأبعاد.

البيانات المصدر متاحة على الإنترنت لهذا الرقم.

يتيح إطار النمذجة هذا أيضًا تفسير أو التنبؤ بتشكيل النمط في ظل ظروف غير متجانسة. كتوضيح ، ضع في اعتبارك نمو المستعمرة المتفرعة على وسط حشد مع تدرج خطي من المغذيات. عندما يكون التدرج حادًا بدرجة كافية ، نلاحظ نمو مستعمرة غير متماثل ، ولكن ، بشكل غير متوقع ، تتوسع المستعمرات بشكل أسرع على الجانب مع تركيز أقل من المغذيات (الشكل 5 أ). باستخدام المعلمات المناسبة ، يكون نموذجنا قادرًا على إعادة إنتاج هذه الظاهرة غير البديهية (الشكل 5 أ). تشير المحاكاة إلى أن الظاهرة ناتجة عن عدم تناسق دبليو و د: يؤدي الحد من المغذيات إلى نمو الفروع الرقيقة بدلاً من الفروع الأوسع على الجانب الغني بالمغذيات مع معدلات تراكم الكتلة الحيوية المماثلة على كل جانب ، وتمتد الأفرع الرقيقة بشكل أسرع ، مما يؤدي إلى توسع واضح ضد التدرج.

الشكل 5. التنبؤ بأنماط المستعمرات في ظل ظروف غير متجانسة

  1. لوحظ نمو مضاد لتدرج المغذيات في الزائفة المستعمرات (الألواح العلوية) وتتم محاكاتها باستخدام النموذج (الألواح السفلية). الأرقام: تركيز حمض الكازامين (جم / لتر) على طرفي طبق بتري. تم تكرار التجربة بشكل مستقل ثلاث مرات ، ويتم عرض الصور التمثيلية. شريط المقياس: 1 سم. يتم الحصول على المعلمات المستخدمة في المحاكاة من خلال الفحص المنهجي الموصوف في (ب): دن = 5.749 ملم 2 / ساعة βن = 195.5 جم / لتر / ساعة / كوب مكعب. αج = 1.105 / ساعة كن = 0.6635 جم / لتر جم = 0.07890 سم مكعب γ = 7.513 ملم / ساعة / قدم مكعب.
  2. الفحص المنهجي لمساحة المعلمة التي ترضي سلوكيات نمو المستعمرات في ظل ظروف غير متجانسة. ① مع مجموعة معينة من معلمات النموذج العشوائية ، نقوم بإنشاء خرائط حرارية للكتلة الحيوية تحت تركيزات مختلفة من المغذيات عن طريق الفرز من خلال مجموعات من عرض الفروع والكثافة (تمثل الألوان وحدة تراكم الكتلة الحيوية: cu mm 2) نجد الأنماط المثلى تحت تركيزات المغذيات المختلفة و الحصول على رسم الخرائط بين الأنماط المثلى وتركيز المغذيات ③ مع التعيين ومعلمات النموذج ، نتوقع الأنماط في ظل ظروف غير متجانسة (على سبيل المثال ، الوسائط ذات التدرج الغذائي) لتسريع وتعزيز إنتاجية الفرز ، نستخدم بيانات محاكاة الخطوة ① لتدريب الشبكات العصبية التي تسمح لنا بمحاكاة النموذج وتوليد المزيد من البيانات بكفاءة عالية (الأسهم الصفراء).

البيانات المصدر متاحة على الإنترنت لهذا الرقم.

لاستكشاف مساحة المعلمة التي تسمح بنمو التدرج المضاد للمغذيات ، أجرينا فحصًا منهجيًا للمعلمات (الشكل 5 ب). يمكن استخدام هذا المخطط للبحث عن معلمات لمحاكاة أنماط أكثر تعقيدًا ، مثل أنماط المستعمرات التي تنمو على وسائط ذات أنماط عشوائية من العناصر الغذائية أو رطوبة السطح. بالنظر إلى مجموعة واحدة من معلمات النموذج ، أولاً نكتشف الأنماط المثلى تحت تركيزات مختلفة من المغذيات عن طريق الفرز من خلال مجموعات من دبليو و د (الخطوة 1) ، وبالتالي الحصول على رسم الخرائط بين تركيزات المغذيات والأنماط المثلى (الخطوة 2). من خلال تنفيذ هذا التعيين في النموذج ، يمكننا التنبؤ بأنماط المستعمرات التي تنمو في ظل التوزيعات غير المتجانسة للمغذيات والبحث عن المعلمات التي تولد نموًا مضادًا للتدرج (الخطوة 3).

لتسريع عملية الفرز واستكشاف مساحة المعلمة على نطاق أوسع ، استخدمنا التعلم الآلي لمحاكاة تنبؤات النموذج (الخطوة 4). تستغرق الخطوة 1 وقتًا طويلاً للغاية لأن البحث عن النمط الأمثل لكل مجموعة معلمات يتطلب فحص آلاف الأنماط. إطار عمل قائم على الشبكة العصبية قمنا بتطويره مسبقًا (Wang وآخرون، 2019) تسريع العملية أكثر من 30000 مرة بدقة عالية (الملحق الشكل S4).

باستخدام الشبكات العصبية المدربة بنتائج 1000 مجموعة معلمات ، قمنا بفحص 30000 مجموعة معلمات في مساحة المعلمة المقدرة من القياسات التجريبية (الملحق الطرق التكميلية). حددنا مساحة المعلمة التي تولد توسعًا مستعمرة مضادًا للتدرج المغذي بما يتوافق مع الملاحظات التجريبية. يكشف توزيع المعلمات المحددة أنه من أجل حدوث نمو التدرج المضاد للمغذيات ، فإن معدل استهلاك المغذيات (βن) يجب أن يكون مرتفعًا نسبيًا ومعدل نمو الخلايا (αج) وكفاءة التوسع (γ) يجب أن تكون منخفضة نسبيًا (الملحق الشكل S5) ، مما يشير إلى ارتباط هذه الظاهرة بنمو الخلايا المقيدة وحركتها.

النموذج أيضًا قادر على التنبؤ بأنماط المستعمرات مع تكوينات النمو المعقدة بشكل متزايد. لقد زرعنا مستعمرات متعددة في نفس طبق بتري بتكوينات مختلفة ، بما في ذلك النقاط المتناثرة والخطوط المستمرة والأنماط المعقدة. ترتبط محاكاة مستعمرات متعددة باستخدام تكوينات البذر الأولية المختلفة هذه بشكل جيد مع الأنماط المرصودة (الشكلان 6 و EV5). نظرًا لأن فروع المستعمرات المجاورة تتجنب بعضها البعض ، فإن الأنماط تختلف باختلاف تكوين نقاط البذر الأولية. في نموذجنا ، يتم تحديد أطوال الفروع من خلال تراكم الكتلة الحيوية المحلية ، ويتم توجيه اتجاهات النمو من خلال التدرج الغذائي المحلي. التقط النموذج خصائص اتجاه النمو وطول الفروع بدءًا من تكوينات البذر المختلفة ، مما يدل على أن النمو المحلي كافٍ لمراعاة سلوكيات النمو هذه.

الشكل 6. التنبؤ بأنماط المستعمرات مع تكوينات البذر المختلفة

محاكاة أنماط المستعمرات وملاحظتها عندما تبدأ المستعمرات من نقاط منفصلة أو خطوط متصلة أو أنماط معقدة تحمل المعلومات. الصفوف العلوية: مواقع البذر الأولية الصفوف الوسطى: عمليات المحاكاة بناءً على قاعدة التحسين الصفوف السفلية: صور الزائفة يتم تلقيح المستعمرات بالتكوينات المقابلة باستخدام نظام معالجة سائل آلي (0.1 ميكرولتر من ثقافة الخلية مع OD600

تم الاستغناء عن 0.2 في كل بقعة). تم تكرار التجربة بشكل مستقل ثلاث مرات ، ويتم عرض الصور التمثيلية. شريط المقياس: 1 سم. في عمليات المحاكاة ، يتم تهيئة الأنماط من نقاط نصف قطرها 5 مم وكثافة خلية أولية موحدة ج0 = 1.6 قدم مكعب معلمات المحاكاة هي كما يلي: دن = 5.749 ملم 2 / ساعة βن = 195.5 جم / لتر / ساعة / كوب مكعب. αج = 1.105 / ساعة كن = 0.6635 جم / لتر سم = 0.07890 سم مكعب γ = 4 مم / ساعة / ج. ن0 = 14.5 جم / لتر.

البيانات المصدر متاحة على الإنترنت لهذا الرقم.

الشكل EV5. التنبؤ بأنماط المستعمرات مع تكوينات البذر المختلفة وتركيزات المغذيات

النموذج قادر على التنبؤ بأنماط المستعمرات مع التكوينات الأولية المعقدة وتركيزات المغذيات المختلفة. الصف العلوي: مواقع البذر الأولية الصفوف السفلية: أنماط مستعمرة تمت محاكاتها وملاحظتها مع تكوينات بذر أولية مقابلة تنمو على وسط بتركيزات مغذية مختلفة (تركيز حمض الكازامينو: 4 ، 8 ، و 16 جم / لتر من أعلى إلى أسفل). في التجارب ، تم زرع مستعمرات متعددة على طبق بتري نفسه باستخدام معالج سائل آلي MANTIS (0.1 ميكرولتر من ثقافة الخلية مع OD600

تم الاستغناء عن 0.2 في كل بقعة). الصور تمثل 2 مكررات. يتم إعادة استخدام الصور من الشكل 6 ولوحة واحدة من الشكل 1 ب في لوحات "العناصر الغذائية المتوسطة". شريط المقياس: 1 سم. في عمليات المحاكاة ، يتم تهيئة الأنماط من مواقع ذات نصف قطر = 5 مم وكثافة خلية أولية موحدة ج0 = 1.6. معلمات المحاكاة هي كما يلي: دن = 5.749 ملم 2 / ساعة βن = 195.5 جم / لتر / ساعة / كوب مكعب. αج = 1.105 / ساعة كن = 0.6635 جم / لتر جم = 0.07890 سم مكعب γ = 4 مم / ساعة / ج. ن0 = 8.5 جم / لتر ، 14.5 جم / لتر ، أو 16.5 جم / لتر من الأعلى إلى الأسفل. تعد كثافة وعرض الفرع المنفذين هما الأمثلان اللذان يؤديان إلى أقصى كفاءة لتراكم الكتلة الحيوية ، كما تم العثور عليه من خلال نمذجة التحسين باستخدام صيغة تمديد الفرع ثنائي الأبعاد.


تحديد تسلسل PSEUDOMONAS PUTIDA CYTOCHROME P-450: العزلة والتسلسلات الجزئية لببتيدات السيستين 1

I. مقدمة

Pseudomonas putida يحتوي على نظام الكافور هيدروكسيل الذي يتطلب اختزال NADH- بوتيداريدوكسين ، بوتيداردوكسين وسيتوكروم P – 450 (Gunsalus et al ، 1978). للتحقيق في العلاقات الهيكلية والوظيفة للمكونات الفردية بالإضافة إلى مركب متعدد الإنزيمات ، لمقارنة الهياكل الكيميائية للمكونات الفردية من الأنواع الحية المختلفة ، من أجل التحديد الهيكلي الكامل لمكونات البروتين عن طريق دراسات حيود الأشعة السينية البلورية بالإضافة إلى مجموعة متنوعة من الأسباب المهمة الأخرى ، فإن تسلسل الأحماض الأمينية لمكونات البروتين ضرورية. حتى الآن ، قام مختبرنا بتسلسل بوتيداريدوكسين ، وهو بروتين كبريت الحديد Fe 2 S 2 * Cys 4 (Tanaka et al ، 1974). تقوم مجموعتنا حاليًا بترتيب تسلسل السيتوكروم P – 450 ، وهو أوكسيديز الوظيفة المختلطة لنظام الهيدروكسيل. إلى جانب هدفنا الرئيسي المتمثل في إجراء تسلسل كامل للسيتوكروم P-450كام، دور المخلفات الفردية في البروتين من وجهة نظر التركيب والوظيفة مهم. من المحتمل أن السلاسل الجانبية للأحماض الأمينية التي تلعب أدوارًا حيوية للغاية ويمكن دراستها من خلال مجموعة متنوعة من الإجراءات الفيزيائية والكيميائية هي بقايا السيستين. ومع ذلك ، قبل أن نتمكن من إجراء تجارب التعديل الكيميائي لبقايا السيستين ، كان من الضروري تطوير إجراء تجزئة الببتيد لعزل السيستين الفردي المحتوي على الببتيدات ومعرفة تسلسلها. في هذا التقرير ، يتم تقديم إجراء لعزل السيستين المحتوي على الببتيدات التربتية والتسلسلات الجزئية حول بقايا السيستين.


  1. أضف 45.3 جم من الوسط في 1 لتر من الماء المقطر.
  2. أضف 10 مل من الجلسرين واتركه يغلي ليذوب تمامًا.
  3. تعقيم عن طريق التعقيم على 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
  4. Cool the medium to approximately 50°C and pour into sterile Petri dishes.

The presence of growth is indicative of a positive reaction. Examine colonies under short wavelength (254nm) ultraviolet light for the presence of fluorescein. Visual examination may also reveal the typical yellow-green to blue color which indicates the production of pyocyanin. Both pyocyanin and fluorescein are typically produced by strains of P. الزنجارية.

A negative reaction is denoted by no growth.


الزائفة الزنجارية Genomics and Systems Biology

In the past 16 years we made significant contributions to الزائفة functional genomics. We co-authored the first (and fourth) genome sequence paper, co-run the الزائفة genome web page with Fiona Brinkman, Simon Fraser University, and provide لوكس mutants from our library to the community. Using these resources we have made many new contributions to understanding the surfaces, antibiotic susceptibility and resistance (particularly adaptive resistance), and environmental/pathogenesis adaptations of this organism.

In particular we have been recently trying to understand adaptive lifestyles. الزائفة الزنجارية has evolved complex interwoven regulatory mechanisms that permit adaptation to a wide variety of circumstances and environments (including antibiotic, nutritional and other environmental stresses, and particular growth states such as swarming and surfing motility and biofilm formation that are thought to represent distinct lifestyles in the body). We have addressed these issues using the 3 comprehensive arrayed mutant libraries available to us, as well as global transcriptional profiling (RNA-Seq). Generally speaking this reveals massive complexity. For example, swarming motility is a complex form of surface motility triggered by semi-viscous medium and a weak nitrogen source (such as amino acids). In swarming motility we identified more than 1600 genes (85 regulators) that were dysregulated under swarming conditions including upregulation of most virulence factors, alterations in metabolism and changes in antibiotic resistance genes mutant library screens identified 233 genes essential to this process (mutants largely prevented swarming), including 35 regulators. We have characterized some of the regulators in great detail, such as CbrAB/CrcZ/Crc and MetR, including a detailed characterization of their roles in motility, biofilm formation, production of various virulence factors, growth in vivo and antibiotic resistance. Similar detailed studies are underway for other complex adaptations and we are particularly interested deciphering the multidrug adaptive resistance that accompanies these growth states.


الزائفة الزنجارية. الخصائص

Morphological and tinctorial properties : Pseudomonas aeruginosa belongs to the family Pseudomonadaceae. Gram – straight rods, arranged singly, in pairs or in short chains. Mobile. Do not form spores have drank (pili). Under certain conditions, can produce extracellular slime capsule polysaccharide.

Cultural properties : obligate aerobes that grow well on simple nutrient media. Selective or differential diagnostic nutrient medium supplemented with antiseptics used for the isolation of a pure culture. In a liquid nutrient medium bacteria form a characteristic greyish silvery film on the surface. Colonies are smooth rounded dryish or mucous. A characteristic feature of the biological species of bacteria P. الزنجارية is the ability to synthesize water-soluble pigments (pyocyanin blue-green), coloring the appropriate color bandage patients or their nutrient medium for cultivation.

Biochemical properties: low saccharolytic activity: does not ferment glucose and other carbohydrates. Pseudomonas are only able to oxidize glucose. Reduce nitrates to nitrites, it possesses proteolytic activity: liquefies gelatin. Pseudomonas aeruginosa is cytochrome oxidase and catalase. Many strains of Pseudomonas aeruginosa produce bacteriocins – proteins having bactericidal properties.

Antigenic properties: O and H antigens. Cell wall lipopolysaccharide is a type or group-specific thermostable O-antigen, which is carried out on the basis of serotyping strains . Thermolabile flagellar H antigen is of two types, and has a protective effect. On the surface of the rod cell antigens found pili.

Ways of transmission of Pseudomonas aeruginosa

main pathways of Pseudomonas infection is primarily patients with Pseudomonas infection as well as the hands of staff. Also infected items, solutions, creams for hands, face towels, genital shaving brush for shaving, etc.. N.
Rare path of the spread of infection are tools, devices and equipment that have been subjected to disinfection, have been ineffective.

Pseudomonas aeruginosa mainly affects immunocompromised individuals: hospitalized patients with concomitant diseases, the elderly and children. Once in the body via catheter, tools or solutions for irrigating the urethra or vagina, Pseudomonas aeruginosa cause infections of the genitourinary system.

Predisposing factors for infection are urolithiasis, congenital malformations of genitals, constant or repetitive catheterization, removal of the prostate. Characteristic of infection in the hospital environment, for example in urology departments. Pseudomonas aeruginosa occupy one of the first places among the pathogens that develop in the transplanted kidney.
Sее more
Read more information


Acquired Antibiotic Resistance

Acquired antibiotic resistance is the second mechanism through which Pseudomonas aeruginosa have developed antibiotic resistance.

Mutational change - Mutational change is particularly beneficial for the pathogen as modification of antibiotic targets allows them to evade the intended actions of the drug. This may involve the overexpression of efflux pumps and thus the ability of the bacterium to remove toxic substances from the cell.

Acquired resistance genes - Bacteria have been shown to be capable of acquiring genes through horizontal transfer. In the case of various P. aeruginosa strains, the acquisition of resistance genes allows the bacterium to develop resistance to various antibiotics. This transfer may occur through conjugation, transduction, or transformation.


  • Positive: Growth, variation in color of colonies. Visual examination may also reveal the typical yellow-green to blue color which indicates the production of pyocyanin.
  • Negative: No growth

Pyocyanin Production:

  • Positive Test – Blue-green pigmentation surrounding growth
  • Negative Test – No color development

Fluorescein Production (requires the use of ultraviolet light):


شاهد الفيديو: Pathogenic bacteria Lab 5 Pseudomonas Spp. (شهر فبراير 2023).