معلومة

تناقص الإشارات في قياسات الفحص

تناقص الإشارات في قياسات الفحص


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أنا أعمل بمقايسة الكالسيوم لدراسة تأثيرات عوامل الفوعة المختلفة. يعمل الفحص ، ولكن من يوم لآخر تنخفض إشارات تحلل الخلايا. لسوء الحظ ، لم أجد تفسيرًا لسبب حدوث ذلك.

الفحص الخاص الذي أستخدمه يقيس تحلل الخلية. تتسبب عوامل الفوعة التي أستخدمها في تكوين المسام وتؤدي إلى تدفق الكالسيوم (من المخزن المؤقت). تنشط بروتينات استراز الفلوروفور وتحتاج إلى الكالسيوم. تؤدي زيادة تحلل الخلايا إلى زيادة الإشارة.

كما ذكرت بالفعل إشاراتي تنخفض (من يوم لآخر). لكني لا أعرف لماذا.

هل لديك فكرة عما يمكن أن يؤدي إلى مثل هذه الآثار؟

فيما يلي بعض العوامل التي قد تكون متورطة.

  • عوامل الفوعة تفقد نشاطها؟ (لا أشعر أن هذا يسبب المشكلة لأن المخزونات الجديدة تظهر أيضًا انخفاضًا في النشاط ، وكذلك الإشارة من التحكم الإيجابي تنخفض. أقول إنها تنخفض بنسبة مماثلة ، والتحكم الإيجابي هو triton.
  • الصبغة تفقد نشاطها؟ عادة ما يتم تخزين الزجاجة في الفريزر. أنا فقط أخرجه للمقايسة. قبل أن أستخدمه ، أضع الزجاجة على شاكر لمدة 30 دقيقة تقريبًا. أنا فقط أفتح الزجاجة لبضع ثوان ثم أعيدها إلى الفريزر.
  • قارئ اللوحة مكسور أو تغير بروتوكول القراءة؟ لقد تحققت بالفعل من البروتوكول وكل شيء هو نفسه كما في البداية. يحصل زملاء العمل على نفس النتائج باستخدام نفس قارئ اللوحة كما كان من قبل. لذلك أعتقد أن هذا لا ينبغي أن يكون مشكلة.
  • يتم تدمير المخزن المؤقت من الإجراء؟ أقوم بتخزينه في الفريزر وأخرجه ووضعه في حمام مائي. بعد أن استخدمته أعيده إلى الفريزر. أقوم بهذا الإجراء في كل مرة ، هل يمكن أن يؤدي ذلك إلى آثار سلبية؟ الوسيط يحتوي على الكالسيوم ، هل يمكن أن يحدث شيء معه (يلعب الكالسيوم دورًا مهمًا في هذا الفحص)؟ أخبرني أحد الزملاء بالفعل أنه يخزن المخزن المؤقت الخاص به في الثلاجة وليس في الثلاجة ، ولم يحصل على مثل هذه التأثيرات. لكن ربما ليس الشيء الوحيد الذي يفعله مختلفًا ...
  • يتغير رقم الخلية؟ لا يتغير عنصر التحكم السلبي خلال التجارب ، ولا تزال الإشارة الصادرة منه أعلى من القيم الموجودة في الفراغ. لكنني سوف أتحقق من ذلك.
  • هل يمكن أن تسبب خلاياي مشاكل؟ تبدو جيدة تحت المجهر.

غالبًا ما يُشتبه في أن دورات تجميد الذوبان تسبب تدهورًا في الجزيئات العضوية 1,2. سيكون تخميني الأول هو أن الفلوروفور الخاص بك يتحلل بسبب تلك الدورات المتكررة. بدلاً من ذلك ، قد تحصل على ترسيب لمركب الكالسيوم من المخزن المؤقت الذي تقوم بتجميده وليس زميلك.

الممارسة المعملية القياسية هي صنع قسامات من المحاليل المجمدة. قبل إذابة المحلول لأول مرة ، قم بإعداد حاويات أصغر معدة مسبقًا (مثل أنابيب إيبندورف) ثم قسّم الكمية التي تتوقع استخدامها لكل تجربة. بهذه الطريقة يتم إذابة المركبات التي يحتمل أن تكون حساسة مرتين فقط.

مراجع:

1: كوزيكوفسكي ، ب. تأثير دورات التجميد / الذوبان على ثبات المركبات في DMSO. مجلة الفحص الجزيئي الحيوي، 8 (2) ، 210-215.

2: إدارة الغذاء والدواء الأمريكية. (2008). إرشادات للصناعة. إرشادات استقرار الدواء.


شاهد الفيديو: كيفيه العمل على تطبيق برنامج فحص التيوري (شهر فبراير 2023).