معلومة

كيف تم ترتيب موقع تقييد استخدام EcoRI؟

كيف تم ترتيب موقع تقييد استخدام EcoRI؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

تم تحديد تسلسل موقع تقييد EcoRI - GAATTC في أوائل السبعينيات ، قبل اختراع Sanger Sequence. (1977)

كيف تم تسلسل موقع تقييد EcoRI؟


تم الإبلاغ عن أول تحديد لموقع التعرف على endonulease للتقييد في:

Kelly & Smith (1970) إنزيم مقيد من Hemophilus influenzae II. التسلسل الأساسي لموقع التعرف. J مول. بيول. 51: 393-409

كان يسمى الإنزيم بعد ذلك نوكلياز داخلي R ، ولكنه يُعرف الآن باسم HindII (أو HincII).

كانت الطريقة المستخدمة هي قطع الحمض النووي بالإنزيم ثم إزالة الفوسفات الطرفي المكشوف باستخدام الفوسفاتيز القلوي. يمكن بعد ذلك تسمية هذه الغايات بـ 32P باستخدام كيناز polynucleotide و γ المسمى ATP.

تم بعد ذلك معالجة الحمض النووي المسمى نهاية بالنوكليازات بثلاث طرق مختلفة لإطلاق أحاديات النيوكليوتيدات ، والنيوكليوتيدات ، ومزيج مُخصب لثلاثي النيوكليوتيدات. في كل حالة ، تم تحديد المنتجات ذات العلامات من خلال سلوكها في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ثنائية الأبعاد ، وتم تمييزها أيضًا لتكوينها الأساسي الكلي بعد هضمها إلى أحاديات النيوكليوتيدات عند الاقتضاء.

الموقع المستنتج كان / هو

5 '---- GTY RAC ---- 3' 3 '---- CAR YTG ---- 5'

وهكذا تم العثور على أحاديات النوكليوتيدات المسمى A و G (البيورين = R) ، ووجد أن ثنائي النوكليوتيدات هو GA و AA وما إلى ذلك.

تم تحديد تسلسل EcoRI بنفس المنهجية وتم الإبلاغ عنها بواسطة

Hedgpeth et al (1972) تسلسل نوكليوتيد الحمض النووي مقيد بواسطة نوكلياز RI. بروك. ناتل. أكاد. Sci USA 69: 3448 - 3452

إضافة:

على الرغم من أن تسلسل سانجر (طريقة زائد ناقص) قد تم تطويره خلال السبعينيات ، إلا أنه لم ينتشر حتى أوائل الثمانينيات. لذلك على سبيل المثال ، كان أول تسلسل بلازميد كامل يتم تحديده هو pBR322 في عام 1979:

Sutcliffe (1979) تسلسل نوكليوتيد كامل لبلازميد الإشريكية القولونية pBR322. رمز CSH. كمية. بيول. 43: 77-90

"لقد حددت تسلسل 4362-nucleotide-pair لناقل استنساخ البلازميد pBR322 باستخدام تقنية تسلسل الحمض النووي لماكسام وجيلبرت (1977). يحتوي هيكل الحمض النووي على العديد من الميزات المثيرة للاهتمام التي تؤدي إلى تنبؤات قابلة للاختبار."

كانت طريقة التسلسل القياسية المستخدمة في ذلك الوقت هي التسلسل الكيميائي باستخدام منهجية Maxam-Gilbert. عندما بدأت باحثي ما بعد الدكتوراة في الولايات المتحدة الأمريكية في عام 1979 ، كان تسلسل M-G هو الطريقة القياسية. لم ينطلق تسلسل سانجر إلا بعد تطوير متجهات M13 mp (ولاحقًا البلازميدات pUC) بواسطة J Messing في أوائل الثمانينيات. ويا للراحة كان ذلك: تسلسل M-G كان شاقًا للغاية ، كما سيشهد أي شخص فعل ذلك.


سابقة بمعنى البيئةRI

سابقة بمعنى البيئةRI (وضوحا "eco R one") هو إنزيم نوكلياز مقيد معزول عن الأنواع بكتريا قولونية. إنه إنزيم تقييد يقوم بشق حلزونات الحمض النووي المزدوجة إلى أجزاء في مواقع محددة ، وهو أيضًا جزء من نظام تعديل التقييد. ال سابقة بمعنى البيئة ينشأ جزء من اسم الإنزيم من الأنواع التي تم عزله منها - يشير الحرف "E" إلى الاسم العام وهو "Escherichia" و "co" يشير إلى اسم النوع ، "coli" - بينما يمثل R السلالة المعينة ، في هذه الحالة RY13 ، ويشير I إلى أنه كان أول إنزيم معزول من هذه السلالة.

في البيولوجيا الجزيئية يتم استخدامه كإنزيم تقييد. سابقة بمعنى البيئةيقوم RI بإنشاء 4 نهايات لزجة من النيوكليوتيدات بنهايات متدلية بطول 5 بوصات من AATT. تسلسل التعرف على الحمض النووي حيث يتم قطع الإنزيم هو G ↓ AATTC ، والذي يحتوي على تسلسل متناوب ومتكامل لـ CTTAA-G. يمكن أن تترك إنزيمات التقييد الأخرى ، اعتمادًا على مواقع القطع الخاصة بها ، 3 'نتوءات أو نهايات حادة بدون أي تراكمات.


أنزيمات التقييد

يمكن قطع الحمض النووي بواسطة نوكليازات تقييد ( إعادة ). نوكليازات داخلية هي إنزيمات يمكنها تحلل بوليمر الحمض النووي عن طريق تكسير الفوسفوديستر الرابطة بين الفوسفات والبنتوز على العمود الفقري للحمض النووي. هذه رابطة تساهمية قوية جدًا بينما تحافظ الروابط الهيدروجينية الأضعف على تفاعلاتها وتقطيعها المزدوج.

كما يوحي الاسم ، فإن نوكليازات التقييد (أو إنزيمات التقييد) هي "محدد"في قدرتها على قطع أو هضم الحمض النووي. القيد الذي يفيد علماء الأحياء هو عادة متناوب تسلسل الحمض النووي. المتواليات المتناظرة هي نفس التسلسل للأمام وللخلف. بعض الأمثلة على المتناظرات: RACE CAR ، CIVIC ، A MAN A PLAN A CANAL PANAMA. فيما يتعلق بالحمض النووي ، هناك خيطانان يعملان بشكل مضاد للتوازي مع بعضهما البعض. لذلك ، فإن المكمل العكسي لأحد الخيطين مطابق للآخر. يميل علماء الأحياء الجزيئية أيضًا إلى استخدام هذه المقصات الجزيئية الخاصة التي تتعرف على متناظرات من 6 أو 8. باستخدام 6 قواطع أو 8 قاطعات ، تحدث التسلسلات عبر امتدادات كبيرة نادرًا ، ولكن غالبًا ما تكون ذات فائدة.

ايكو ارى يولد نهايات لزجة متماسكة SmaI يولد نهايات حادة

تحلل إنزيمات التقييد روابط فسفودايستر تساهمية للحمض النووي لتترك إما نهايات "لزجة / متماسكة" أو نهايات "غير حادة". هذا التمييز في القطع مهم لأن ايكو ارى يمكن استخدام الطرف اللاصق لمطابقة قطعة من الحمض النووي مقطوعة بنفس الإنزيم من أجل لصقها أو ربطها معًا مرة أخرى. بينما تقطع نوكليازات الحمض النووي ، إنزيمات دمج الجزيئات انضم إليهم مرة أخرى معًا. هضم الحمض النووي مع ايكو ارى يمكن ربطها مرة أخرى مع قطعة أخرى من الحمض النووي المهضوم بها ايكو ارى، ولكن ليس للقطعة المهضومة بها SmaI. قاطع غير حاد آخر هو EcoRV مع تسلسل التعرف على GAT | ATC.


تطبيق نوكليازات تقييد HINDIII و EcoRI في تحديد وتشخيص التليف الكيسي الناجم عن طفرة CFTR -F508

يحدث التليف الكيسي (CF) بسبب طفرة في بروتين CFTR تمنع نقل الأملاح عبر أسطح الخلايا الظهارية مما يؤدي إلى فرط إنتاج المخاط والموت في النهاية. كان الغرض من هذه التجربة هو تحديد ما إذا كان المريض البالغ من العمر 3 سنوات مصابًا بالتليف الكيسي. ذكرت الفرضية أن جيف سيكون مصابًا بالتليف الكيسي الناجم عن طفرة CFTR ∆F508. كان من المتوقع أن يتم قطع الحمض النووي لجيف وعناصر التحكم الإيجابية / السلبية بواسطة EcoRI مرتين لإنتاج ثلاثة نطاقات بأحجام 2150 نقطة أساس و 2150 نقطة أساس و 4700 نقطة أساس وأن DNA جيف والتحكم الإيجابي سيتم قطعهما بواسطة HindIII بمجرد إنتاج اثنين أحزمة بأحجام 7،200 bp و 1،800 bp. استخدمت التجربة نوكليازًا داخليًا لتقييد EcoRI و HindIII في تحليل RFLP وتصور النتائج باستخدام الرحلان الكهربائي على هلام agarose ، وتم حساب الحجم الجزيئي لشظايا الحمض النووي هذه من معادلة تم إنتاجها من رسم بياني منحنى قياسي. تم تضمين الحمض النووي لمريض مصاب بطفرة CFTR -F508 كعنصر تحكم إيجابي وتم تضمين الحمض النووي للمريض بدون طفرة CFTR -F508 كعنصر تحكم سلبي. أظهرت نتائج التجربة أن جميع عينات الحمض النووي المقطوعة بواسطة EcoRI أنتجت شظايا الحمض النووي ذات الحجم المماثل ، وتم قطع الحمض النووي لجيف والتحكم الإيجابي بشكل متماثل تقريبًا بواسطة HindIII ، بينما تم قطع التحكم السلبي بشكل مختلف. أدت هذه النتائج إلى قبول الفرضية ، مما يعني أنه تم تشخيص جيف بالتليف الكيسي الناجم عن طفرة CFTR -F508.

مقدمة

في الأفراد الأصحاء ، يستجيب الجسم لأمراض الجهاز التنفسي عن طريق زيادة مستويات المخاط في الرئتين والجهاز التنفسي. ومع ذلك ، يمكن لهذا المخاط أيضًا أن يحبس البكتيريا والمواد الغريبة ، لذلك ينقل بروتين منظم توصيل الغشاء التليف الكيسي (CFTR) الأملاح بما في ذلك أيونات الكلور وأيونات البيكربونات والأنيونات عبر خلايا الرئة الظهارية لترطيب الرئتين وإزالة المخاط الزائد (Gentzsch، 2018 جنوب وآخرون 2018).

ومع ذلك ، هناك أكثر من 2000 طفرة في جين CFTR يمكن أن تؤدي إلى مرض التليف الكيسي المميت (Southern et al. 2018). يتم تجميع طفرات CFTR هذه في خمس فئات مختلفة بناءً على كيفية تأثيرها على بروتين CFTR: تنتج طفرات الفئة الأولى بروتين CFTR غير فعال عن طريق إضافة كودون التوقف المبكر إلى التسلسل الجيني ، وتنتج طفرات الفئة الثانية بروتين CFTR غير طبيعي يتحلل معظمه بواسطة الخلية قبل أن تصل إلى بطانة الرئة ، تنتج طفرات الفئة الثالثة بروتينات CFTR التي لا يمكنها نقل الأيونات عبر خلايا الرئة الظهارية ، وتنتج طفرات الفئة الرابعة بروتينات CFTR المعطلة التي تواجه صعوبة في نقل الأيونات عبر خلايا الرئة الظهارية ، وتنتج طفرات الفئة الخامسة وظيفية بروتين CFTR ولكن بأعداد أقل من المعتاد لذلك يقلل هذا من كفاءته (Southern et al. 2018).

أكثر طفرات CFTR شيوعًا ، المسؤولة عن 90 ٪ من حالات التليف الكيسي (Cooney ، 2018) هو عيب من الفئة الثانية يسمى طفرة ∆F508 ، وتحدث هذه الطفرة المحددة عندما يتم حذف فينيل ألانين في الموضع 508 من جين CFTR (Suaud et آل 2011). هذا مرض وراثي جسمي متنحي شائع جدًا وقاتل يصيب واحدًا من كل 2000 من الأمريكيين الشماليين أو 70.000 فرد على مستوى العالم (كتنج ، 2015 Southern et al. 2018). هذا المرض قاتل بسبب خلل بروتين CFTR مما يعني أن المخاط يتراكم في الرئتين وقنوات البنكرياس التي تحبس البكتيريا ، وتضعف جهاز المناعة ، وتضر بالأعضاء ، وتسبب الالتهابات ، وغالبًا ما تؤدي إلى مرض السكري و / أو سوء التغذية ، عادة ، المرضى يموت من فشل الجهاز التنفسي (كتنج ، 2015 Southern et al. 2018). لحسن الحظ ، هناك العديد من العلاجات للتخفيف من آثار هذا المرض وإطالة عمر الأفراد المصابين ، وبما أن التليف الكيسي لا ينتج إلا عن طفرات في جين CFTR ، فمن السهل نسبيًا اختبار المرضى وتشخيصهم (كتنج ، 2015).

هذه الاضطرابات الجسدية المتنحية أحادية الجين (قطع ، 2015) تخلق نوعًا من التباين الجيني لجين CFTR داخل مجموعة سكانية تسمى تعدد الأشكال (Pare ، 2012). إحدى الطرق الأكثر شيوعًا لتشخيص تعدد الأشكال أحادية الطفرة هي باستخدام تقنية تسمى تحليل تعدد الأشكال لطول جزء التقييد (RFLP) ، والتي تستخدم نوكليازات تقييدية لتقطيع تسلسلات الحمض النووي إلى أجزاء في مواقع محددة لمساعدة الباحثين في تحديد الاختلافات الجينية (Loenen et al. 2014 سابينزا ، 2012). نوكليازات التقييد هي إنزيمات يتم إنتاجها بشكل طبيعي في عدة أنواع من بدائيات النوى ولكن لها العديد من التطبيقات في التجارب الجينية المعملية (Pingoud وآخرون ، 2014). يتم تجميع نوكليازات التقييد أو REases في أربع فئات (النوع الأول ، والنوع الثاني ، والنوع الثالث ، والنوع الرابع) الأكثر استخدامًا في الاختبارات الجينية هي النوع الثاني REases التي تعمل عن طريق شق نطاقات الفوسفات على أو بالقرب من تسلسل التعرف في الحمض النووي ، تنتج هذه العملية أجزاء متسقة من الحمض النووي (Pingoud et al. 2014 Sapienza ، 2012).

اثنين من أكثر REases المفهومة من النوع الثاني تشمل EcoRI و HindIII: EcoRI الذي تم اكتشافه من Escherichia coli وتم اكتشاف HindIII من المستدمية النزلية (بينجود وآخرون 2014). على وجه التحديد ، يقوم EcoRI و HindIII بتحديد تسلسل التعرف على النوكليوتيدات المتداخلة الخاصة بهما ويقطع روابط الفوسفات بين النيوكليوتيدات: يتعرف EcoRI على GAATTC ويشق رابطة الفوسفات بين G و A ، بالإضافة إلى أنه سيتعرف ويقطع أي متواليات تختلف بقاعدة واحدة- الزوج ، HindIII يتعرف على AAGCTT ويشق رابطة الفوسفات بين الاثنين A (Loenen et al. 2014 Sapienza ، 2012). بالإضافة إلى ذلك ، نظرًا لأن هذين REases ينتجان قطع متداخلة متناظرة ، يمكن لشظايا الحمض النووي أن تصلب إلى حبلاها التكميلي وقد تم استغلال ذلك لتطبيقات الاستنساخ الجيني (Loenen et al. 2014). عندما يتم إضافة EcoRI إلى عينة الحمض النووي للدم أو اللعاب لمريض إما مع أو بدون طفرة CF∆F508 ، فإن EcoRI يشق جين CFTR مرتين لإنتاج ثلاث شظايا تبلغ 2150 نقطة أساس و 2150 نقطة أساس و 4700 نقطة أساس. ومع ذلك ، ينتج HindIII نتائج مختلفة عند إضافته إلى عينة الدم أو الحمض النووي للمرضى الذين يعانون من طفرة CF∆F508 وبدونها. في المرضى الذين لا يعانون من طفرة CF∆F508 ، يشق HindIII جين CFTR مرتين لإنتاج ثلاث شظايا تبلغ 1500 نقطة أساس و 5700 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس. من ناحية أخرى ، في المرضى الذين يعانون من طفرة CF∆F508 ، لا يحدد HindIII تسلسل التعرف عند 1500 نقطة أساس بسبب حذف فينيل ألانين في الموضع 508 يعبث ببقية التسلسل ، لذلك بدلاً من ذلك ، يشق HindIII جين CFTR فقط لإنتاج جزأين تبلغ قيمتهما 7200 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس. السبب في أن HindIII ينتج نتائج مختلفة في المرضى الذين يعانون من الطفرة وبدونها ، بينما ينتج EcoRI نتائج متطابقة هو أن HindIII أكثر تحديدًا ويمكنه فقط تحديد تسلسل التعرف الدقيق بينما EcoRI أقل تحديدًا قليلاً ويمكنه تحديد تسلسلات متنوعة قليلاً. يمكن تحليل نتائج تحليل RFLP بالرحلان الكهربائي على هلام الاغاروز ، وتضاف صبغة الفلورسنت إلى عينات الحمض النووي بحيث تتألق تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية للكشف عن المسافة التي قطعتها الأجزاء. المسافة التي تقطعها العينات تتناسب مع طولها ، وبالتالي ، يمكن استخدام المسافات التي تقطعها شظايا الحمض النووي لإنشاء معادلة من منحنى قياسي يستخدم المسافات التي قطعتها عينات الحمض النووي الأخرى لتحديد حجمها الجزيئي.

ستختبر هذه التجربة طفلًا يبلغ من العمر 3 سنوات يُدعى جيف بسبب التليف الكيسي الناجم عن طفرة CFTR ∆F508. لتحديد ما إذا كان جيف مصابًا بالتليف الكيسي ، سيخضع الحمض النووي الخاص به لتحليل RFLP مع نوكلياز التقييد EcoRI و HindIII. سيخضع التحكم الإيجابي (المريض المصاب بطفرة ∆F508) والتحكم السلبي (المريض بدون طفرة ∆F508) أيضًا لتحليل RFLP باستخدام EcoRI و HindIII بحيث يمكن مقارنة نتائج Jeff بشيء ما. سيتم تصور نتائج تحليل RFLP بواسطة الرحلان الكهربائي على هلام الاغاروز ثم سيتم استخدام المعادلة الناتجة من منحنى قياسي لحساب الأحجام الجزيئية لشظايا الحمض النووي بعد قطعها بواسطة REases. من المهم تحديد ما إذا كان جيف مصابًا بالتليف الكيسي ونوع الطفرة التي يسببها التليف الكيسي حتى يتمكن من تلقي أفضل علاج حتى يتمكن من العيش حياة طويلة خالية من الألم.

يُفترض أن جيف يعاني من التليف الكيسي لأنه يظهر عليه العديد من الأعراض المصاحبة للتليف الكيسي بما في ذلك الصفير ، والطقطقة ، والسعال المستمر ، والبراز الدهني ، وسيلان الأنف. علاوة على ذلك ، نظرًا لأن التليف الكيسي الناجم عن طفرة CFTR -F508 هو اضطراب وراثي جسمي متنحي ، فمن المحتمل أن كلا والديه كانا حاملين للطفرة وأنه ورث أليلين متحولين ، وهذا يفسر سبب عدم وجود تاريخ طبي لوالديه للإصابة بالكيسي. تليف.

إذا كانت هذه الفرضية صحيحة وكان لدى Jeff بالفعل تليف كيسي ناتج عن طفرة CFTR -F508 ، فمن المتوقع أنه عندما يتم قطع الحمض النووي الخاص به بواسطة EcoRI مرتين لإنتاج ثلاثة نطاقات لها أوزان جزيئية تبلغ 2150 نقطة أساس ، و 2150 نقطة أساس ، و 4،700 نقطة أساس وأنه سيتم قطع الحمض النووي الخاص به بواسطة Hind III مرة واحدة لإنتاج نطاقيْن لهما أوزان جزيئية تبلغ 7200 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس. أيضًا ، سيتم أيضًا قطع عناصر التحكم (المرضى الذين يعانون من طفرة ∆F508 أو بدونها) بواسطة EcoRI مرتين لإنتاج ثلاثة نطاقات لها أوزان جزيئية تبلغ 2150 نقطة أساس و 2150 نقطة أساس و 4700 نقطة أساس. لذلك ، فإن الحمض النووي لجيف والمرضى الذين يعانون من طفرة ∆F508 وبدونها سيكون لديهم نطاقات ذات أوزان جزيئية متطابقة عند قطعها بواسطة EcoRI. بالإضافة إلى ذلك ، سيتم أيضًا قطع التحكم الإيجابي (المريض المصاب بطفرة ∆F508) بواسطة HindIII مرة واحدة لإنتاج نطاقيْن لهما أوزان جزيئية تبلغ 7200 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس. في حين أن التحكم السلبي (المريض بدون طفرة ∆F508) سيتم قطعه مرتين لإنتاج ثلاثة نطاقات لها أوزان جزيئية تبلغ 5700 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس و 1500 نقطة أساس. هذا يعني أن النطاقات التي تظهر عند قطع عينة DNA الخاصة بـ Jeff باستخدام HindIII يجب أن تكون متطابقة في الوزن مع المريض المصاب بطفرة ∆F508 التي تم قطع الحمض النووي أيضًا باستخدام HindIII ، ويجب أن تكون كلتا العينات مختلفة عما كانت عليه عند استخدام HindIII مع المريض الذي ليس لديه طفرة ∆F508.

المواد

للبدء ، تم الحصول على ست عينات من الحمض النووي: عينتان من المريض الذي يتم اختباره بحثًا عن التليف الكيسي (جيف) ، وعينتين من فرد مصاب بطفرة ∆F508 ، وعينتين من فرد بدون طفرة ∆F508. تم قطع العينات من الفرد المصاب بطفرة ∆F508 مسبقًا باستخدام EcoRI و HindIII على التوالي ، ولم تتم إضافة أي شيء آخر إلى هذه العينات حتى تمت إضافة صبغة التحميل. تم دمج المخزن المؤقت للتفاعل مع العينات الأخرى ، ثم تمت إضافة EcoRI إلى عينة DNA واحدة للفرد بدون طفرة ∆F508 وإلى واحدة من عينة DNA الخاصة بـ Jeff. بعد ذلك ، تمت إضافة HindIII إلى عينة DNA واحدة للفرد بدون طفرة ∆F508 وإلى واحدة من عينة DNA الخاصة بـ Jeff. تم تحضين هذه العينات الأربع عند 37 درجة مئوية لمدة ثلاثين دقيقة. تم تحضير محلول من جل الاغاروز بنسبة 0.8 ٪ باستخدام محلول agarose و 1x TAE و 10000x Sybr Safe DNA gel stain. يُسكب هذا المحلول في صينية هلامية مقفلة في رف صب ، ويضاف مشط ثم يوضع الجل في الثلاجة لمدة ثلاثين دقيقة حتى يتصلب. تمت إزالة المشط ثم تم إنزال صينية الهلام بالجيل الصلب في حجرة الرحلان الكهربائي وغمرها في محلول TAE 1x. تمت إضافة صبغة تحميل تحتوي على Ficol إلى كل عينة من عينات الحمض النووي الست. تم تحميل علامة في أول بئر / ممر لعرض نطاقات من الأحجام الجزيئية التالية: 12000 نقطة أساس و 7000 نقطة أساس و 3000 نقطة أساس و 2500 نقطة أساس و 2000 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس و 1500 نقطة أساس. ثم تم تحميل عينات الحمض النووي الست التي تم قطعها باستخدام EcoRI أو HindIII في آبار منفصلة. تم وضع الغطاء على حجرة الرحلان الكهربي بحيث تمتد الشحنة من الطرف السالب إلى الطرف الموجب ، وسمح للجهاز بالعمل لمدة 45 دقيقة عند 120 فولت حتى انقضاء منتصف فترة الاستحقاق عبر الهلام. تمت إزالة الجل من الجهاز ومشاهدته على أداة نقل الأشعة فوق البنفسجية بجوار المسطرة بحيث يمكن قياس المسافة التي قطعتها كل صبغة. تم إنشاء رسم منحنى قياسي بالبيانات المأخوذة من قياسات العلامة. تم استخدام المعادلة التي تم إنشاؤها بواسطة هذا الرسم البياني لتقريب الحجم الجزيئي للعصابات من عينات الحمض النووي الست. (DeCicco-Skinner ، 2019).

نتائج

الشكل 1: عرض الجل على قمة ترانسلومينيتور الأشعة فوق البنفسجية بجوار مسطرة متري. احتوى المسار 1 على العلامة وأنتج 7 نطاقات مرئية ، الممر 2 يحتوي على E (DNA للمريض بدون طفرة ∆F508 ، مقطوع باستخدام EcoRI) ، الممر 3 يحتوي على + E (DNA للمريض مع طفرة ∆F508 ، مقطوع باستخدام EcoRI) ، الممر 4 يحتوي على JE (قطع DNA Jeff باستخدام EcoRI) ، الممر 5 يحتوي على -H (الحمض النووي للمريض بدون طفرة ∆F508 ، مقطوعًا بـ HindIII) ، الممر 6 يحتوي على + H (DNA للمريض مع ∆F508 طفرة ، مقطوعة باستخدام HindIII) ، الممر 7 يحتوي على JH (قطع DNA Jeff مع HindIII). أنتجت كل من الممرات 2 و 3 و 4 حزمتين متطابقتين تقريبًا عبر الآبار الثلاثة. أنتج لين 5 أربع نطاقات. أنتج الممران 6 و 7 شريطين متطابقين تقريبًا.

تم قياس المسافة التي قطعتها العصابات على الجل من المسافة بين البئر وقاع الشريط. احتوت العلامة من الممر 1 على نطاقات من عدة أوزان جزيئية: سافر النطاق 12000 نقطة أساس سافر 21.5 ملم ، وانتقل نطاق 7000 نقطة أساس 26.5 ملم ، وانتقل نطاق 3000 نقطة أساس عند 29.2 ملم ، وانتقل نطاق 2500 نقطة أساس 34.4 ملم ، وانتقل نطاق 2000 نقطة أساس 37.9 ملم ملم ، تحرك النطاق 1800 نقطة أساس 40.5 ملم ، وانتقل نطاق 1500 نقطة أساس 44.1 ملم (الشكل 1). تم تحميل المسار 2 بالحمض النووي للمريض بدون طفرة ∆F508 التي تم قطعها باستخدام EcoRI ، وعرض الممر 2 نطاقتين: أحدهما سافر 28.1 مم والآخر سافر 35.2 مم (الشكل 1).تم تحميل المسار 3 بالحمض النووي للمريض بطفرة ∆F508 التي تم قطعها باستخدام EcoRI ، وكان للمسار 3 شريطين أيضًا: أحدهما سافر 27.8 ملم والآخر 36.1 ملم (الشكل 1). تم تحميل المسار 4 بحمض نووي جيف وتم قطعه باستخدام EcoRI ، كما كان للمسار 4 شريطين في نفس الموقع تقريبًا مثل البئرين السابقتين: شريط سافر 28.0 مم والآخر سافر 35.9 مم (الشكل 1). تم تحميل المسار 5 بالحمض النووي للمريض بدون طفرة ∆F508 التي تم قطعها باستخدام Hind III ، وكان للمسار 5 أربعة نطاقات تتحرك 27.8 مم و 35.8 مم و 42.3 مم و 44.1 مم (الشكل 1). تم تحميل المسار 6 بالحمض النووي للمريض بطفرة ∆F508 التي تم قطعها باستخدام HindIII ، وكان للمسار 6 شريطين يسافران 26.1 مم و 43.5 مم (الشكل 1). تم تحميل المسار 7 بحمض نووي جيف وتم قطعه باستخدام HindIII ، وكان للمسار 7 شريطين متشابهين جدًا مع الممر 6 ، ويتنقلان 26.0 مم و 43.5 مم (الشكل 1).

الشكل 2: عرض المنحنى القياسي لهضم تقييد طفرة CFTR F508. تم رسم سجل الوزن الجزيئي لكل نطاق محدد على المحور الصادي ، والمسافة بالمليمترات التي هاجر إليها كل نطاق من البئر التي تم تحميل العلامة فيها تم رسمها على المحور السيني. من هذه البيانات تم إضافة خط اتجاه خطي ، وتم حساب وعرض معادلة الخط الأفضل ملاءمة (y = -0.0391x + 4.8133) ، وتم حساب معامل التحديد وعرضه (R ^ 2 = 0.8987).

تم استخدام القياسات التي تم جمعها من الشكل 1 لإنشاء الرسم البياني للمنحنى القياسي في الشكل 2. أدت إضافة خط اتجاه خطي إلى إنتاج معادلة للخط الأفضل ملاءمة (y = -0.0391x + 4.8133) وأسفرت عن معامل تحديد 0.8987 . تم توصيل المسافة التي قطعها كل نطاق للعينات الست في هذه المعادلة ثم تم أخذ antilog لحساب حجم النطاق التقريبي.

الجدول 1: هضم تقييد طفرة CFTR ∆F508 بواسطة نتائج EcoRI و HindIII لـ Jeff ، المريض المصاب بطفرة CFTR -F508 ، والمريض بدون طفرة CFTR -F508.
الجدول 1: عرض الوزن الجزيئي المتوقع مقابل المرصود للعلامة وستة عينات من الحمض النووي مقطوعة باستخدام EcoRI أو HindIII. تم حساب الوزن الجزيئي لكل عينة من معادلة المنحنى القياسية (y = -0.0391x + 4.8133). تحتوي الممرات 2 و 3 و 4 على نطاقات ذات أحجام متشابهة جدًا وكانت القيم قريبة مما كان متوقعًا. يحتوي المسار 5 على نطاقات أكثر مما كان متوقعًا. كان للمسارين 6 و 7 نطاقات متشابهة جدًا وقريبة مما كان متوقعًا.

من المعادلة في الشكل 2 ، تم حساب أحجام النطاق المرصودة لعينات DNA الست وتم تسجيلها في الجدول 1. كما تم حساب أحجام النطاق الملحوظة للعلامة بحيث يمكن تحديد مقدار الخطأ كميًا. يوضح الجدول 1 أن الوزن الجزيئي المحسوب يختلف عن الوزن الجزيئي المتوقع ، ويكون هذا الاختلاف أكثر وضوحًا عندما يحتوي النطاق على أزواج أساسية أكثر. هذا يعني أن حجم النطاق الملحوظ لعينات الحمض النووي يجب ألا يتطابق تمامًا مع حجم النطاق المتوقع وأن القيمة ستكون أكثر دقة للنطاقات التي تحتوي على أزواج قاعدة أقل. بالنسبة لعينات الحمض النووي الثلاث المقطوعة باستخدام EcoRI (المرضى الذين لديهم (+ E) وبدون (-E) طفرة CFTR -F508 ، و Jeff (JE)) كان من المتوقع أن يقوم EcoRI بقطع شريط الحمض النووي مرتين لإنتاج ثلاث نطاقات: نطاقيان كانا 2150 نقطة أساس ونطاق واحد كان 4700 نقطة أساس. ومع ذلك ، كشفت مراقبة هذه العينات عن شريطين فقط. قام Patient -E بحساب نطاقات تبلغ 2500 نقطة أساس و 5183 نقطة أساس للمريض + E وقد حسبت نطاقات قدرها 2522 نقطة أساس و 5325 نقطة أساس للمريض JE وقد حسبت نطاقات قدرها 2568 نقطة أساس و 5229 نقطة أساس. هذه القيم قريبة جدًا ومتطابقة بشكل أساسي. كان من المتوقع أن يتم قطع المريض الذي لا يمتلك طفرة CFTR ΔF508 (-H) الذي تم قطع الحمض النووي الخاص به باستخدام HindIII مرتين لإنتاج ثلاثة نطاقات: 1500 نقطة أساس ، و 5700 نقطة أساس ، و 1800 نقطة أساس. ومع ذلك ، لوحظت أربعة نطاقات تشير إلى قطع الحمض النووي في أربعة أماكن. أنتج هذا نطاقات تم حسابها على أنها 1،227 نقطة أساس و 1،443 نقطة أساس و 2،591 نقطة أساس و 5،325 نقطة أساس. كان من المتوقع قطع المريض المصاب بطفرة CFTR ΔF508 (+ H) وجيف (JH) الذي تم قطع الحمض النووي الخاص به باستخدام HindIII مرة واحدة لإنتاج شريطين يبلغان 7200 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس. في الواقع ، تم قطع هاتين العينتين مرة واحدة ، في مريض + H كانت أحجام النطاق 6206 نقطة أساس و 1،296 نقطة أساس ، بينما في مريض JH كانت أحجام النطاق 6262 نقطة أساس و 1،296 نقطة أساس. هذه القيم متشابهة جدًا بحيث يمكن اعتبار أحجام النطاق متطابقة.

مناقشة

مع وجود أكثر من 2000 تعدد الأشكال لطفرات التليف الكيسي ، هناك بالتأكيد الكثير مما يمكن أن يحدث بشكل خاطئ بالنسبة لجين CFTR. في مثال طفرة CFTR -F508 ، يتم حذف حمض أميني واحد (فينيل ألانين) في الموضع 508 من الجين (Suaud et al. 2011). يعد حذف الفينيل ألانين في هذا الموضع شديدًا لدرجة أن بروتين CFTR يصبح غير فعال ، مما يؤدي إلى فرط إنتاج المخاط عبر الأسطح الظهارية (Kreda et al. 2012). تم التعرف على بروتين CFTR من خلال العديد من التجارب على أنه قناة أنيون نشطة تعتمد على الفسفرة (cAMP) والتي تنقل الأملاح (أيونات الكلوريد وأيونات البيكربونات) والأنيونات الأخرى عبر الخلايا الظهارية (Gentzsch ، 2018). تنقل بروتينات CFTR الصحية التي تعمل بكامل طاقتها هذه الأملاح عبر غشاء البلازما للخلايا الظهارية التي تبطن الرئتين والأعضاء الأخرى لإزالة المخاط الزائد عن طريق ترطيب السطح (Gentzch، 2018 Suaud et al. 2011). في حالة طفرة CFTR ∆F508 ، يتم إنتاج بروتين CFTR غير طبيعي لا يمكن أن ينثني بشكل صحيح لأن قسم CFTR الذي يتفاعل مع ATP لربط النيوكليوتيدات يسمى مجال ربط النوكليوتيدات (NBDI) والحلقة الرابعة الخلوية ضمن قسم آخر من CFTR الذي يثبت بروتينًا آخر في غشاء البلازما (MSD 2) يشكل روابط هيدروجينية مع حمض الأرجينين الأميني في كودون 1070 (كتنج ، 2015). تكتشف الخلية بروتينات CFTR المشوهة وتحلل معظمها داخل الشبكة الإندوبلازمية (Suaud et al. 2011). هذا يعني أن القليل جدًا من بروتين CFTR يصل إلى سطح الخلايا الظهارية أو لا يصل إليه أي شيء ، وبالتالي لا يمكن نقل أيونات الكلوريد والبيكربونات عبر غشاء البلازما (Suaud et al. 2011). نظرًا لأنه لا يمكن نقل أيونات الملح عبر غشاء البلازما ، فإن الأملاح تكون بتركيز أعلى على الجانب القاعدي من الخلايا الظهارية ، وهذا يسحب الماء بعيدًا عن السطح القمي ويؤدي إلى جفاف الرئة والجهاز الهضمي والبنكرياس (Gentzsch) ، 2018). في حالة عدم وجود ماء على الأسطح القمية لهذه الأعضاء ، لا يمكن إزالة المخاط الزائد ، ثم يؤدي المخاط الكثيف اللزج إلى حدوث انسداد ويؤدي إلى أمراض الجهاز التنفسي والالتهابات التي تؤدي في النهاية إلى الوفاة لدى المرضى (Gentzsch، 2018).

اختبرت هذه التجربة جيف البالغ من العمر 3 سنوات من أجل التليف الكيسي الناجم عن طفرة CFTR ∆F508 باستخدام تحليل RFLP مع نوكليازات تقييدية EcoRI و HindIII. تمت مقارنة نتائجه مع عنصر تحكم إيجابي (مريض مصاب بطفرة ∆F508) وضبط سلبي (مريض بدون طفرة ∆F508) تم تضمينهما أيضًا في تحليل RFLP باستخدام EcoRI و HindIII بحيث يمكن مقارنة نتائج Jeff بشيء ما. تم تصور نتائج تحليل RFLP باستخدام الرحلان الكهربائي على هلام الاغاروز (الشكل 1) ثم تم إنتاج معادلة من منحنى قياسي (الشكل 2) والذي تم استخدامه لحساب الأحجام الجزيئية (الجدول 1) لشظايا الحمض النووي التي قيد التقييد إنتاج نوكليازات داخلية. يعد هذا التشخيص المبكر أمرًا بالغ الأهمية لضمان حصول جيف على الرعاية التي يحتاجها حتى يتمكن من العيش حياة طويلة وخالية من الألم. علاوة على ذلك ، يعد تحليل RFLP طريقة أكثر موثوقية لاختبار الاضطرابات الصبغية المتنحية مقارنة بالاختبارات الجينية المباشرة للمستهلكين مثل 23andMe TM نظرًا لوجود مساحة أقل لسوء الفهم. تقيس شركات مثل 23andMe TM التباين الجيني من خلال مقارنة المعلومات الجينية للعميل بقاعدة بيانات الطفرات الخاصة بهم ، ويمكن لقاعدة البيانات هذه اكتشاف 715000 طفرة نكليوتيدية واحدة (Lu et al. 2017). هذا يعني أن قاعدة البيانات ستكتشف حذف ثلاثي النوكليوتيدات الذي يحدث عند حذف فينيل ألانين في الموضع 508 من جين CFTR. يختلف RFLP عن هذا لأنه لا يقارن التسلسل الجيني ، بل يستخدم نوكليازات مقيدة لتقطيع الحمض النووي إلى أجزاء في تسلسل التعرف ، في هذه الحالة ، يمكن تشخيص التليف الكيسي إذا تم قطع الحمض النووي للمريض في نفس المواقع مثل مراقبة إيجابية. تتمثل إحدى ميزات الاختبارات الجينية مثل تلك التي يوفرها 23andMeTM في أنه يمكنهم أيضًا معرفة ما إذا كان المريض حاملًا لطفرة متنحية ، وهذا شيء لا يمكن لتحليل RFLP القيام به (Lu et al. 2017). ومع ذلك ، فإن أحد أكبر المخاوف بشأن الاختبار الجيني المباشر للمستهلك هو أن معظم الناس لا يعرفون كيفية تفسير النتائج وقد يتخذون سلوكيات جذرية نتيجة عدم تلقي الاستشارة الوراثية (Pare ، 2012) ، وهذا سبب آخر لماذا من المهم اختبار التليف الكيسي باستخدام RFLP بدلاً من استخدام 23andMeTM.

تم الافتراض بأن جيف مصاب بالتليف الكيسي الناجم عن طفرة CFTR -F508 لأنه يظهر العديد من الأعراض المرتبطة بالمرض. سيكون هذا ممكنًا إذا كان كلا والديه حاملين لطفرة CFTR -F508 لأن الناقلين ليس لديهم أعراض لأن المرض يحدث فقط عندما يتم تحور كلا الأليلين في هذا الموقع من جين CFTR. كان من المتوقع أنه عندما يتم قطع الحمض النووي لجيف بواسطة EcoRI مرتين لإنتاج ثلاثة نطاقات بأحجام 2150 نقطة أساس و 2150 نقطة أساس و 4700 نقطة أساس وأن حمضه النووي سيقطع بواسطة HindIII بمجرد إنتاج شريطين بأحجام 7200 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس. . أيضًا ، سيتم قطع عينات EcoRI (المرضى الذين يعانون من طفرة ∆F508 وبدونها) بواسطة EcoRI مرتين بطريقة مماثلة للحمض النووي الخاص بجيف الذي ينتج ثلاثة نطاقات بأحجام 2150 نقطة أساس و 2150 نقطة أساس و 4700 نقطة أساس. بمعنى أن الحمض النووي لجيف والحمض النووي للمرضى الذين يعانون من طفرة ∆F508 وبدونها يجب أن يكون لديهم نطاقات متطابقة في الحجم عند قطعها بواسطة EcoRI. بالإضافة إلى ذلك ، سيتم أيضًا قطع عنصر التحكم الإيجابي (المريض المصاب بطفرة ∆F508) بواسطة HindIII مرة واحدة ، على غرار DNA Jeff الذي ينتج شريطين بأحجام 7200 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس. هذا على عكس التحكم السلبي (المريض بدون طفرة ∆F508) الذي تم توقع قطع الحمض النووي الخاص به مرتين ، مما ينتج ثلاثة نطاقات بأحجام 5700 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس و 1500 نقطة أساس. إذا كانت الفرضية صحيحة ، فإن النطاقات التي تظهر عند قطع عينة DNA الخاصة بـ Jeff باستخدام HindIII ستكون متطابقة في الوزن مع المريض المصاب بطفرة ∆F508 الذي تم قطع الحمض النووي أيضًا باستخدام HindIII ، ويجب أن تكون كلتا العينات مختلفة عما كانت عليه عند HindIII تم استخدامه مع المريض الذي لا يعاني من طفرة ∆F508.

كان الغرض من تضمين عنصر التحكم الإيجابي هو أنه يمكن تصور نتائج هضم التقييد الهندسي للفرد المصاب بطفرة ∆F508 ثم مقارنتها بكيفية قطع الحمض النووي لجيف ، إذا تم قطعها بنفس الطريقة ، فهذا يعني أنه أيضًا لديه نفس الشيء تعدد الأشكال CFTR. إذا تم قطع الحمض النووي الخاص به بشكل مختلف عن عنصر التحكم الإيجابي ، فهذا يعني أنه ليس لديه طفرة ∆F508. كان الغرض من تضمين عنصر التحكم السلبي هو أنه يمكن تصور نتائج هضم التقييد الهندسي للفرد بدون طفرة ∆F508 ثم مقارنتها بكيفية قطع الحمض النووي لجيف. إذا تم قطع عنصر التحكم السلبي بشكل مختلف عن كل من عنصر التحكم الإيجابي وحمض جيف ، فهذا يعني أنه ليس لديه طفرة ∆F508. ومع ذلك ، إذا لم تتطابق نتائج Jeff مع النتائج الإيجابية أو السلبية ، فهذا يعني أن نتائج التجربة غير صالحة. أيضًا ، إذا كانت الضوابط الإيجابية والسلبية متطابقة عند القطع بواسطة HindIII ، فستكون النتائج التجريبية غير صالحة. علاوة على ذلك ، على الرغم من أن نتائج تحليل RFLP ستكون هي نفسها بالنسبة لجيف وعناصر التحكم عند القطع باستخدام EcoRI ، فقد تم تضمين EcoRI لأنه إذا لم ينتج عن ذلك نتائج متطابقة لجميع العينات ، فإن نتائج التجربة ستكون لها ليتم استدعاؤهم.

تم نقل العلامة التي تم تحميلها في الممر 1 بنجاح عبر الجل (الشكل 1) وأنتجت نطاقات عند 12000 نقطة أساس و 7000 نقطة أساس و 3000 نقطة أساس و 2500 نقطة أساس و 2000 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس و 1500 نقطة أساس كما كان متوقعًا (الجدول 1). تم قياس المسافة التي تم ترحيلها من كل نطاق وتم رسم هذه البيانات مقابل سجل كل وزن جزيئي لإنتاج منحنى قياسي أسفر عن معامل تحديد 0.8987 والخط الأنسب للمعادلة y = -0.0391x +4.8133 (الشكل 2) ). تم توصيل المسافة التي قطعها كل نطاق للعينات الست في هذه المعادلة ثم تم أخذ antilog لحساب حجم النطاق التقريبي. تم استخدام هذه المعادلة لحساب حجم العلامات أيضًا لتحديد مقدار الخطأ الرياضي الموجود في هذا النموذج. يوضح الجدول 1 أن الوزن الجزيئي المحسوب يختلف قليلاً عن الوزن الجزيئي الفعلي ، ويتم تضخيم هذا التأثير عندما يحتوي الحمض النووي على أزواج قاعدية أكثر. وهذا يعني أن نتائج عينات الحمض النووي الأخرى يمكن أن يكون لها أيضًا بعض الاختلاف في الوزن الجزيئي المتوقع مقابل الوزن الجزيئي المرصود للنطاقات ، وحتى مع مثل هذا الاختلاف ، ستظل النتائج صالحة. تم استخدام هذه المعادلة أيضًا لحساب الأحجام الجزيئية للعصابات الموضحة على الجل في الشكل 1. إذا كانت الفرضية صحيحة ، فسيتم قطع كل من DNA جيف والمريض المصاب بطفرة ∆F508 والمريض بدون طفرة ∆F508 مرتين بواسطة EcoRI لإنتاج حزم ذات أوزان جزيئية تبلغ 2150 نقطة أساس و 2150 نقطة أساس و 4700 نقطة أساس. نظرًا لأن اثنين من هذه النطاقات لها نفس الوزن الجزيئي ، فسيظهر شريطين فقط على الهلام: 2150 نقطة أساس و 4700 نقطة أساس. أظهرت مراقبة عينات الحمض النووي هذه أن لديهم جميعًا نطاقين (الشكل 1 - الممرات 2،3،4) وكشفت الحسابات من معادلة المنحنى القياسية أن الوزن الجزيئي لهذين النطاقين في العينات الثلاث كان متشابهًا جدًا: في JE تم حساب أحجام شظايا الحمض النووي على أنها 2568 نقطة أساس و 5229 نقطة أساس في - تم حساب أحجام النطاقات على أنها 2500 نقطة أساس و 5183 نقطة أساس في + E وتم حساب أحجام النطاقات على أنها 2522 نقطة أساس و 5325 نقطة أساس (الجدول 1). نظرًا لأن EcoRI قطع جميع العينات في نفس المكان تقريبًا ، فيمكن استنتاج أن تحليل RFLP يعمل بشكل صحيح وأن النتائج الأخرى للتجربة كان يجب أن تعمل أيضًا بشكل صحيح. هذا يعني أيضًا أن جين CFTR كان موجودًا بالفعل في جميع عينات الحمض النووي لأنه إذا كانت أي من العينات تفتقر إلى جين CFTR ، فلن تكون العينات قد أنتجت أجزاء متطابقة من الحمض النووي. ومع ذلك ، لا يمكن أن توفر هذه النتائج وحدها تشخيصًا للتليف الكيسي لأن إنزيم EcoRI يقطع التحكم الإيجابي والسلبي بنفس الطريقة. إذا كان EcoRI والتحكم الإيجابي هما الأشياء الوحيدة المستخدمة لتشخيص Jeff ، لكان من الممكن قبول الفرضية لأن جين CFTR مقطوع إلى أجزاء الحمض النووي نفسها من أجل التحكم الإيجابي وجيف. من المفارقات ، إذا كان EcoRI والتحكم السلبي هما الأشياء الوحيدة المستخدمة لتشخيص Jeff ، فسيتم رفض الفرضية لأن جين CFTR مقطوع إلى نفس أجزاء الحمض النووي للتحكم السلبي وجيف. من الواضح أن هذا يمثل مشكلة لأن الفرضية لا يمكن قبولها ورفضها على حد سواء ، لذلك ، من أجل التشخيص الدقيق لجيف بالتليف الكيسي ، يجب استخدام نوكلياز مقيد يقطع التحكم الإيجابي والسلبي بشكل مختلف ، ولهذا السبب تم استخدام HindIII أيضًا.

إذا كانت الفرضية صحيحة ، فسيتم قطع الحمض النووي لجيف والمريض (التحكم الإيجابي) المصاب بطفرة ∆F508 مرة واحدة بواسطة HindIII لإنتاج نطاقات ذات أوزان جزيئية تبلغ 7200 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس. أظهرت مراقبة عينات الحمض النووي هذه أنهما تم قطعهما مرة واحدة ولديهما شريحتان (الشكل 1 - الممران 6 و 7) وكشفت الحسابات من معادلة المنحنى القياسية أن الوزن الجزيئي لهذين النطاقين في كلتا العينات كان متشابهًا: في JH تم حساب أحجام النطاقات على أنها 6،262 نقطة أساس و 1،296 نقطة أساس وفي + H تم حساب أحجام النطاقات على أنها 6،206 نقطة أساس و 1،296 نقطة أساس (الجدول 1). نظرًا لأن HindIII قطع كل من DNA Jeff والحمض النووي للمريض الذي لديه طفرة ∆F508 ، فمن المحتمل أن يكون لدى Jeff أيضًا طفرة ∆F508 التي تسبب التليف الكيسي. للتأكد من صحة هذه النتائج ، يجب مقارنة هاتين العينتين بالتحكم السلبي - المريض بدون طفرة CFTR ∆F508. كشفت المراقبة أن الحمض النووي للمريض (-H) بدون طفرة ∆F508 تم قطعه ثلاث مرات بواسطة Hind III لإنتاج أربعة نطاقات (الشكل 1) وتم حساب هذه النطاقات بحيث تحتوي على أوزان جزيئية تبلغ 1،227 نقطة أساس ، 1،443 نقطة أساس ، 2،591 نقطة أساس. و 5،325 نقطة أساس (الجدول 1). من الواضح أن هذه النتائج لا تتطابق مع التنبؤ الذي ذكر أن HindIII سيتم قطع الحمض النووي لهذا المريض مرتين لإنتاج ثلاثة نطاقات بأوزان جزيئية تبلغ 5700 نقطة أساس و 1800 نقطة أساس و 1500 نقطة أساس. ومع ذلك ، يبدو أن العصابات العلوية تتماشى مع العصابات من العينات المقطوعة باستخدام EcoRI. مما يعني أن هذه العينة كانت على الأرجح ملوثة ببعض مادة EcoRI. يتعارض هذا مع تحليل النتائج ، ومع ذلك ، لا يزال من الممكن استخلاص بعض الاستنتاجات بسبب وضع هذه النطاقات بالنسبة لعينات HindIII الأخرى. أولاً ، النتائج مختلفة بدرجة كافية بحيث يمكن استنتاج أن JH و + H متطابقان بينما -H كان مختلفًا. ثانيًا ، تحتوي العينة -H على نطاق أدنى من النطاق الأدنى في + H و JH (الشكل 1 - الممرات 5 ، 6 ، 7). سيكون هذا منطقيًا إذا كانت الفرضية صحيحة لأن -H يجب أن يكون أصغر نطاق لها هو 1500 نقطة أساس و + H / JH يجب أن يكون لها أصغر نطاقاتها عند 1800 BP (الجدول 1). ثالثًا ، الطريقة الوحيدة التي يمكن بها قطع عينة DNA الخاصة بجيف بواسطة HindIII عند 7200 نقطة أساس ستكون إذا كان لديه طفرة CFTR -F508 (الشكل 1 والجدول 1). لذلك ، تم قبول الفرضية ، حيث يعاني جيف من تليف كيسي ناجم عن طفرة CFTR ∆F508.

إذا تم حذف التحكم الإيجابي ، فسيكون التشخيص صعبًا للغاية ولا يمكن تأكيد الفرضية ، لأن الحجم الجزيئي المحسوب لشظايا DNA Jeff يختلف عن الأحجام الجزيئية المتوقعة. لاحظ أن الحجم الجزيئي المحسوب لـ يختلف أيضًا عن الحجم المتوقع لشظايا الحمض النووي للتحكم الإيجابي وأن الحجم الجزيئي لهذه الأجزاء و Jeff's كان متطابقًا تقريبًا عند القطع بواسطة HindIII كان العامل النهائي الذي أدى إلى قبول الفرضية. إذا تم حذف عنصر التحكم السلبي ، فستظل الفرضية مقبولة لأن DNA Jeff كان سيظل مطابقًا للتحكم الإيجابي. ومع ذلك ، في السيناريو البديل حيث لم يكن مصابًا بالتليف الكيسي ، فإن فقدان التحكم السلبي يعني أنه سيكون من المستحيل تأكيد أن جيف لم يكن مصابًا بالتليف الكيسي لأن أجزاء الحمض النووي الخاصة به لن تتطابق مع أي شيء عند قطعه بواسطة HindIII.

استخدمت هذه التجربة فقط جزء جينوم جيف الذي يتضمن جين CFTR. إذا استخدمنا الجينوم الكامل لمريض مصاب بالطفرة أو بدونها ، فإن EcoRI و HindIII سيكونان قد حددا العديد من مواقع التعرف (GAATTC و AAGCTT على التوالي) ومجموعات الفوسفات المشقوق في هذه المواقع ، وهذا من شأنه أن ينتج العديد من أجزاء الحمض النووي. في الواقع ، هناك الكثير من أجزاء الحمض النووي التي سيكون من الصعب معرفة ما كنت تبحث عنه ، بدلاً من رؤية بعض النطاقات على الشكل 1 بدلاً من ذلك ، قد يكون هناك مئات العصابات. هذا سيجعل من المستحيل تحديد ما إذا كان جيف لديه طفرة في CFTR أم لا. سيحتاج بروتوكول المختبر إلى تعديل إذا تم استخدام جينومات كاملة بحيث يمكن فحص منطقة معينة من الحمض النووي.إحدى الطرق لتحقيق ذلك هي من خلال النشاف الجنوبي: حيث يتم نقل شظايا الحمض النووي من الرحلان الكهربائي إلى غشاء عن طريق النقل الشعري لأعلى ثم تجميدها ، مما يسمح بتحديد العصابات المطابقة لتسلسل CFTR بمسبار (براون ، 2001).

في الختام ، هذه النتائج مهمة لأنها تكشف أن HindIII هو نوكلياز داخلي مفيد للغاية لتشخيص التليف الكيسي وتشخيص التليف الكيسي لجيف (الناجم عن طفرة CFTR ∆F508) يعني أنه يمكنه تلقي العلاج الشخصي ، lumacaftor ، على سبيل المثال ، هو دواء قد يفيد جيف من خلال منع تدهور بروتينات CFTR المشوهة التي تسببها طفرة CFTR -F508 ، وهذا يساعد البروتينات على الوصول إلى سطح الخلية الظهارية القمية بحيث يمكن استعادة هذه الوظيفة جزئيًا (Kreda et al. 2012). يمكن تحسين هذه التجربة بمضاعفة عدد العينات للتأكد من أن العينات لم تتلوث بواسطة نوكلياز تقييد غير صحيح وباستخدام خط اتجاه مختلف ينتج معادلة تحسب الأحجام الجزيئية بدقة محسنة. يمكن أن تستكشف الدراسات المستقبلية تطبيق نوكليازات تقييدية أخرى مثل BamHI و EcoRII و Hand HaeIII لترى كيف يقطعون CFTR في الضوابط الإيجابية والسلبية.

مراجع

براون ، تي (2001) النشاف الجنوبي. مناعة بروتوكولي بالعملة 10 (6 أ).

كوني ، أل ، بي بي. ماكراي جونيور ، وبي. Sinn (2018) العلاج الجيني للتليف الكيسي: النظر إلى الوراء والتطلع إلى الأمام. الجينات (بازل) 9 (11).

كاتينج ، جي آر (2015) جينات التليف الكيسي: من الفهم الجزيئي إلى التطبيق السريري. نات ريف جينيه 16 (1): 45-56.


أسئلة مهمة لـ CBSE Class 12 مبادئ علم الأحياء الخاصة بالتكنولوجيا الحيوية وأدوات تكنولوجيا الحمض النووي لإعادة التركيب

1. التكنولوجيا الحيوية يمكن تعريفها على أنها استخدام الكائنات الحية الدقيقة أو النباتات أو الخلايا الحيوانية أو مكوناتها لإنتاج منتجات وعمليات مفيدة للإنسان. وفقًا للاتحاد الأوروبي للتكنولوجيا الحيوية (EFB) ، فإن التكنولوجيا الحيوية هي دمج العلوم الطبيعية والكائنات الحية والخلايا وأجزاء منها والنظائر الجزيئية للمنتجات والخدمات. صاغ كارل إريكي مصطلح "التكنولوجيا الحيوية" في عام 1919.
2- تستند مبادئ التكنولوجيا الأحيائية إلى مفهوم التقنيات التالية:
(ط) الهندسة الوراثية هي تقنية لتغيير كيمياء المادة الوراثية (DNA / RNA) ، لإدخالها في كائنات أخرى وبالتالي تغيير النمط الظاهري للكائن الحي المضيف.
(2) الصيانة الكافية للظروف المعقمة لدعم نمو الميكروبات / الخلايا حقيقية النواة المطلوبة فقط بكميات كبيرة لتصنيع منتجات التكنولوجيا الحيوية مثل المضادات الحيوية واللقاحات والإنزيمات ، إلخ.

3 - تشمل تقنيات الهندسة الوراثية ما يلي:

  • إنشاء الحمض النووي معاد التركيب من خلال الجمع بين الجينات المرغوبة.
  • نقل الجينات.
  • صيانة الحمض النووي في استنساخ المضيف والجينات.
  • يمكن تلخيص الخطوات الأساسية في الهندسة الوراثية على النحو التالي:
  • تحديد الحمض النووي مع الجينات المرغوبة.
  • إدخال الحمض النووي المحدد في المضيف.
  • صيانة الحمض النووي المُدخل في المضيف ونقل الحمض النووي إلى نسله.

4. بناء أول حمض نووي اصطناعي مؤتلف
(ط) تم تحقيق ذلك من خلال ربط الجين المشفر لمقاومة المضادات الحيوية مع مواطن بلازميد (دنا دائري خارج الصبغية بشكل مستقل) من السالمونيلا تيفيموريوم.
(ثانيا) ستانلي كوهين و هربرت بوير أنجز هذا في عام 1972.
(3) قاموا بعزل الجين المقاوم للمضادات الحيوية عن طريق قطع قطعة من الحمض النووي من البلازميد.
(4) تم قطع الحمض النووي في مواقع محددة بواسطة مقص جزيئي، بمعنى آخر. أنزيمات التقييد.
(5) تم بعد ذلك ربط القطعة المقطوعة من الحمض النووي بالحمض النووي البلازميدي بحمض DNA الإنزيم يجاز. يعمل DNA البلازميد ثلاثة أبعاد لنقل قطعة الحمض النووي المرتبطة بها.
(6) عندما يتم نقل هذا الحمض النووي إلى القولونية ، يمكن أن يتكاثر باستخدام إنزيم بوليميريز الحمض النووي للمضيف الجديد ويصنع نسخًا متعددة.
(7) هذه القدرة على مضاعفة نسخ الجينات المقاومة للمضادات الحيوية في ه. تم استدعاء القولونية استنساخ الجين المقاوم للمضادات الحيوية في الإشريكية القولونية.

5. أدوات تكنولوجيا الحمض النووي المؤتلف هي كما يلي:
(ط) إنزيمات التقييد (2) إنزيمات البوليميراز
(3) Ligases (4) ناقلات
(5) الكائن الحي المضيف المختص.

6. تستخدم إنزيمات التقييد أو "المقص الجزيئي" لقطع الحمض النووي.
(ط) تم عزل إنزيمين من الإشريكية القولونية المسئولة عن تقييد نمو العاثيات في عام 1963 ، أحدهما أضاف مجموعة الميثيل إلى الحمض النووي والآخر قطع الحمض النووي إلى شرائح. كان يسمى لاحقًا نوكلياز تقييد.
(2) تم عزل أول نوكلياز هند الثاني تقييد بواسطة سميث ويلكوكس وكيلي (1968). وجدوا أنه دائمًا ما يقطع جزيئات الحمض النووي في نقطة معينة من خلال التعرف على تسلسل محدد من ستة أزواج أساسية تعرف باسم تسلسل التعرف.
(3) إلى جانب Hind II ، تم الآن عزل أكثر من 900 إنزيم تقييد ، من أكثر من 230 سلالة من البكتيريا ، كل منها يتعرف على تسلسلات التعرف المختلفة.
(4) تسمية إنزيمات التقييد
(أ) الحرف الأول مشتق من اسم الجنس والحرفين التاليين من اسم النوع للخلية بدائية النواة التي تُستخرج منها الإنزيمات.
(ب) توضح الأرقام الرومانية بعد الاسم الترتيب الذي تم به عزل الإنزيمات من السلالة البكتيرية.
على سبيل المثال ، يأتي Eco RI من Escherichia coli RY13 و Eco RII يأتي من E. coli R 245 ، إلخ.
(5) تنتمي إنزيمات التقييد إلى فئة من الإنزيمات تسمى نوكلياز.
نوكليزهي نوعان:
نوكليازات خارجية يزيلون النيوكليوتيدات من النهايات.
نوكلياز يقطعون في مواقع محددة داخل الحمض النووي.
(أ) يتعرف كل نوكلياز داخلي على محدد تسلسل النوكليوتيدات المتناوبق في الحمض النووي.
(ب) باليندروم في الحمض النووي هو. تسلسل الأزواج الأساسية التي تقرأ نفسها على الخيوط عندما يظل اتجاه القراءة كما هو.
على سبيل المثال ، تقرأ التسلسلات التالية نفس الشيء على الخيطين في اتجاه 5 & # 8242 & # 8211 & gt 3 & # 8242 بالإضافة إلى اتجاه 3 & # 8242 & # 8211 & gt 5 & # 8242.
5 & ​​# 8242 - GAATTC - 3 & # 8242
3 & # 8242 - CTTAAG - 5 & # 8242
(6) آلية عمل إنزيمات التقييد
(أ) تقوم إنزيمات التقييد بقطع شريط الحمض النووي بعيدًا قليلاً عن مركز المواقع المتناظرة ، ولكن بين نفس القاعدتين على الخيوط المقابلة.
(ب) هذا يترك أجزاء واحدة تقطعت بهم السبل في النهايات.
(ج) هناك امتدادات متدلية تسمى النهايات اللاصقة على كل خيوط كما هو موضح في الشكل أعلاه. تم تسميتها بذلك ، لأنها تشكل روابط هيدروجينية مع نظيراتها المقطوعة التكميلية.
(د) تسهل لزوجة الأطراف عمل إنزيم DNA ligase.
(هـ) تُستخدم نوكليازات تقييدية في الهندسة الوراثية لتكوين جزيئات مؤتلفة من الدنا ، والتي تتكون من دنا من مصادر / جينومات مختلفة.
(و) تكون هذه الأطراف اللاصقة مكملة لبعضها البعض عند قطعها بنفس إنزيم التقييد ، وبالتالي يمكن ضمها معًا (من طرف إلى طرف) باستخدام روابط DNA.

7. فصل وعزل شظايا الحمض النووي
(ط) يؤدي قطع الحمض النووي عن طريق التقييد & # 8217 نوكليازات إلى أجزاء من الحمض النووي.
(2) تسمى التقنية التي تفصل أجزاء الحمض النووي بناءً على حجمها
هلام الكهربائي.
(3) شظايا الحمض النووي هي جزيئات سالبة الشحنة. يمكن فصلها عن طريق إجبارها على التحرك نحو القطب الموجب تحت مجال كهربائي من خلال وسط / مصفوفة.
(4) الوسيط الأكثر شيوعًا هو الاغاروز ، وهو بوليمر طبيعي مستخرج من الأعشاب البحرية.
(5) تنفصل شظايا الحمض النووي (تتحلل) وفقًا لحجمها من خلال تأثير الغربلة الذي يوفره هلام الاغاروز. كلما كان حجم الشظية أصغر ، كلما تحركت أبعد.
(6) لا يمكن تصور شظايا الحمض النووي المنفصلة إلا بعد تلطيخ الحمض النووي بمركب يعرف باسم بروميد الإيثيديوم متبوعًا بالتعرض للأشعة فوق البنفسجية.
(7) يمكن رؤية شظايا الحمض النووي على أنها عصابات برتقالية زاهية اللون. يتم قطع هذه الأشرطة المنفصلة من هلام الاغاروز واستخراجها من قطعة الهلام. هذا يسمي شطف.
(8) يمكن استخدام شظايا الحمض النووي المنقى في بناء الحمض النووي المؤتلف عن طريق ضمها مع نواقل الاستنساخ.

8. نواقل الاستنساخ هي جزيئات الحمض النووي التي يمكن أن تحمل قطعة دنا أجنبية إلى الخلية المضيفة.
(ط) يمكن أن تكون النواقل المستخدمة في تكنولوجيا الحمض النووي المؤتلف:
(أ) البلازميدات نسخ DNA دائري خارج الكروموسومات بشكل مستقل.
(ب) الجراثيم الفيروسات التي تصيب البكتيريا.
(ج) الكوسميدات نواقل هجينة مشتقة من البلازميدات التي تحتوي على موقع cos لـ X
(2) نسخة الرقم يمكن تعريفه على أنه عدد نسخ النواقل الموجودة في الخلية.
(3) الجراثيم عدد كبير لكل خلية ، لذا فإن عدد نسخها مرتفع أيضًا في الجينوم.
(رابعا) البلازميدات ليس لديك سوى نسخة واحدة أو نسختين لكل خلية.
(5) يمكن أن يختلف رقم النسخ من 1-100 أو أكثر من 100 نسخة لكل خلية.
(6) إذا تم ربط قطعة غريبة من الحمض النووي مع العاثية أو DNA البلازميد ، يمكن مضاعفة عددها مساوية لعدد نسخة البلازميد أو العاثية.
(7) الميزات المطلوبة لتسهيل الاستنساخ في Vector
(أ) أصل النسخ المتماثل (أوري) (ب) علامة اختيار
(ج) مواقع الاستنساخ (د) نواقل استنساخ الجينات في النباتات والحيوانات.
(أ) أصل التكرار (أوري) هو تسلسل من حيث يبدأ النسخ المتماثل.

  • يمكن لأي قطعة من الحمض النووي عند ربطها بهذا التسلسل أن تتكاثر داخل الخلايا المضيفة.
  • التسلسل مسؤول أيضًا عن التحكم في رقم نسخة الحمض النووي المرتبط.

(ب) علامة اختيار يساعد في تحديد والقضاء على غير المحولات والسماح بشكل انتقائي بنمو المحولات.

  • تحويل هي عملية يتم من خلالها إدخال قطعة من الحمض النووي في بكتيريا مضيفة.
  • تعد الجينات التي ترمز المقاومة للمضادات الحيوية مثل الأمبيسيلين أو الكلورامفينيكول أو التتراسيكلين أو الكاناميسين ، إلخ ، بعض العلامات المفيدة القابلة للاختيار من أجل القولونية.


متجه استنساخ بكتريا قولونية pBR322 يعرض مواقع تقييد (Hind III ، Eco Rl
Bam HI و Sal I و Pvu II و Pst I و Cla I) وجينات مقاومة أوري والمضادات الحيوية (amp R و tet R).
رموز rop للبروتينات المشاركة في تكرار البلازميد.

  • ربط الحمض النووي الغريب يتم إجراؤه في موقع تقييد موجود في أحد جينات مقاومة المضادات الحيوية. مثال على ذلك ربط الحمض النووي الأجنبي في موقع Bam HI لجين مقاومة التتراسيكلين في المتجه pBR322.
    & # 8211 & GT & GTتفقد البلازميدات المؤتلفة مقاومة التتراسيكلين بسبب إدخال الحمض النووي الغريب. ولكن ، لا يزال من الممكن اختياره من غير المؤتلف عن طريق طلاء المحولات على الأمبيسلين المحتوي على وسط.
    & # 8211 & GT & GT ثم يتم نقل المحولات التي تنمو على وسط يحتوي على الأمبيسلين على وسط يحتوي على التتراسيكلين.
    & # 8211 & GT & GTسوف تنمو المواد المؤتلفة في الأمبيسلين المحتوي على وسط ولكن ليس على الوسط الذي يحتوي على التتراسيكلين.
    & # 8211 & GT & GTسوف تنمو المواد غير المؤتلفة في الوسط الذي يحتوي على كلا المضادات الحيوية.
    في هذا المثال ، يساعد أحد الجينات المقاومة للمضادات الحيوية في اختيار المحولات بينما "يتم تعطيل الجين الآخر المقاوم للمضادات الحيوية بسبب إدخال" الحمض النووي الغريب ويساعد في اختيار المواد المؤتلفة.
  • اختيار المؤتلف بسبب تعطيل المضادات الحيوية هو إجراء مرهق ، لذلك يتم تطوير علامات بديلة قابلة للاختيار والتي تميز المؤتلفات عن غير المؤتلفة على أساس قدرتها على إنتاج اللون في وجود ركيزة كروموجينية.

& # 8211 & GT & GT في هذه الطريقة ، يتم إدخال الحمض النووي المؤتلف ضمن تسلسل ترميز إنزيم J3-galactosidase.
& # 8211 & GT & GT ينتج عن هذا تعطيل إنزيم P-galactosidase (تعطيل الإدراج).
& # 8211 & GT & GT تنتج المستعمرات البكتيرية التي لا تحتوي بلازميداتها على حشو ، لونًا أزرق ، لكن البعض الآخر لا ينتج أي لون ، عندما تنمو على ركيزة كروموجينية.
(ج) مواقع الاستنساخ لربط الحمض النووي الغريب بالناقل.

  • يتطلب المتجه عددًا قليلًا جدًا من مواقع التعرف على إنزيمات التقييد الشائعة الاستخدام أو مواقع فردية.
  • سيؤدي وجود أكثر من موقع تمييز واحد داخل الناقل إلى توليد شظايا متعددة تؤدي إلى مضاعفات في استنساخ الجينات.

(د) نواقل استنساخ الجينات في النباتات والحيوانات تستخدم في استنساخ الجينات في النباتات والحيوانات.
في النباتات ، يتم استخدام بلازميد (Ti) المحفز للورم في الأجرعية المورمة كناقل للاستنساخ.
& # 8211 & GT & GTالجراثيم الورمية هي أحد مسببات الأمراض في العديد من نباتات الديكوت.
& # 8211 & GT & GT يسلم قطعة من الحمض النووي المعروف باسم T-DNA في بلازميد Ti والذي يحول الخلايا النباتية الطبيعية إلى خلايا سرطانية لإنتاج المواد الكيميائية التي تتطلبها مسببات الأمراض. الخلايا الطبيعية في الخلايا السرطانية.

9. الكائن الحي المضيف المختصة (للتحول مع الحمض النووي المؤتلف) مطلوب لأن الحمض النووي هو جزيء ماء ، لا يمكن أن يمر عبر أغشية الخلايا ،
ومن ثم ، يجب أن تكون البكتيريا مؤهلة لقبول جزيئات الحمض النووي ،
(ط) الكفاءة هي قدرة الخلية على امتصاص الحمض النووي الغريب.
(2) طرق جعل الخلية مختصة هي كما يلي.
(أ) الطريقة الكيميائية في هذه الطريقة ، يتم معالجة الخلية بتركيز محدد من الكاتيون ثنائي التكافؤ مثل الكالسيوم لزيادة حجم المسام في جدار الخلية.
ثم يتم تحضين الخلايا مع الحمض النووي المؤتلف على الجليد ، متبوعًا بوضعها
لفترة وجيزة عند 42 درجة مئوية ثم إعادة وضعها على الجليد. وهذا ما يسمى بعلاج الصدمة الحرارية. هذا يمكّن البكتيريا من امتصاص الحمض النووي المؤتلف.
(ب) الطرق الفيزيائية في هذه الطريقة ، يتم حقن الحمض النووي المؤتلف مباشرة في نواة الخلية الحيوانية عن طريق طريقة الحقن المجهري.
في النباتات ، يتم قصف الخلايا بجسيمات دقيقة عالية السرعة من الذهب أو
التنغستن المغلف بالحمض النووي يسمى علم الأحياء أو طريقة بندقية الجينات.
(ج) نواقل مسببات الأمراض منزوعة السلاح عندما يُسمح بإصابة الخلية ، انقل الحمض النووي المؤتلف إلى المضيف.

أسئلة امتحانات السنوات السابقة

1 ضع علامة على الأسئلة
1. لماذا لا يمكن أن يصبح الحمض النووي الغريب جزءًا من كروموسوم في أي مكان على طوله وأن يتكاثر بشكل طبيعي؟
[كل الهند 2014]
الجواب.يلزم تكامل الحمض النووي الغريب ليصبح جزءًا من الكروموسوم. نظرًا لأن الحمض النووي نفسه لا يمكنه التكاثر والتكاثر ، بل يتطلب تسلسلًا محددًا لبدء النسخ المتماثل يسمى أصل النسخ المتماثل. لذلك ، يجب ربط الحمض النووي الغريب بالحمض النووي المضيف بمساعدة الإنزيمات وربطه بـ Ori ، حتى يكون جزءًا من الكروموسوم ويتكاثر بشكل طبيعي لإنتاج نسخه.

2. اذكر نوع الخلايا المضيفة المناسبة للمدافع الجينية لإدخال DNA غريب. [دلهي 2014]
الجواب. الخلايا المضيفة المناسبة لبنادق الجينات لإدخال DNA غريب هي خلايا نباتية.

3. اكتب المكونين لأول جزيء DNA مؤتلف اصطناعي أنشأه كوهين وبوير. [الخارجية 2014]
الجواب.المكونان لأول جزيء DNA مؤتلف اصطناعي تم إنشاؤه بواسطة Gohen و Boyer هما:
(ط) الجين المقاوم للمضادات الحيوية
(2) بلازميد السالمونيلا تيفيموريوم

4. قم بتسمية الخلايا المضيفة التي تستخدم فيها تقنية الحقن المجهري لإدخال DNA غريب. [الخارجية 2014]
الجواب. عادة ما يتم تنفيذ تقنية الحقن المجهري لإدخال دنا فضائي في الخلية الحيوانية ، أي مباشرة في النواة.

5. قم بتسمية المادة المستخدمة كمصفوفة في الرحلان الكهربائي للهلام واذكر دورها. [جميع الهند 2014C]
الجواب. المادة المستخدمة كمصفوفة في الرحلان الكهربائي للهلام هي الاغاروز.
يعمل جل الاغاروز هذا كمنخل لفصل شظايا الحمض النووي وفقًا لحجمها.

6. اكتب أي أربع طرق مستخدمة لإدخال قطعة دنا مرغوبة في خلية بكتيرية في تجارب التكنولوجيا المؤتلفة. [كل الهند 2013]
الجواب. طرق إدخال الحمض النووي المطلوب في الخلية البكتيرية هي:
(1) الحقن المجهري (2) نواقل مسببات الأمراض منزوعة السلاح
(3) جزء من الكاتيون ثنائي التكافؤ مثل الكالسيوم
(رابعا) بندقية ثنائية أو جينية

7. اذكر ما يحدث عندما يتم ربط جين غريب في موقع Sal I للبلازميد pBR322. [دلهي 2013 ج]
الجواب. إذا تم ربط جين غريب في موقع Sal I لجين مقاومة التتراسيكلين في ناقل pBR322 ، فإن البلازميد المؤتلف سيفقد مقاومته للتتراسيكلين.

8. أذكر استخدامات ناقلات الاستنساخ في التكنولوجيا الحيوية؟ [دلهي 2011]
الجواب. استخدامات ناقلات الاستنساخ في التكنولوجيا الحيوية.
(ط) يساعد في ربط الحمض النووي الأجنبي / الأجنبي مع الحمض النووي للمضيف & # 8217s.
(2) المساعدة في اختيار المؤتلف من غير المؤتلف.

9. يشير علماء التكنولوجيا الحيوية إلى Agrobacterium tumefaciens كمهندس وراثي طبيعي للنباتات. إعطاء أسباب لدعم البيان.
[HOTS All India 2011]
الجواب. تعد الأجرعية الورمية أحد مسببات الأمراض للعديد من نباتات الديكوت. يتم استخدامه كمهندس وراثي طبيعي لأنه قادر على توصيل جزء من الحمض النووي الخاص به (يسمى T-DNA) لتحويل الخلايا النباتية الطبيعية إلى خلايا سرطانية وتوجيه الخلايا السرطانية لتخليق المواد الكيميائية التي يحتاجها العامل الممرض.

10. لماذا من الضروري وجود علامة قابلة للتحديد في ناقلات الاستنساخ؟ [عموم الهند 2011]
الجواب.تساعد العلامة القابلة للتحديد في ناقلات الاستنساخ في تحديد واختيار المواد المؤتلفة والقضاء على المواد غير المؤتلفة.

11. لماذا تتحرك شظايا الحمض النووي باتجاه القطب الموجب أثناء الرحلان الكهربائي للهلام؟ [مشاركات ساخنة في دلهي 2011c]
الجواب. شظايا الحمض النووي عبارة عن جزيئات سالبة الشحنة ، وبالتالي تتحرك نحو القطب الموجب أثناء الرحلان الكهربائي للهلام.

12. في عام 1963 ، تم عزل اثنين من الإنزيمات المسؤولة عن الحد من نمو العاثية في E. coli. كيف تعمل الإنزيمات لتقييد نمو العاثية؟ [جميع الهند 2011 ج]
الجواب.اثنين من الإنزيمات المسؤولة عن تقييد نمو البكتيريا في القولونية هما: نوكليازات خارجية إضافة مجموعة الميثيل إلى الحمض النووي. نوكليازات داخلية تقطع الحمض النووي في نقاط محددة.

13. كيف يختلف عمل نوكلياز خارجي عن نوكلياز داخلي.
[كل الهند 2010]
الجواب.يزيل نوكلياز خارجي النيوكليوتيدات من نهايات الحمض النووي ، بينما يقطع نوكلياز داخلي الحمض النووي في مواضع محددة.

14. أذكر دور المقص الجزيئي في تقنية DNA المؤتلف. [عموم الهند 2009]
الجواب. يقطع المقص الجزيئي أو إنزيمات التقييد الحمض النووي في موقع معين ، مما يسمح باستخراج الجين المطلوب وإعجابه بالحمض النووي للمضيف.

15. اسم التقنية المستخدمة لفصل أجزاء الحمض النووي في المختبر. [دلهي 2008]
الجواب. يُستخدم الفصل الكهربائي للهلام لفصل أجزاء الحمض النووي في المختبر.

16. ما هو دور بروميد إيثيديوم أثناء الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز لشظايا الحمض النووي؟ [All India 2008C]
الجواب. يتم تصوير شظايا الحمض النووي المنفصلة أثناء الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز بعد تلطيخ الحمض النووي ببروميد الإيثيديوم ، في ضوء الأشعة فوق البنفسجية. يضفي هذا التلوين على الحمض النووي لونًا برتقاليًا ساطعًا.
2 أسئلة علامات
17. كيف يعمل نوكلياز التقييد؟ يشرح. [كل الهند 2014]
الجواب. تعمل نوكليازات التقييد عن طريق فحص طول تسلسل الحمض النووي ، ثم الارتباط بتسلسلات التعرف المحددة وقطع الخيوط في العمود الفقري لفوسفات السكر.
هذه النيوكليازات من نوعين اعتمادًا على طريقة عملها.
(أنا) نوكليازات تقييدية قطع متواليات في النهايات الطرفية للحمض النووي.
(ثانيا) نوكليازات تقييدية قطع بين قاعدتي تسلسل التعرف.

18.اكتب دور موقع أوري والتقييد في متجه الاستنساخ pBR322.
[دلهي 2014]
أو
كيف تسهل مواقع أوري والاستنساخ الاستنساخ في متجه؟
[All India 2008C]
الجواب.أوري هو تسلسل الحمض النووي من حيث يبدأ النسخ المتماثل. يجب ربط أي قطعة من الحمض النووي تحتاج إلى التكاثر في الخلية المضيفة بها.
تشير مواقع الاستنساخ إلى موقع / تسلسل الحمض النووي حيث يرتبط الحمض النووي الغريب.

19. اشرح بمساعدة مثال مناسب تسمية نوكلياز مقيد. [دلهي 2014]
الجواب. تسمية نوكلياز التقييد هي:
(ط) يأتي الحرف الأول من الاسم من الجنس والحرفين التاليين من أنواع الخلية بدائية النواة حيث يتم استخراج الإنزيمات.
(2) توضح الأرقام الرومانية التي تلي الاسم الترتيب الذي تم به عزل الإنزيمات من السلالة البكتيرية. على سبيل المثال ، Eco Rl مشتق من Escherichia coli RY 13 ، Hind II من Haemophilus influenzae Rd ، إلخ.

20. كيف تتشكل النهايات اللاصقة على خيط DNA؟ لماذا سموا هكذا؟ [دلهي 2014]
الجواب.تتشكل النهايات اللاصقة على الحمض النووي عن طريق عمل نوكليازات تقييد الإنزيمات. تقطع هذه الإنزيمات شريطة الحمض النووي بعيدًا قليلاً عن مركز التسلسل المتناظر بين نفس القاعدتين على كلا الجدولين. ينتج عن هذا امتدادات مفردة تقطعت بهم السبل على كل من الخيوط التكميلية في نهاياتها.
تسمى هذه الامتدادات المتدلية بالنهايات اللاصقة لأنها تشكل روابط هيدروجينية مع متواليات زوج القاعدة التكميلية.

21- كيف يتم استخدام التعطيل الإضافي للإنزيم كعلامة انتقائية للتمييز بين المواد المؤتلفة وغير المؤتلفة؟
[الخارجية 2014]
الجواب. يؤدي التنشيط الإدراجي لإنزيم J3-galactosidase ، أي عن طريق إدخال الجين المطلوب في منطقة ترميز الإنزيم ، إلى تعطيل (جين 3-galactosidase في المؤتلف. لا يستطيع المؤتلف على المضيفات المتحولة إنتاج أي لون عند نموه على ركيزة كروموجينية ، وبالتالي تعمل كعلامة انتقائية لتمييز المؤتلفات عن غير المؤتلفة.

22. اشرح تسلسل النوكليوتيدات المتناوبة بمساعدة مثال مناسب. [الخارجية 2014]
الجواب.تسلسل النوكليوتيدات المتناوب هو تسلسل أزواج القواعد في الحمض النووي التي تقرأ نفس الشيء على كل من الخيوط التكميلية للحمض النووي ، مع نفس اتجاه القراءة.
على سبيل المثال
5 & ​​# 8242-GAATTC-3 & # 8242
3 & # 8242-CTTAAG-5 & # 8242

23. لماذا يسمى المقص الجزيئي بذلك؟ اكتب استخدامها في التكنولوجيا الحيوية؟ [الخارجية 2014]
الجواب. يُطلق على المقص الجزيئي هذا الاسم لأنه يقطع الحمض النووي في تسلسلات محددة بين أزواج القواعد.
نظرًا لأن المقص الجزيئي الموجود على الإنزيمات المقيدة يقطع الحمض النووي في التسلسلات المرغوبة ويولد نهايات لزجة تسهل الانضمام إلى الجينوم المضيف أو الحمض النووي الناقل ، فإنها تلعب دورًا مهمًا في الهندسة الوراثية أو التكنولوجيا الحيوية. ذلك لأنه بمساعدة هذه الإنزيمات يمكننا قطع الجين المطلوب وإدخاله في نواقل للتعبير.

24. لماذا يعتبر جعل الخلايا مؤهلة أمراً ضرورياً لتجارب التكنولوجيا الحيوية؟ ضع قائمة بأي طريقتين يمكن من خلالها تحقيق ذلك.
[دلهي 2014C]
الجواب. نظرًا لأن جزيئات الحمض النووي هي ماء ، فإنها لا تستطيع المرور عبر أغشية الخلايا. لكي يتم دمج الحمض النووي المؤتلف في الجينوم الناقل أو المضيف ، من الضروري إدخال الحمض النووي في الخلية. لذلك ، فإن جعل الخلايا المضيفة مختصة أمر ضروري في تجارب التكنولوجيا الحيوية.
الطريقتان اللتان يمكن من خلالهما جعل الخلايا مؤهلة لأخذ الحمض النووي هما:
(أنا) العمل الكيميائي عن طريق زيادة تركيز الكاتيونات ثنائية التكافؤ ، الكالسيوم ، وبالتالي زيادة كفاءة دخول الحمض النووي من خلال المسام في جدار الخلية.
(2) علاج الصدمة الحرارية احتضان الخلايا مع الحمض النووي المؤتلف على الجليد ، متبوعًا بمعالجة موجزة للحرارة عند 42 درجة مئوية وإعادة وضعها على الجليد مرة أخرى.

25. كيف يختلف نوكلياز خارجي وظيفيًا عن نوكلياز داخلي؟ أعط مثالاً لأي نوعين من نوكلياز داخلي بخلاف Sal I. [Delhi 2013C]
الجواب. نوكليازات خارجية هي الإنزيمات التي تشق أزواج القواعد من الحمض النووي في نهاياتها النهائية وتعمل على حبلا واحد من الحمض النووي أو فجوات في الحمض النووي المزدوج الذي تقطعت به السبل. بينما ، تشق نوكليازات الحمض النووي في أي نقطة باستثناء النهايات الطرفية ويمكن أن تقطع على خيط واحد أو على كلا الخيطين من الحمض النووي المزدوج الذي تقطعت به السبل ، على سبيل المثال Eco Rl و Hind II.

26. اشرح العمل الذي قام به كوهين وبوير والذي ساهم بشكل كبير في التكنولوجيا الحيوية. [دلهي 2012]
الجواب. (ط) قام ستانلي كوهين وهربرت بوير ببناء أول جزيء DNA مؤتلف اصطناعي (rDNA).
(2) عزلوا الجين المقاوم للمضادات الحيوية عن طريق قطع قطعة من الحمض النووي من البلازميد بمساعدة إنزيم التقييد وربطوه ببلازميد أصلي من Salmonella typhimurium بمساعدة DNAIigase.

27. (1) يتم إدخال ناقل مؤتلف مع جين مهم يتم إدخاله داخل جين إنزيم a-galactosidase في بكتيريا a & # 8217. اشرح الطريقة التي من شأنها أن تساعد في اختيار المستعمرات المؤتلفة من المستعمرات غير المؤتلفة.
(2) لماذا هذه الطريقة (من التحديد المشار إليه باسم تعطيل الإدراج؟ [HOTS All India 2012]
الجواب. (ط) يمكن التمييز بين المستعمرات المؤتلفة والمستعمرات غير المؤتلفة من خلال عدم قدرتها على إنتاج اللون في وجود ركيزة كروموجينية.
لا تنتج المواد المؤتلفة أي لون بينما تنتج المواد غير المؤتلفة لونًا أزرق مع طبقة صبغية في الوسط.
(2) يصبح إنزيم a-galactosidase معطلاً عند إدخال الحمض النووي المؤتلف ، ضمن تسلسل ترميز الإنزيم. وبالتالي ، فإن الطريقة تسمى تعطيل الإدراج.

28. اشرح إبداء الأسباب التي تجعل قطعة دنا غريبة تحتاج إلى الاندماج في تسلسل محدد من دنا مضيف لاستنساخها؟
[عموم الهند 2011]
الجواب.يبدأ تكرار الحمض النووي من تسلسل DNA محدد يسمى أصل النسخ المتماثل. لتكاثر الحمض النووي الغريب في المضيف ، يجب دمجه في أصل التكرار (ORI).

29. قائمة الأدوات الرئيسية المستخدمة في تكنولوجيا الحمض النووي المؤتلف. [دلهي 2011]
الجواب.الأدوات الرئيسية المستخدمة في التكنولوجيا المؤتلفة هي الإنزيمات المقيدة ، والبوليميراز ، والليغازات ، وناقلات الاستنساخ ، والكائن أو الخلايا المضيفة المختصة.

30. شرح دور تي بلازميدات في التكنولوجيا الحيوية. [دلهي 2011]
الجواب.إن بلازميد Ti من Agrobacterium هو المسؤول عن التحول الطبيعي للخلايا النباتية إلى أورام. لذلك ، يتم تعديله إلى ناقل IC غير ممرض ولكنه لا يزال قادرًا على توصيل الحمض النووي. يستخدم هذا البلازميد المنزوع السلاح من الجراثيم كناقل لتحول الخلايا النباتية ، وبالتالي ثبت أنه يلعب دورًا مهمًا في التكنولوجيا الحيوية.

31. كيف يتم تكوين النواقل المؤتلفة؟ لماذا لا يلزم سوى نوع واحد من نوكلياز تقييد داخلي لإنشاء ناقل مؤتلف واحد؟ [الخارجية 2011]
الجواب.يتم قطع تكوين نواقل مؤتلف ناقل DNA في موقع تقييد معين بواسطة إنزيم تقييد ، وهو نفس الشيء الذي تم استخدامه لقطع جزء DNA المطلوب. ثم يتم ربط الحمض النووي الغريب بالحمض النووي المتجه باستخدام إنزيم ligase & # 8217 لتشكيل الناقل المؤتلف.
منذ ذلك الحين ، يتعرف إنزيم التقييد على الحمض النووي ويقطعه في تسلسل معين
يسمى موقع التعرف ، يتم استخدام نفس إنزيم التقييد لقطع جزء الحمض النووي من كل من الناقل والمصدر الآخر ، sp لإنتاج نفس النهايات اللاصقة في كل من جزيئات الحمض النووي لتسهيل الانضمام.

32. ادرس الرسم البياني أدناه وأجب عن الأسئلة التالية
(ط) لماذا ابتعدت شظايا الحمض النووي في البنك D مقارنة بتلك الموجودة في النطاق C؟
(2) تحديد نهاية الأنود في digram.
(3) كيف يتم تصور شظايا الحمض النووي هذه؟ [الخارجية 2011]
الجواب. (1) في النطاق D ، تكون شظايا الحمض النووي أصغر من تلك الموجودة في النطاق C. وتنفصل الأجزاء وفقًا لحجمها من خلال تأثير الغربلة الذي يوفره الهلام ، لذلك تتحرك الأجزاء الأصغر بعيدًا عن الأجزاء الأكبر.
(2) B هي نهاية الأنود في الرسم التخطيطي.
(3) الجل المحتوي على شظايا الحمض النووي ملطخ ببروميد الإيثيديوم ويتعرض للأشعة فوق البنفسجية. تصبح أشرطة الحمض النووي البرتقالية مرئية.

33. يتشكل الدنا المؤتلف عندما تلتقي الأطراف اللاصقة من دنا الناقل والحمض النووي الغريب. اشرح كيف يتم تشكيل الأطراف اللاصقة وربطها؟ [كل الهند 2010]
الجواب.تتشكل النهايات اللاصقة عندما يقطع إنزيم التقييد خيوط الحمض النووي بعيدًا قليلاً عن مركز التسلسل المتناوب.
يتم ربط الأطراف اللاصقة عبر عامل تكميلي لقاعدتين من خيوط البولينوكليوتيد وبواسطة عمل إنزيم ، DNA ligase.

34. اشرح عمل تقييد نوكلياز إيكو ري.
[الخارجية 2010]
الجواب.نوكلياز التقييد Eco Rl يقطع خيوط الحمض النووي بعيدًا قليلاً عن مركز التسلسل المتناوب ، ولكن بين نفس القاعدتين على الخيطين ، أي G و A.
5 & ​​# 8242-GAATTC-3 & # 8242
3 & # 8242- C T A A G- 5 & # 8242
(ط) نتيجة لهذا ، فإن الأجزاء المنفردة التي تقطعت بهم السبل تسمى النهايات اللاصقة ، تتدلى في نهاية كل حبلا.
(2) بسبب الالتصاق ، فإنها تشكل بسهولة روابط هيدروجينية مع نظيراتها التكميلية.

35. كيف يتم فصل شظايا الحمض النووي عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام وتصور وفصلها لاستخدامها في بناء الحمض النووي المؤتلف؟
[أجنبي 201 All India 2008]
الجواب. شظايا الحمض النووي المنفصلة ملطخة ببروميد إيثيديوم.
(ط) من خلال التعرض للأشعة فوق البنفسجية ، تصبح شظايا الحمض النووي المنفصلة مرئية على شكل شرائط برتقالية اللون.
(2) يتم قطع أشرطة الحمض النووي المنفصلة من هلام الاغاروز ويتم استخراج الحمض النووي من قطع الهلام هذه ، وتسمى هذه العملية شطف.

36. (ط) وضح تسلسل التعرف على Eco RI واذكر ما تسمى هذه التسلسلات؟
(2) كيف يعمل نوكلياز التقييد على جزيء DNA؟
[كل الهند 2010 C]
الجواب.(/ & # 8217) تسلسل التعرف على Eco Rl
5 & ​​# 8242- G A T T C -3 & # 8242
3 & # 8242- C T A A G -3 & # 8242
تسمى هذه التسلسلات متواليات النوكليوتيدات المتناوبة.
(2) يعمل نوكلياز التقييد على طول محدد من الحمض النووي ويرتبط بالحمض النووي في تسلسل التعرف المحدد. إنه يقطع كلا الخيوط المزدوجة من الحمض النووي ، في العمود الفقري لفوسفات السكر ، بعيدًا قليلاً عن مركز المواقع المتناظرة بين التسلسل أو النقاط المحددة.

37. قم بتسمية الكائن المصدر الذي يتم عزل Ti plasmid منه. اشرح استخدام هذا البلازميد في التكنولوجيا الحيوية. [الخارجية 2009]
الجواب. يتم عزل Ti plasmid من بكتيريا Agrobacterium tumefaciens.
إن بلازميد Ti في Agrobacterium هو المسؤول عن التحول الطبيعي للخلايا النباتية إلى أورام. لذلك ، يتم تعديله إلى ناقل IC غير ممرض ولكنه لا يزال قادرًا على توصيل الحمض النووي. يستخدم هذا البلازميد المنزوع السلاح من الجراثيم كناقل لتحول الخلايا النباتية ، وبالتالي ثبت أنه يلعب دورًا مهمًا في التكنولوجيا الحيوية.

38. اسم المصدر الطبيعي للاغاروز. اذكر دورًا واحدًا ل agarose في التكنولوجيا الحيوية. [دلهي 2009 ج]
الجواب.المصدر الطبيعي للاغاروز هو الأعشاب البحرية. دور الاغاروز في التكنولوجيا الحيوية
(ط) يتم استخدامه لتطوير المصفوفة للهلام الكهربائي.
(2) يساعد في فصل الأجزاء على أساس حجمها.

39- دراسة ربط شظايا الحمض النووي الموضحة أدناه:

متجه استنساخ بكتريا قولونية pBR322 يعرض مواقع تقييد (Hind III ، Eco Rl
Bam HI و Sal I و Pvu II و Pst I و Cla I) وجينات مقاومة أوري والمضادات الحيوية (amp R و tet R).
رموز rop للبروتينات المشاركة في تكرار البلازميد.

  • اسم A DNA و B DNA.
  • قم بتسمية إنزيم التقييد الذي يتعرف على هذا التناظر.

قم بتسمية الإنزيم الذي يمكنه ربط جزأين من الحمض النووي.
[دلهي 2008]
الجواب. (ط) A & # 8211 ناقل / DNA البلازميد
ب & # 8211 الحمض النووي الأجنبي
(2) Eco Rl
(3) DNA ligase40- يوضح ما يلي ارتباط شظايا الحمض النووي.

(ط) الاسم أ و ب.
(2) أكمل المتناظر ، الذي يتعرف عليه Eco RI.
(3) اسم الإنزيم الذي يمكن أن يربط شظايا الحمض النووي.
[الخارجية 2008]
الجواب.(ط) A & # 8211 ناقل DNA ، الحمض النووي B-الأجنبي
(2) 5 & # 8242- GAATTC-3 & # 8242
3 & # 8242- CTTAAG-5 & # 8242
(3) DNA ligase
3 أسئلة للعلامات

41. اسم ووصف التقنية التي تساعد في فصل أجزاء الحمض النووي المتكونة من استخدام نوكلياز تقييد. [كل الهند 2014]
الجواب. يتم فصل شظايا الحمض النووي الناتجة عن استخدام نوكليازات تقييدية بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
(ط) شظايا الحمض النووي هي جزيئات سالبة الشحنة. وبالتالي ، فإنها تتحرك نحو القطب الموجب تحت المجال الكهربائي عبر الوسط.
(2) شظايا الحمض النووي المنفصلة حسب حجمها بسبب تأثير هلام الاغاروز.
(3) يمكن رؤية شظايا الحمض النووي المنفصلة عن طريق تلطيخ الحمض النووي ببروميد إيثيديوم متبوعًا بالتعرض للأشعة فوق البنفسجية.
(4) يتم قطع شرائط الحمض النووي المنفصلة واستخلاصها من قطعة هلامية. هذا هو المعروف باسم شطف.

42. ارسم مخططًا تخطيطيًا لمتجه colicloning pBR322 وقم بتمييز ما يلي فيه.

  • أوري
  • حبل
  • جين مقاومة الأمبيسلين
  • جين مقاومة التتراسيكلين
  • موقع التقييد بام مرحبا
  • موقع التقييد EcoRI

(ط) رسم مخططات تخطيطية لأجزاء من ناقل ودنا أجنبي مع تسلسل النيوكليوتيدات المعترف بها من قبل إيكو
(2) ارسم مقطع الحمض النووي المتجهي مقاطع الحمض النووي الأجنبية القاحلة بعد إجراء EcoRI وقم بتسمية الأطراف اللاصقة المنتجة. [دلهي 2014C]
أو
ارسم مخططًا تخطيطيًا للبلازميد pBR322 وقم بتسمية ما يلي فيه

  • أي اثنين من مواقع التقييد.
  • أوري وروب
  • جين مقاوم للمضادات الحيوية. [دلهي 2012].

الجواب. القولونية ناقلات استنساخ pBR322.
متجه استنساخ بكتريا قولونية pBR322 يعرض مواقع تقييد (Hind III ، Eco Rl
Bam HI و Sal I و Pvu II و Pst I و Cla I) وجينات مقاومة أوري والمضادات الحيوية (amp R و tet R).
رموز rop للبروتينات المشاركة في تكرار البلازميد.
أو
(أ) تقوم إنزيمات التقييد بقطع شريط الحمض النووي بعيدًا قليلاً عن مركز المواقع المتناظرة ، ولكن بين نفس القاعدتين على الخيوط المقابلة.
(ب) هذا يترك أجزاء واحدة تقطعت بهم السبل في النهايات.
(ج) هناك امتدادات متدلية تسمى النهايات اللاصقة على كل خيوط كما هو موضح في الشكل أعلاه. تم تسميتها بذلك ، لأنها تشكل روابط هيدروجينية مع نظيراتها المقطوعة التكميلية.
(د) تسهل لزوجة الأطراف عمل إنزيم DNA ligase.
(هـ) تُستخدم نوكليازات تقييدية في الهندسة الوراثية لتكوين جزيئات مؤتلفة من الدنا ، والتي تتكون من دنا من مصادر / جينومات مختلفة.
(و) تكون هذه الأطراف اللاصقة مكملة لبعضها البعض عند قطعها بنفس إنزيم التقييد ، وبالتالي يمكن ضمها معًا (من طرف إلى طرف) باستخدام روابط DNA.43. ما هي & # 8216 مواقع الاستنساخ & # 8217 في متجه الاستنساخ؟ اشرح دورهم. قم بتسمية أي موقعين من هذه المواقع في pBR322. [جميع الهند 2014C]
الجواب.مواقع الاستنساخ هي في الواقع تسلسل التعرف الفريد المحدد لأنزيم تقييد معين ، وذلك لربط الحمض النووي الغريب بالحمض النووي المتجه لإنشاء جزيئات الحمض النووي المؤتلف ، (ل) هذه المواقع مهمة للانضمام إلى أجزاء الحمض النووي من الناقل والغريب. الحمض النووي. وأيضًا ستؤدي تسلسلات التعرف المتعددة لأنزيم تقييد معين داخل DNA أو ناقل إلى تعقيد عملية استنساخ الجينات.
موقعي الاستنساخ في pBR322 هما Bam HI للجين المقاوم للتتراسيكلين و Pvu I للجينات المقاومة للأمبيسيات.

44. كيف يتم فصل شظايا الحمض النووي وعزلها لأخذ بصمات الحمض النووي؟ يشرح. [الخارجية 2012]
الجواب. يتم فصل شظايا الحمض النووي الناتجة عن استخدام نوكليازات تقييدية بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
(ط) شظايا الحمض النووي هي جزيئات سالبة الشحنة. وبالتالي ، فإنها تتحرك نحو القطب الموجب تحت المجال الكهربائي عبر الوسط.
(2) يتم فصل شظايا الحمض النووي وفقًا لحجمها بسبب تأثير جل الاغاروز.
(3) يمكن رؤية شظايا الحمض النووي المنفصلة عن طريق تلطيخ الحمض النووي ببروميد إيثيديوم متبوعًا بالتعرض للأشعة فوق البنفسجية.
(4) يتم قطع شرائط الحمض النووي المنفصلة واستخلاصها من قطعة هلامية. هذا هو المعروف باسم شطف

45. (ط) لماذا تسمى نوكليازات التقييد هكذا؟
(2) ما هو تسلسل النيوكليوتيدات المتناوب؟ كيف تعمل نوكليازات التقييد على المواقع المتناظرة ، لتكوين نهايات لزجة؟
[دلهي 2011 ج]
الجواب. (ط) تسمى نوكليازات التقييد لأنها تتعرف وتحدث قطعًا في مواقع محددة داخل الحمض النووي وتحد من نمو البكتيريا.
(2) (أ) التناظر في الحمض النووي هو سلسلة من أزواج القواعد التي تقرأ نفس الشيء على خيطي الحمض النووي عندما يظل اتجاه القراءة كما هو.
على سبيل المثال،
5 & ​​# 8217 — GAATTG — 3 & # 8242
3 & # 8217 — CTTAAG — 5 & # 8242
(ب) تقطع إنزيمات التقييد شريطة الحمض النووي بعيدًا قليلاً عن مركز موقع المتناظر ، ولكن بين نفس القاعدتين في كل من الخيوط. هذا يخلق امتدادات مفردة تقطعت بهم السبل ، متدلية في نهايات المتناظرة ، تسمى النهايات اللاصقة.

46. ​​كيف يتم استخدام ما يلي في التكنولوجيا الحيوية؟

  • DNA البلازميد
  • تسلسل التعرف
  • الرحلان الكهربائي للهلام [All India 2011c]

الجواب. (ط) DNA البلازميد يتم استخدامه لبناء الحمض النووي المؤتلف ، عن طريق ربط القطعة الغريبة من الحمض النووي به. يتم استخدامه كناقل استنساخ ويساعد في اختيار المؤتلف من غير المؤتلف.

(2) تسلسل الاعتراف هذه هي سلاسل أساسية محددة من الحمض النووي ، حيث يقطع إنزيم التقييد الحمض النووي. يتم استخدامها لاستخراج الجين المطلوب أو الأجزاء من جزيئات الحمض النووي.
(3) هلام الكهربائي إنها تقنية تستخدم لفصل أجزاء الحمض النووي وفقًا لحجمها من خلال تأثير الجل.47. يستخدم EcoRI لقطع جزء من DNA غريب و DNA ناقل لتشكيل DNA مؤتلف. اعرض بمساعدة المخططات التخطيطية.

  • مجموعة النوكليوتيدات المتناوبة لأزواج القاعدة سوف يتعرف عليها EcoRI في كل من مقاطع الحمض النووي. حدد الموقع الذي ستتصرف فيه EcoRI وقم بقص كلا الجزأين.
  • تشكلت النهايات اللاصقة على كلا الجزأين ، حيث سينضم جزءان من الحمض النووي لاحقًا لتشكيل الحمض النووي المؤتلف. [دلهي 2010]

الجواب. التسلسل المتناوب لـ Eco Rl هو

5 & ​​# 8242 G AATTC 3 & # 8242
3 & # 8217C TTAA G 5 & # 8242 ر
(تشير الأسهم إلى الموقع ، حيث تقطع الخيوط.)
(2) نهايات مثبتة تتشكل على كلا الجزأين.
(أ) تقوم إنزيمات التقييد بقطع شريط الحمض النووي بعيدًا قليلاً عن مركز المواقع المتناظرة ، ولكن بين نفس القاعدتين على الخيوط المقابلة.
(ب) هذا يترك أجزاء واحدة تقطعت بهم السبل في النهايات.
(ج) هناك امتدادات متدلية تسمى النهايات اللاصقة على كل خيوط كما هو موضح في الشكل أعلاه. تم تسميتها بذلك ، لأنها تشكل روابط هيدروجينية مع نظيراتها المقطوعة التكميلية.
(د) تسهل لزوجة الأطراف عمل إنزيم DNA ligase.
(هـ) تُستخدم نوكليازات تقييدية في الهندسة الوراثية لتكوين جزيئات مؤتلفة من الدنا ، والتي تتكون من دنا من مصادر / جينومات مختلفة.
(و) تكون هذه الأطراف اللاصقة مكملة لبعضها البعض عند قطعها بنفس إنزيم التقييد ، وبالتالي يمكن ضمها معًا (من طرف إلى طرف) باستخدام روابط DNA.48- (ط) قم بتسمية الكائن الحي الذي يتم فيه إدخال المتجه الموضح للحصول على نسخ الجين المطلوب.

  • اذكر المنطقة الموصوفة في الناقل المسؤولة عن التحكم في رقم نسخة الجين المُدرج.
  • اسم وشرح دور أعلامة قابلة للتحديد في المتجه الموضح. [كل الهند 2010]

الجواب. (ط) الإشريكية القولونية (E. coli)
(2) أوري في المتجه مسؤول عن التحكم في رقم نسخة الجين المُدرج.
(3) تُستخدم الجينات التي ترمز المقاومة للمضادات الحيوية مثل tet R المقاومة للتتراسيكلين ، amp R المقاومة للأمبيسيلين كواسمات قابلة للتحديد. إذا تم ربط DNA غريب في موقع Bam HI لجين مقاومة التتراسيكلين ، فإن البلازميدات المؤتلفة ستفقد مقاومة التتراسيكلين.
تساعد العلامات القابلة للتحديد في تحديد والقضاء على غير المحولات والسماح بشكل انتقائي بنمو المحولات.

49. (ط) EcoRI هو نوكلياز داخلي. كيف سميت بذلك؟ يشرح.
(2) اكتب تسلسل قواعد الحمض النووي التي يتعرف عليها الإنزيم. اذكر النقطة التي يصنع عندها الإنزيم قطعًا في قطعة الحمض النووي. [دلهي 2010 ج]
الجواب.(ط) تسمية نوكلياز التقييد هي:
(ط) يأتي الحرف الأول من الاسم من الجنس والحرفين التاليين من أنواع الخلية بدائية النواة حيث يتم استخراج الإنزيمات.
(2) توضح الأرقام الرومانية التي تلي الاسم الترتيب الذي تم به عزل الإنزيمات من السلالة البكتيرية. على سبيل المثال ، Eco Rl مشتق من Escherichia coli RY 13 ، Hind II من Haemophilus influenzae Rd ، إلخ.
(II) تسلسل التعرف هو متماثل ، حيث يقرأ تسلسل الزوج الأساسي نفس الشيء على كل من خيوط الحمض النووي ، عندما يظل اتجاه القراءة كما هو ،
على سبيل المثال ، 5 & # 8242- GAATTC -3 & # 8242
3 & # 8242- CTTAAG -5 & # 8242
يقوم الإنزيم Eco Rl بتقطيع مقطع الحمض النووي عند القاعدتين G و A على كلا الخيوط فقط عندما يكون التسلسل GAATTC

50. (ط) اسم التقنية المستخدمة لفصل شظايا الحمض النووي.

  • اكتب نوع المصفوفة المستخدمة في هذه التقنية.
  • كيف يتم تصور الحمض النووي المفصول واستخلاصه لاستخدامه في تكنولوجيا إعادة التركيب؟ [كل الهند 2010]

الجواب. (ط) الرحلان الكهربائي للهلام.

(2) المادة المستخدمة كمصفوفة في الرحلان الكهربائي للهلام هي [اغروس).
يعمل جل الاغاروز هذا كمنخل لفصل شظايا الحمض النووي وفقًا لحجمها.
(3) شظايا الحمض النووي المنفصلة ملطخة ببروميد إيثيديوم.
(أ) بالتعرض للأشعة فوق البنفسجية ، تصبح شظايا الحمض النووي المنفصلة مرئية على شكل شرائط برتقالية اللون.
(ب) يتم قطع أشرطة الحمض النووي المنفصلة من هلام الاغاروز ويتم استخراج الحمض النووي من قطع الهلام هذه ، وتسمى هذه العملية شطف.

51. (1) حدد الأسواق التي يمكن اختيارها في الرسم البياني لمتجه الإشريكية القولونية الموضح أدناه.
الجواب. (ط) A & # 8211 مقاومة الأمبيسلين D & # 8211 تستخدم مقاومة التتراسيكلين كعلامات قابلة للتحديد في ناقل استنساخ بكتريا قولونية.
(2) تسلسل ترميز a-galactosidase هو علامة أفضل ، حيث يتم تمييز المؤتلفات وغير المؤتلفة على أساس قدرتها على إنتاج اللون في وجود ركيزة صبغية ، في حين أن اختيار المؤتلف بسبب تعطيل المضاد الحيوي الجين المقاوم عملية شاقة وتستغرق وقتًا لتنميتها في وقت واحد على اثنين من المضادات الحيوية بشكل منفصل.
(أ) يؤدي إدخال rDNA في تسلسل تشفير a-galactosidase إلى تعطيل الإدراج.
(2) لا تنتج المؤتلفات لونًا أزرق ، بينما تنتج المواد غير المؤتلفة لونًا أزرق.

52. تسمية وشرح التقنيات المستخدمة في فصل وعزل أجزاء الحمض النووي لاستخدامها في تكنولوجيا الحمض النووي المؤتلف.
[عموم الهند 2009]
الجواب.يتم فصل شظايا الحمض النووي الناتجة عن استخدام نوكليازات تقييدية بواسطة الرحلان الكهربائي للهلام.
(ط) شظايا الحمض النووي هي جزيئات سالبة الشحنة. وبالتالي ، فإنها تتحرك نحو القطب الموجب تحت المجال الكهربائي عبر الوسط.
(2) يتم فصل شظايا الحمض النووي وفقًا لحجمها بسبب تأثير جل الاغاروز.
(3) يمكن رؤية شظايا الحمض النووي المنفصلة عن طريق تلطيخ الحمض النووي ببروميد إيثيديوم متبوعًا بالتعرض للأشعة فوق البنفسجية.
(4) يتم قطع شرائط الحمض النووي المنفصلة واستخلاصها من قطعة هلامية. هذا هو المعروف باسم شطف.

53. لماذا تعتبر الجينات التي تشفر مقاومة المضادات الحيوية علامات مفيدة ومفيدة لانتقاء ناقلات القولون؟ اشرح بمساعدة مثال واحد. [دلهي 2009 ج]
الجواب. تعتبر الجينات التي ترمز المقاومة للمضادات الحيوية مفيدة للاختيار
علامات لأن الجنيه الإسترليني العادي. لا تحمل خلايا القولونية مقاومة ضد أي من هذه المضادات الحيوية.
مثال يتم ربط الحمض النووي الأجنبي في موقع Bam HI لجين مقاومة التتراسيكلين في ناقل pBR322. ستفقد البلازميدات المؤتلفة مقاومة التتراسيكلين بسبب إدخال الحمض النووي الغريب ولكن لا يزال من الممكن اختيارها من المواد غير المؤتلفة عن طريق طلاء المحولات على وسط يحتوي على الأمبيسلين.
يتم بعد ذلك نقل المحولات التي تنمو على وسط يحتوي على الأمبيسلين على وسط يحتوي على التتراسيكلين. لن تنمو المواد المؤتلفة ، بينما تنمو المواد غير المؤتلفة على الوسط الذي يحتوي على كلا المضادات الحيوية. وبالتالي يساعد الجين المقاوم للمضادات الحيوية في اختيار المحولات.

54. (ط) اكتب متواليات النيوكليوتيدات المتناظرة لجزء الحمض النووي التالي
5 & ​​# 8242- GAATTC- 3 & # 8242

  • قم بتسمية نوكلياز التقييد الذي يتعرف على هذا التسلسل.
  • كيف يتم إنتاج النهايات اللاصقة؟ اذكر دورهم. [عموم الهند 2009]

الجواب. (ط) تسلسل متناوب

5 & ​​# 8242- GAATTC- 3 & # 8242
3 & # 8242- CTTAAG -5 & # 8242.
(2) يتعرف نوكلياز القيد الداخلي Eco Rl على التسلسل المتناوب أعلاه.
(3) تتشكل النهايات اللاصقة على الحمض النووي عن طريق عمل نوكليازات تقييد الإنزيمات. تقطع هذه الإنزيمات شريطة الحمض النووي بعيدًا قليلاً عن مركز التسلسل المتناظر بين نفس القاعدتين على كلا الجدولين. ينتج عن هذا امتدادات مفردة تقطعت بهم السبل على كل من الخيوط التكميلية في نهاياتها.
تسمى هذه الامتدادات المتدلية بالنهايات اللاصقة لأنها تشكل روابط هيدروجينية مع متواليات زوج القاعدة التكميلية.
دور النهايات اللاصقة تنتج هذه النهايات اللاصقة روابط هيدروجينية مع نظيراتها المقطوعة التكميلية. هذا الالتصاق في النهايات يسهل عمل إنزيم DNA ligase.

55. (ط) ما هو المقص الجزيئي؟
أعط مثالا واحدا.
(2) شرح دورها في تكنولوجيا الحمض النووي المؤتلف.
[مجلة دلهي الخارجية 2008 2008]
أو
(ط) قم بتسمية فئة الإنزيمات التي تقطع في موقع معين داخل جزيء الحمض النووي. اعط مثالا.
(2) اشرح كيف تعمل هذه الإنزيمات؟ اذكر استخدامها في الهندسة الوراثية. [All India 2008C]
الجواب. (أنا) المقص الجزيئي هو نوكلياز مقيد لأنه يقطع مقاطع الحمض النووي في مواقع معينة أو تسلسل محدد ، على سبيل المثال ايكو رل.
(ثانيا) تقوم إنزيمات التقييد بقطع شريط الحمض النووي بعيدًا قليلاً عن مركز المواقع المتناظرة ، ولكن بين نفس القاعدتين على الخيوط المتقابلة. هذا يترك الأجزاء المفردة التي تقطعت بها السبل في النهايات مع امتدادات متدلية تسمى النهايات اللاصقة على كل خصلة. تشكل هذه النهايات روابط هيدروجينية مع نظيراتها المقطوعة التكميلية. هذا الالتصاق في الأطراف يسهل عمل إنزيم DNA ligase.

56. لماذا تعتبر Agrobacterium tumefaciens ناقل استنساخ جيد؟ يشرح.
[كل الهند 2008]
الجواب. الجراثيم الورمية هي بكتيريا التربة التي تسبب المرض في العديد من نباتات الديكوت. إنه ناقل طبيعي لأنه قادر على توصيل قطعة من الحمض النووي المعروفة باسم T-DNA لتحويل الخلايا الطبيعية إلى خلايا ورمية وتوجيه هذه الخلايا السرطانية لإنتاج المواد الكيميائية التي يحتاجها العامل الممرض.
وقد تم الآن تعديل الورم حمل (تي) البلازميد A. المورمة في ناقلات الاستنساخ، والتي ليست أكثر الممرضة للنباتات ولكن لا يزال إيصال الجين من الفائدة، أن يحصل على دمجها في جينوم النبات.

57. اشرح أهمية
(1) ori (ii) amp R و (iii) rop في ناقل الإشريكية القولونية الموضح أدناه.
[كل الهند 2008]
الجواب.(ط) أوري هو تسلسل الحمض النووي من حيث يبدأ النسخ المتماثل وأي قطعة من الحمض النووي ، عند ربطها بهذا التسلسل يمكن أن تتكاثر داخل الخلايا المضيفة.
كما أنها مسؤولة عن التحكم في عدد نسخ الحمض النووي المرتبط.
(2) amp R هو جين مقاوم للمضادات الحيوية يتم فيه ربط الحمض النووي الغريب في موقع تقييد.
(3) رموز rop للبروتينات المشاركة في تكرار البلازميد.

58. تم تصميم المتجه بثلاث ميزات ، والتي تسهل clonincj داخل الخلية المضيفة. ضع قائمة بالخصائص الثلاث واشرح كل منها.
[الخارجية 2008]
الجواب. الميزات التي تسهل استنساخ المتجهات هي:
(أنا) أصل النسخ المتماثل (أوري)

  • هذا هو تسلسل الحمض النووي من حيث يبدأ النسخ المتماثل.
  • يتم إجراء أي قطعة من الحمض النووي الغريب / الأجنبي مرتبطة به للتكاثر داخل الخلية المضيفة. كما يقرر رقم نسخة [DNA.
    (ثانيا) علامة اختيار هو جين محدد يساعد في اختيار الخلايا المضيفة ، والتي هي عبارة عن محولات / مؤتلف من الخلايا غير المؤتلفة.
    على سبيل المثال ، الجينات المقاومة للأمبيسيلين والتتراسيكلين في £. القولونية.
    (3) موقع الاستنساخ هو موقع تمييز فريد في ناقل لربط الحمض النووي الغريب. إن وجود موقع معين للاستنساخ / التعرف يساعد إنزيم التقييد الجزئي على قطع الحمض النووي المتجه. يفضل موقع التعرف الفردي بشكل عام.
    (رابعا) الحجم الصغير للناقل يسهل الحجم الصغير إدخال الحمض النووي إلى المضيف بسهولة.

59. لماذا يجب أن تكون الخلية مؤهلة لأخذ الحمض النووي؟ اشرح الخطوات التي تجعل الخلايا البكتيرية مؤهلة لتناول البلازميد / rDNA. [دلهي 2008 ج]

الجواب. الحمض النووي كونه جزيء ماء لا يمكن أن يمر عبر غشاء الخلية. ومن ثم ، فإن الخلية البكتيرية مؤهلة لقبول جزيء الحمض النووي. وبالتالي ، فإن الكفاءة هي قدرة الخلية على امتصاص الحمض النووي الغريب.
يتم استخدام الطرق التالية لجعل الخلية البكتيرية مختصة:
يجب أن تكون البكتيريا مؤهلة لقبول جزيئات الحمض النووي ،
(ط) الكفاءة هي قدرة الخلية على امتصاص الحمض النووي الغريب.
(2) طرق جعل الخلية مختصة هي كما يلي.
(أ) الطريقة الكيميائية في هذه الطريقة ، يتم معالجة الخلية بتركيز محدد من الكاتيون ثنائي التكافؤ مثل الكالسيوم لزيادة حجم المسام في جدار الخلية.

  • ثم يتم تحضين الخلايا مع الحمض النووي المؤتلف على الجليد ، متبوعًا بوضعها
  • لفترة وجيزة عند 42 درجة مئوية ثم إعادة وضعها على الجليد. وهذا ما يسمى بعلاج الصدمة الحرارية.
    • هذا يمكن البكتيريا من امتصاص الحمض النووي المؤتلف.
    (ب) الطرق الفيزيائية في هذه الطريقة ، يتم حقن الحمض النووي المؤتلف مباشرة في نواة الخلية الحيوانية عن طريق طريقة الحقن المجهري.
    • في النباتات ، يتم قصف الخلايا بجسيمات دقيقة عالية السرعة من الذهب أو
    التنغستن المغلف بالحمض النووي يسمى علم الأحياء أو طريقة بندقية الجينات.
    (ج) نواقل مسببات الأمراض منزوعة السلاح عندما يُسمح بإصابة الخلية ، انقل الحمض النووي المؤتلف إلى المضيف.

60. اقرأ التسلسل الأساسي التالي لخيط DNA معين وأجب عن الأسئلة التالية:

  • ما يسمى بالتسلسل المتناوب في الحمض النووي؟
  • اكتب تسلسل النوكليوتيدات المتناوب الموضح في خيط الحمض النووي المعطى واذكر الإنزيم الذي سيتعرف على مثل هذا التسلسل.
  • اذكر أهمية الإنزيمات التي تحدد متواليات النوكليوتيدات المتناظرة. [All India 2008C]

الجواب. (ط) التسلسل المتناوب في الحمض النووي عبارة عن تسلسلات أساسية تقرأ نفس الشيء ، في الاتجاهين الأمامي والخلفي.
(2) التسلسل المتناوب في DNA 5 & # 8242- GAATTC- 3 & # 8242
3 & # 8211 CTTAAG- 5 & # 8242
يقرأ التسلسل نفس الشيء على الخيوط في اتجاه 5 & # 8242- & GT 3 & # 8242. هذا هو نفسه أيضًا إذا تمت قراءته في الاتجاه 3 & # 8242- & GT5 & # 8242. يتعرف نوكلياز التقييد على هذا التسلسل.
الحمض النووي كونه جزيء ماء لا يمكن أن يمر عبر غشاء الخلية. ومن ثم ، فإن الخلية البكتيرية مؤهلة لقبول جزيء الحمض النووي. وبالتالي ، فإن الكفاءة هي قدرة الخلية على امتصاص الحمض النووي الغريب.
يتم استخدام الطرق التالية لجعل الخلية البكتيرية مختصة:
يجب أن تكون البكتيريا مؤهلة لقبول جزيئات الحمض النووي ،
(ط) الكفاءة هي قدرة الخلية على امتصاص الحمض النووي الغريب.
(2) طرق جعل الخلية مختصة هي كما يلي.
(أ) الطريقة الكيميائية في هذه الطريقة ، يتم معالجة الخلية بتركيز محدد من الكاتيون ثنائي التكافؤ مثل الكالسيوم لزيادة حجم المسام في جدار الخلية.

لفترة وجيزة عند 42 درجة مئوية ثم إعادة وضعها على الجليد. وهذا ما يسمى بعلاج الصدمة الحرارية.
• هذا يمكن البكتيريا من امتصاص الحمض النووي المؤتلف.
(ب) الطرق الفيزيائية في هذه الطريقة ، يتم حقن الحمض النووي المؤتلف مباشرة في نواة الخلية الحيوانية عن طريق طريقة الحقن المجهري.
• في النباتات ، يتم قصف الخلايا بجسيمات دقيقة عالية السرعة من الذهب أو
التنغستن المغلف بالحمض النووي يسمى علم الأحياء أو طريقة بندقية الجينات.
(ج) نواقل مسببات الأمراض منزوعة السلاح عندما يُسمح بإصابة الخلية ، انقل الحمض النووي المؤتلف إلى المضيف.
أهمية نوكليازات تقييدية تستخدم في الهندسة الوراثية لتشكيل جزيئات الحمض النووي المؤتلف ،
التي تتكون من DNA من مصادر / جينومات مختلفة وتسمح بعزل جزء الجين المطلوب وضمه مع المضيف على ناقل الحمض النووي بسبب النهايات اللاصقة المتولدة.
5 أسئلة للعلامات

61. (ط) وصف الخصائص التي يجب أن يمتلكها ناقل الاستنساخ.
(2) لماذا لا يمكن للحمض النووي أن يمر عبر غشاء الخلية؟ يشرح. كيف يتم جعل الخلية البكتيرية مؤهلة لأخذ الحمض النووي المؤتلف من الوسط؟ [عموم الهند 2011]
الجواب (أنا) الميزات التالية مطلوبة لتسهيل الاستنساخ في ناقل
الميزات التي تسهل استنساخ المتجهات هي:
(أنا) أصل النسخ المتماثل (أوري)

  • هذا هو تسلسل الحمض النووي من حيث يبدأ النسخ المتماثل.
  • يتم إجراء أي قطعة من الحمض النووي الغريب / الأجنبي مرتبطة به للتكاثر داخل الخلية المضيفة. كما يقرر رقم نسخة [DNA.

(ثانيا) علامة اختيار هو جين محدد يساعد في اختيار الخلايا المضيفة ، والتي هي عبارة عن محولات / مؤتلف من الخلايا غير المؤتلفة.
على سبيل المثال ، الجينات المقاومة للأمبيسيلين والتتراسيكلين في £. القولونية.
(3) موقع الاستنساخ هو موقع تمييز فريد في ناقل لربط الحمض النووي الغريب. إن وجود موقع معين للاستنساخ / التعرف يساعد إنزيم التقييد الجزئي على قطع الحمض النووي المتجه. يفضل موقع التعرف الفردي بشكل عام.
(رابعا) الحجم الصغير للناقل يسهل الحجم الصغير إدخال الحمض النووي إلى المضيف بسهولة.
(الثاني) الحمض النووي كونه جزيء ماء لا يمكن أن يمر عبر غشاء الخلية. ومن ثم ، فإن الخلية البكتيرية مؤهلة لقبول جزيء الحمض النووي. وبالتالي ، فإن الكفاءة هي قدرة الخلية على امتصاص الحمض النووي الغريب.
يتم استخدام الطرق التالية لجعل الخلية البكتيرية مختصة:
يجب أن تكون البكتيريا مؤهلة لقبول جزيئات الحمض النووي ،
(ط) الكفاءة هي قدرة الخلية على امتصاص الحمض النووي الغريب.
(2) طرق جعل الخلية مختصة هي كما يلي.
(أ) الطريقة الكيميائية في هذه الطريقة ، يتم معالجة الخلية بتركيز محدد من الكاتيون ثنائي التكافؤ مثل الكالسيوم لزيادة حجم المسام في جدار الخلية.

لفترة وجيزة عند 42 درجة مئوية ثم إعادة وضعها على الجليد. وهذا ما يسمى بعلاج الصدمة الحرارية.
• هذا يمكن البكتيريا من امتصاص الحمض النووي المؤتلف.
(ب) الطرق الفيزيائية في هذه الطريقة ، يتم حقن الحمض النووي المؤتلف مباشرة في نواة الخلية الحيوانية عن طريق طريقة الحقن المجهري.
• في النباتات ، يتم قصف الخلايا بجسيمات دقيقة عالية السرعة من الذهب أو
التنغستن المغلف بالحمض النووي يسمى علم الأحياء أو طريقة بندقية الجينات.
(ج) نواقل مسببات الأمراض منزوعة السلاح عندما يُسمح بإصابة الخلية ، انقل الحمض النووي المؤتلف إلى المضيف.62. (ط) بمساعدة الرسوم البيانية تظهر الخطوات المختلفة في تكوين الحمض النووي المؤتلف عن طريق عمل إنزيم نوكلياز التقييد Eco RI.
(2) قم بتسمية التقنية المستخدمة لفصل أجزاء الحمض النووي المقطوعة عن طريق نوكليازات تقييدية. [عموم الهند 2011]
الجواب. (ط) تكوين الحمض النووي المؤتلف عن طريق عمل إنزيم نوكلياز التقييد Eco Rl.
يقوم إنزيم التقييد بقطع كل من خيوط الحمض النووي في نفس الموقع ، مما ينتج عنه نهايات لزجة.
(أ) تقوم إنزيمات التقييد بقطع شريط الحمض النووي بعيدًا قليلاً عن مركز المواقع المتناظرة ، ولكن بين نفس القاعدتين على الخيوط المقابلة.
(ب) هذا يترك أجزاء واحدة تقطعت بهم السبل في النهايات.
(ج) هناك امتدادات متدلية تسمى النهايات اللاصقة على كل خيوط كما هو موضح في الشكل أعلاه. تم تسميتها بذلك ، لأنها تشكل روابط هيدروجينية مع نظيراتها المقطوعة التكميلية.
(د) تسهل لزوجة الأطراف عمل إنزيم DNA ligase.
(هـ) تُستخدم نوكليازات تقييدية في الهندسة الوراثية لتكوين جزيئات مؤتلفة من الدنا ، والتي تتكون من دنا من مصادر / جينومات مختلفة.
(و) تكون هذه الأطراف اللاصقة مكملة لبعضها البعض عند قطعها بنفس إنزيم التقييد ، وبالتالي يمكن ضمها معًا (من طرف إلى طرف) باستخدام روابط DNA.
(2) الهلام الكهربائي.

63. (ط) لماذا يفضل علماء التكنولوجيا الحيوية النواقل المهندسة لنقل الجينات المرغوبة إلى كائن حي آخر؟(2) اشرح ، كيف تسهل مواقع الاستنساخ والعلامات المختارة ومواقع الاستنساخ "أوري" الاستنساخ في ناقل؟ [الخارجية 2009]
الجواب. (1) يفضل علماء التكنولوجيا الحيوية النواقل المهندسة لأنها تساعد في ربط سهل للحمض النووي الغريب واختيار المواد المؤتلفة من غير المؤتلفة.
(2) الميزات التي تسهل استنساخ المتجهات هي:
(أنا) أصل النسخ المتماثل (أوري)

  • هذا هو تسلسل الحمض النووي من حيث يبدأ النسخ المتماثل.
  • يتم إجراء أي قطعة من الحمض النووي الغريب / الأجنبي مرتبطة به للتكاثر داخل الخلية المضيفة. كما يقرر رقم نسخة [DNA.

(ثانيا) علامة اختيار هو جين محدد يساعد في اختيار الخلايا المضيفة ، والتي هي عبارة عن محولات / مؤتلف من الخلايا غير المؤتلفة.
على سبيل المثال ، الجينات المقاومة للأمبيسيلين والتتراسيكلين في £. القولونية.
(3) موقع الاستنساخ هو موقع تمييز فريد في ناقل لربط الحمض النووي الغريب. إن وجود موقع معين للاستنساخ / التعرف يساعد إنزيم التقييد الجزئي على قطع الحمض النووي المتجه. يفضل موقع التعرف الفردي بشكل عام.
(رابعا) الحجم الصغير للناقل يسهل الحجم الصغير إدخال الحمض النووي إلى المضيف بسهولة.


كيف تم ترتيب موقع تقييد استخدام EcoRI؟ - مادة الاحياء

تقييد مواقع أو تقييد مواقع التعرف ، هي سلاسل محددة من النيوكليوتيدات التي يتم التعرف عليها بواسطة تقييد الانزيمات. المواقع بشكل عام متناظرة ، وخاصة تقييد قد يقطع الإنزيم التسلسل بين نيوكليوتيدات داخله.
المقال كامل >>>

أ تقييد الإنزيم هو إنزيم يقطع الحمض النووي مزدوج الشريطة أو المفرد الذي تقطعت به السبل في تسلسل محدد للنيوكليوتيدات يعرف باسم تقييد المواقع. يُعتقد أن مثل هذه الإنزيمات الموجودة في البكتيريا والعتائق.
المقال كامل >>>

كيف يمكنني إضافة ملف موقع إلى Internet Explorer محدد المواقع منطقة؟ . لأننا نتحدث عن محدد المواقع المنطقة التي من المحتمل أن تريدها.
المقال كامل >>>

يجد تقييد انشقاق نوكلياز داخلية المواقع في تسلسل الحمض النووي. يدعم الحمض النووي الخطي والدائري ويوفر عدة طرق لفرز الإخراج وتصفيته.
المقال كامل >>>

تقدم CLC bio مجموعة واسعة من حلول المعلوماتية الحيوية ذات المستوى العالمي: من تحليل التسلسل المتقدم للغاية. تفاعلي تقييد موقع التحليلات .
المقال كامل >>>

تقدم CLC bio مجموعة واسعة من حلول المعلوماتية الحيوية ذات المستوى العالمي: من تحليل التسلسل المتقدم للغاية. تقييد موقع كشف. يعكس .
المقال كامل >>>

. المناطق في Microsoft Internet Explorer ، وكيفية تكوين مستويات مختلفة من الأمان للويب المواقع التي تزورها. . موقع الى محدد المواقع منطقة، .
المقال كامل >>>

يشير تقييد المواقع من إنزيمات Fermentas الحساسة (الانقسام. لا يوجد تقييد المواقع في PhiX174 DNA للأنزيمات التالية:.
المقال كامل >>>

يشير تقييد المواقع من إنزيمات Fermentas الحساسة (الانقسام. لا يوجد تقييد المواقع في M13mp18 DNA للأنزيمات التالية:.
المقال كامل >>>

تقييد موقع المرادفات تقييد موقع المتضادات. معلومات حول تقييد موقع . تقييد-موقع تعدد الأشكال. تقييد. تقييدية.
المقال كامل >>>

محدد موقع. هذه موقع لاستخدام موظفي مجلس شمال شرق جورجيا ، بوي. المعلومات السرية أو الخاصة الواردة على هذا الويب موقع. .
المقال كامل >>>

توفر هذه المقالة تفاصيل حول منع الإعلانات غير المرغوب فيها واللافتات والنوافذ المنبثقة والطفيليات والخاطفين ومحركات البحث ، من خلال وضعها في محدد منطقة
المقال كامل >>>

تحليل التسلسلات المنحلة تقييد خرائط التسلسل. يرجى توضيح كيف تريد أن يكون تقييد المواقع عرض. خريطه ل تقييد المواقع .
المقال كامل >>>

يمكنك أن ترى قائمتنا من محدد المواقع كبيرة جدا. . دعنا نضيف ملف موقع الى محدد المواقع قائمة. لاحظ تنسيق الإدخال. .
المقال كامل >>>

كيف يجد راكبو الأمواج طريقهم في أوقات الحرب إلى محدد أو رقابة المواقع . كلاهما يملكان محدد الإصدارات المجانية. هؤلاء المواقع إخفاء موقعك وحمايته.
المقال كامل >>>

المواقع سيتم وضعها في منطقة أمنية مشددة بعد ذلك محدد في الوصول. أنت محمي إذا أ موقع هو في الخاص بك محدد منطقة. .
المقال كامل >>>

طول تقييد التعرف على المواقع يختلف: إنزيمات EcoRI و SacI و. مختلف تقييد يمكن أن يكون للإنزيمات نفس الاعتراف موقع - هذه الانزيمات.
المقال كامل >>>


منظمات تشوير البروتين G ، الجزء ب

باتريسيا توسيتي ، كاثلين دنلاب ، في طرق في علم الإنزيمات ، 2004

إنتاج الفيروسات القهقرية المختصة بالنسخ المتماثل.

أ 5 ′ Xba موقع التقييد الأول (TCT AGA) متبوعًا بتسلسل ملحقات الترجمة / النسخ (CCA CGT TGG CCA GGC GGT AGC TGG GAC GTG CAG CCG ACC ACC) وحلقة 3 HA (TAC GAC GTG CCC GAC TAC GCC) متبوعة بإيقاف كودون (TAG) وأ هينتم تصميم موقع تقييد dIII (AAG CTT) داخل الإطار إلى cDNAs المتغير RGS3 بواسطة PCR ، باستخدام بادئات تحمل التسلسلات المناسبة. يتم بعد ذلك هضم نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل واستنساخها في إطار في ملف Xbaأنا/هينمواقع dIII لمحول البلازميد Cla12 NCO. يتم بعد ذلك استئصال تسلسل الفائدة من محول البلازميد بواسطة كلاأنا الهضم ويتم استنساخه من الباطن بشكل غير مباشر في كلاأنا موقع المتغيرات الفيروسية القهقرية RCASBP للمجموعة الفرعية B (كلا البلازميدات كانت هدية سخية من الدكتورة دونا فيكيتي ، جامعة بوردو ، ويست لافاييت ، إنديانا). يتم إجراء جميع عمليات الربط باستخدام مجموعة ربط الحمض النووي السريع من Boehringer Mannheim (Indianapolis ، IN) ، وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة & # x27s. إنزيمات التقييد مأخوذة من نيو إنجلاند بيولابس (بيفرلي ، ماساتشوستس). يتم تحديد التركيبات الموجهة بشكل صحيح بواسطة PCR والتسلسل.


يمكنك أيضًا تصفية الإنزيمات حسب مكان أو عدد المرات التي تقطع فيها على التسلسل. على سبيل المثال ، يمكنك التصفية لرؤية الإنزيمات الفردية أو المزدوجة. يمكنك أيضًا رؤية الإنزيمات التي تقطع أي مكان خارج اختيارك الحالي.

انقر فوق رمز المقص مرة أخرى لإغلاق لوحة Digests. انقر نقرًا مزدوجًا فوق موقع مقطوع على خريطة التسلسل ، ولاحظ أن اللوحة تفتح تلقائيًا لإظهار مزيد من المعلومات حول الإنزيم.


المناعة الذاتية البكتيرية بسبب نظام تعديل تقييد

تمثل أنظمة تعديل القيود (RM) نظامًا بيولوجيًا ضئيلًا وواسع الانتشار للتمييز الذاتي / غير الذاتي في بدائيات النوى [1] ، والذي يحمي العوائل من الحمض النووي الخارجي [2]. تعتمد الآلية على التوازن بين ميثيل ترانسفيراز (M) و نوكلياز التقييد المشابه (R). يقوم M بتمييز الحمض النووي الداخلي باعتباره ذاتيًا عن طريق ميثلة متواليات DNA محددة قصيرة تسمى مواقع التقييد ، في حين يتعرف R على مواقع التقييد غير الميثيلية على أنها غير ذاتية وتقدم فاصلًا مزدوجًا للحمض النووي [3]. مواقع التقييد ممثلة تمثيلا ناقصا بشكل ملحوظ في جينومات بدائية النواة [4-7] ، مما يشير إلى أن آلية التمييز غير كاملة وتؤدي في بعض الأحيان إلى المناعة الذاتية بسبب انقسام الحمض النووي الذاتي (تقييد ذاتي) [8]. علاوة على ذلك ، يمكن لأنظمة RM تعزيز إعادة تركيب الحمض النووي [9] والمساهمة في التباين الجيني في التجمعات الميكروبية ، وبالتالي تسهيل التطور التكيفي [10]. ومع ذلك ، لم يتم اكتشاف انقسام الحمض النووي الذاتي بواسطة أنظمة RM كعناصر تشكل جينومات بدائية النواة بشكل مباشر ، وسببها وتواترها ونتائجها غير معروفة. نحدد كميًا التقييد الذاتي الناجم عن نظامي RM من الإشريكية القولونية ووجدنا أنه بالاتفاق مع مستويات تجنب موقع التقييد ، فإن EcoRI ، ولكن ليس EcoRV ، يشق الحمض النووي الذاتي بمعدل قابل للقياس. التقييد الذاتي هو عملية عشوائية ، والتي تحفز مؤقتًا استجابة SOS ، ويتبعها إصلاح الحمض النووي ، والحفاظ على قابلية الخلية للحياة. وجدنا أن أنظمة RM ذات الكفاءة التقييدية الأعلى ضد عدوى العاثيات تظهر معدل أعلى من التقييد الذاتي ، وأن هذا المعدل يمكن زيادته أكثر من خلال عدم التوازن العشوائي بين R و M. تحدد نتائجنا الضوضاء الجزيئية في أنظمة RM كعامل تشكيل بدائية النواة الجينوم.


ترددات مواقع الحظر

يلخص الجدول أدناه الترددات التي تحدث بها مواقع نوكلياز التقييد في جزيئات الحمض النووي الشائعة الاستخدام. يمكن العثور على خرائط تقييد مفصلة في تسلسل الحمض النووي والخرائط. تم تحديد المواقع المدرجة في هذه الجداول من خلال تحليل الكمبيوتر للتسلسلات المنشورة. على الرغم من أننا حاولنا التأكد من دقتها ، إلا أنه لم يتم تأكيد المواقع بالضرورة عن طريق التجريب. عندما يتم عرض نفس الخصوصية بواسطة عدة إنزيمات ، يتم سرد الموقع باسم الإنزيم المتاح من New England Biolabs. يتم سرد الإنزيمات الأخرى بنفس الخصوصية في جدول المتشابهات المتشابهة. يتم كتابة تسلسل التعرف 5 & حاد إلى 3 & حاد.

DNASU هو مستودع مركزي لاستنساخ ومجموعات البلازميد التي قد تكون مفيدة أيضًا.

إنزيم تسلسل التعرف Adeno 2 لامدا ** M13mp18 * pBR322 pKLAC2 pMAL-p5x pSNAPf pTXB1 pTYB21 pUC19 T7
آاتي GACGT / C. 3 10 0 1 0 0 5 1 0 1 1
أباسي CNNNNNNNNNNN / NNNNNNNNNG
AccI GT / MKAC 17 9 1 2 5 1 2 5 3 1 33
Acc65I G / GTACC 8 2 1 0 0 0 2 0 1 1 5
AciI CCGC (-3 / -1) 582 516 42 67 81 80 75 102 92 34 199
AclI AA / CGTT 3 7 2 4 2 5 3 12 9 2 19
AcuI CTGAAG (16/14) 23 40 0 2 8 4 5 2 2 2 1
AfeI AGC / GCT 13 2 1 4 0 2 0 1 2 0 0
AflII ج / تاغ 4 3 0 0 0 0 0 0 0 0 19
AflIII A / CRYGT 25 20 3 1 4 2 5 3 4 1 23
العمر أنا § أ / CCGGT 5 13 0 0 1 0 1 1 0 0 2
AgeI-HF® أ / CCGGT 5 13 0 0 1 0 1 1 0 0 2
عهد GACNNN / NNGTC 9 9 0 1 1 2 1 2 2 1 14
AleI-v2 CACNN / NNGTG 10 20 1 0 1 0 1 0 2 0 8
ألوي AG / CT 158 143 27 17 38 28 27 30 34 16 140
AlwI جاتك (4/5) 35 58 3 12 18 12 20 15 16 10 1
ألوني CAGNNN / CTG 25 41 1 1 5 2 4 1 2 1 15
ابي GGGCC / C. 12 1 0 0 0 1 1 1 1 0 0
أبالي G / TGCAC 7 4 0 3 3 6 4 4 4 3 1
القرد G / CWGC 179 199 10 21 27 25 20 27 29 12 116
ApoI § R / AATTY 29 58 11 0 19 5 3 5 7 1 13
ApoI-HF R / AATTY 29 58 11 0 19 5 3 5 7 1 13
تصاعدي GG / CGCGCC 2 2 0 0 0 0 1 0 0 0 0
AseI AT / TAAT 3 17 7 1 5 4 7 10 4 3 12
عاصي GCGAT / CGC 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
افاي C / YCGRG 40 8 2 1 2 1 2 3 1 1 4
افي G / GWCC 73 35 1 8 7 9 6 6 8 2 54
أفري C / CTAGG 2 2 0 0 0 0 1 0 0 0 3
BaeGI GKGCM / ج 45 10 1 3 8 8 8 6 5 3 16
باي (10/15) ACNNNNGTAYC (12/7) 5 10 3 0 1 0 0 0 1 0 3
بامهي § G / GATCC 3 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
BamHI-HF® G / GATCC 3 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
باني G / GYRCC 57 25 7 9 7 4 8 8 12 4 33
باني GRGCY / C. 57 7 2 2 5 2 5 3 6 1 1
BBSI § GAAGAC (2/6) 27 24 0 3 3 3 2 4 4 0 38
BbsI-HF ® GAAGAC (2/6) 27 24 0 3 3 3 2 4 4 0 38
BbvCI CCTCAGC (-5 / -2) 9 7 2 0 0 0 0 0 0 0 10
BbvI GCAGC (8/12) 179 199 10 21 27 25 20 27 29 12 116
BccI CCATC (4/5) 62 145 14 9 22 16 8 14 25 3 121
BceAI ACGGC (12/14) 80 115 7 3 13 11 8 13 10 2 47
BcgI (10/12) CGANNNNNNTGC (12/10) 10 28 0 3 6 4 1 4 6 1 19
بكيفي GTATCC (6/5) 9 26 0 2 3 4 3 4 4 2 23
BclI § T / جاتكا 5 8 0 0 2 2 1 1 2 0 1
BclI-HF T / جاتكا 5 8 0 0 2 2 1 1 2 0 1
BcoDI GTCTC (1/5) 60 37 5 3 11 8 4 8 9 4 95
BfaI ج / تاغ 54 13 5 5 19 3 14 8 8 4 60
BfuAI ACCTGC (4/8) 39 41 3 1 5 4 4 2 3 1 18
BglI GCCNNNN / NGGC 20 29 1 3 3 1 7 2 3 2 2
BglII أ / جاتكت 11 6 1 0 1 1 2 0 2 0 1
أنا GC / TNAGC 8 6 0 0 0 1 0 1 1 0 20
بمغبي كاكجتك (-3 / -3) 15 17 0 0 1 1 2 0 0 0 8
بمري ACTGGG (5/4) 22 4 1 5 2 5 11 8 2 6
BMTI § GCTAG / ج 4 1 0 1 4 0 1 1 1 0 1
BmtI-HF® GCTAG / سي 4 1 0 1 4 0 1 1 1 0 1
أنا CTGGAG (16/14) 32 25 2 4 3 4 1 5 6 1 23
BpuEI CTTGAG (16/14) 19 13 4 6 7 5 9 7 9 4 56
Bpu10I CCTNAGC (-5 / -2) 23 19 4 1 0 1 2 0 2 0 39
ساعي YAC / GTR 22 14 5 1 4 0 3 2 4 0 35
بصبي GATNN / NNATC 2 21 2 1 2 2 1 1 3 0 7
بساهى GR / CGYC 44 40 1 6 6 5 8 12 7 3 8
BsaI-HF®v2 GGTCTC (1/5) 18 2 0 1 3 2 2 2 2 1 29
BsaJI C / CNNGG 234 105 9 8 18 10 17 15 15 5 85
BsaWI W / CCGGW 28 81 6 5 8 7 5 8 6 3 32
BsaXI (9/12) ACNNNNNCTCC (10/7) 29 19 4 0 3 1 1 2 3 1 12
BseRI GAGGAG (10/8) 63 19 1 0 2 0 3 0 0 0 13
BseYI CCCAGC (-5 / -1) 31 32 3 2 3 4 5 4 4 1 29
بسجي GTGCAG (16/14) 34 41 0 1 4 6 3 5 4 0 21
BsiEI CGRY / CG 50 22 3 7 11 8 6 9 8 5 17
بشكاي GWGCW / C. 38 28 3 8 8 9 9 7 7 5 24
BsiWI § ج / GTACG 4 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0
BsiWI-HF ® ج / GTACG 4 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0
BSLI CCNNNNN / NNGG 216 176 17 20 18 16 26 31 25 6 90
BsmAI GTCTC (1/5) 60 37 5 3 11 8 8 10 4 95
BsmBI- الإصدار 2.0 CGTCTC 21 14 1 1 2 2 0 2 2 2 16
BsmFI GGGAC (10/14) 59 38 2 4 4 1 5 4 6 0 46
بسمي GAATGC (1 / -1) 10 46 1 1 3 1 5 1 0 0 15
BsoBI C / YCGRG 40 8 2 1 2 1 2 3 1 1 4
BspCNI CTCAG (9/7) 75 80 24 7 10 10 9 20 16 5 142
BspDI AT / CGAT 2 15 2 1 2 0 0 0 0 0 3
بسبي T / CCGGA 8 24 0 1 1 2 0 1 1 0 0
BspHI T / كاتجا 3 8 1 4 2 1 2 2 3 3 13
أنا GDGCH / C. 105 38 5 10 16 11 15 11 12 5 40
BspMI ACCTGC (4/8) 39 41 3 1 5 4 4 2 3 1 18
BspQI جي سي تي سي تي سي تي سي (1/4) 7 10 0 1 2 1 3 1 1 1 4
بسربي CCGCTC (-3 / -3) 28 17 4 2 6 4 6 9 5 3 17
BSRDI GCAATG (2/0) 14 44 3 2 7 4 4 4 4 2 18
BSRFI-v2.1.0 R / CCGGY 40 61 1 7 9 2 6 11 9 1 3
BSRGI § T / GTACA 5 5 1 0 1 0 1 1 2 0 13
BsrGI-HF® T / GTACA 5 5 1 0 1 0 1 1 2 0 13
بسري ACTGG (1 / -1) 86 110 19 18 23 26 19 32 28 11 118
BssHII G / CGCGC 52 6 0 0 1 2 2 1 1 0 1
الإصدار الثاني من BssSI كاكجاج (-5 / -1) 11 8 0 3 5 3 4 2 4 3 31
بستابي GCANNNN / NTGC 20 34 0 2 3 2 0 3 2 1 12
BstBI TT / CGAA 1 7 0 0 2 0 0 0 1 0 7
BstEII § G / GTNACC 10 13 0 0 1 1 0 1 1 0 1
BstEII-HF® G / GTNACC 10 13 0 0 1 1 2 1 1 0 1
BstNI CC / WGG 136 71 7 6 15 14 19 19 14 5 2
BstUI CG / CG 303 157 17 23 26 31 19 41 35 10 65
BstXI CCANNNNN / NTGG 10 13 0 0 2 4 1 4 3 0 11
BstYI ص / جاتسي 22 21 2 8 12 9 11 10 12 7 2
BstZ17I-HF ® GTATAC 3 3 0 1 3 0 1 1 1 0 8
Bsu36I CC / TNAGG 7 2 1 0 1 1 1 0 0 0 30
BtgI C / CRYGG 82 46 2 2 4 3 6 1 4 0 26
بتغزي GCGATG (10/14) 23 45 4 3 4 6 6 4 3 0 24
BtsCI GGATG (2/0) 78 150 4 12 20 17 7 12 18 5 97
بتسيموتي CAGTG (2/0) 20
BtsI-v2 GCAGTG (2/0) 22 34 1 2 7 5 5 4 4 3 20
Cac8I GCN / NGC 285 238 28 31 33 32 41 49 42 14 104
CLI AT / CGAT 2 15 2 1 2 0 0 0 0 0 3
CspCI (11/13) CAANNNNNGTGG (12/10) 6 7 1 0 1 0 1 0 0 0 9
CviAII ج / ATG 183 181 14 26 38 23 21 23 31 11 148
CviKI-1 RG / قبرصي 680 692 103 73 131 86 119 112 121 45 562
CviQI جي / تاك 83 113 19 3 15 7 14 6 11 3 168
DdeI C / TNAG 97 104 30 8 17 11 11 20 19 6 282
DpnI GA / TC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
DpnII / GATC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
دراي TTT / AAA 12 13 5 3 5 1 6 3 2 3 9
DraIII-HF® CACNNN / GTG 10 10 1 0 2 0 6 1 1 0 16
DrdI GACNNNN / NNGTC 6 3 1 2 5 2 2 4 4 2 11
EaeI نعم / GGCCR 70 39 3 6 10 5 15 4 8 3 2
EagI-HF® ج / GGCCG 19 2 0 1 4 1 2 2 2 0 0
الأذن CTCTTC (1/4) 29 34 2 2 11 6 4 3 5 3 46
EciI GGCGGA (11/9) 29 32 2 4 6 6 8 9 8 3 2
ايكو 53 كي GAG / CTC 16 2 1 0 2 1 2 0 1 1 0
EcoNI CCTNN / NNNAGG 10 9 0 1 3 0 0 2 1 0 1
إيكو 109 أ RG / GNCCY 44 3 0 4 1 2 5 1 3 1 22
EcoP15I CAGCAG (25/27) 50 72 4 7 7 10 6 6 5 3 36
EcoRI § G / AATTC 5 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
EcoRI-HF® G / AATTC 5 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
EcoRV § GAT / ATC 9 21 0 1 1 1 1 1 3 0 0
EcoRV-HF® GAT / ATC 9 21 0 1 1 1 1 1 3 0 0
Esp3I CGTCTC (1/5) 21 14 1 1 2 2 0 2 2 2 16
فات / CATG 183 181 14 26 38 23 21 23 31 11 148
FauI مجلس التعاون الجمركي (4/6) 147 90 10 10 14 17 11 28 22 5 24
Fnu4HI GC / NGC 411 380 17 42 52 42 47 49 52 19 156
فوكي جاتج (9/13) 78 150 4 12 20 17 7 12 18 5 97
FseI GGCCGG / CC 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
FspEI CC (12/16)
FspI TGC / GCA 17 15 1 4 3 2 2 1 2 2 7
هايي RGCGC / Y. 76 48 6 11 6 9 3 7 12 3 26
هايييي GG / CC 216 149 15 22 31 23 36 34 36 11 68
HgaI GACGC (5/10) 87 102 7 11 10 12 7 20 15 4 70
HhaI GCG / ج 375 215 26 31 36 39 41 46 17 103
HincII GTY / RAC 25 35 1 2 9 7 4 7 6 1 61
HindIII § أ / AGCTT 12 6 1 1 1 1 4 0 2 1 0
HindIII-HF® أ / AGCTT 12 6 1 1 1 1 4 0 2 1 0
HinfI G / ANTC 72 148 26 10 31 9 11 16 20 6 218
HinP1I G / CGC 375 215 26 31 36 39 27 41 46 17 103
هبا GTT / AAC 6 14 0 0 3 1 1 1 2 0 18
HpaII C / CGG 171 328 18 26 32 25 24 50 35 13 58
HphI GGTGA (8/7) 99 168 18 12 15 19 14 21 20 7 102
HpyAV CCTTC (6/5) 84 106 14 10 24 14 11 16 20 6 110
HpyCH4III ACN / GT 122 187 31 14 25 20 15 18 22 8 174
HpyCH4IV A / CGT 83 143 22 10 21 10 19 23 22 5 170
HpyCH4V TG / CA 207 273 18 21 39 28 30 26 27 13 116
Hpy188I TCN / GA 80 170 31 15 24 19 17 19 28 10 153
Hpy99I CGWCG / 61 102 8 9 14 9 13 18 16 5 29
Hpy166II GTN / NAC 116 125 10 8 29 20 13 27 24 5 199
Hpy188III TC / NNGA 103 185 28 19 32 22 25 27 28 13 173
I- سيوي تاكتاتاكجتككتاجتاجكجا (-9 / -13) 0 0 0 0 0 0
أنا SceI تاجاتاكاجتات (-9 / -13) 0 0 0 0 0 0
كاسي G / GCGCC 20 1 1 4 1 1 1 1 4 1 2
KpnI § GGTAC / سي 8 2 1 0 0 0 2 0 1 1 5
KpnI-HF® GGTAC / سي 8 2 1 0 0 0 2 0 1 1 5
LpnPI CCDG (10/14)
مبوي / GATC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
مبوي GAAGA (8/7) 113 130 10 11 38 15 14 14 18 8 140
MfeI § ج / AATTG 4 8 0 0 2 1 2 1 1 0 8
MfeI-HF® ج / AATTG 4 8 0 0 2 1 2 1 1 0 8
MluCI / AATT 87 189 62 8 43 22 19 31 44 7 79
MluI § A / CGCGT 5 7 0 0 0 1 2 2 1 0 1
MluI-HF® A / CGCGT 5 7 0 0 0 1 2 2 1 0 1
أنا GAGTC (5/5) 40 61 8 4 17 5 6 11 10 4 115
ممي TCCRAC (20/18) 25 18 3 4 8 3 5 4 4 2 33
MnlI CCTC (7/6) 397 262 62 26 56 24 41 35 39 13 342
ماجستير TGG / CCA 17 18 1 1 0 1 2 0 1 0 2
MseI T / TAA 115 195 63 15 41 24 23 32 39 13 207
مسلي CAYNN / NNRTG 35 62 3 7 10 10 6 7 9 3 38
MspA1I CMG / CKG 95 75 4 6 14 11 8 10 12 6 35
MspI C / CGG 171 328 18 26 32 25 24 50 35 13 58
MspJI CNNR (9/13)
MwoI GCNNNNN / NNGC 391 347 19 34 33 30 42 41 43 13 170
ناي دول مجلس التعاون الخليجي / GGC 13 1 1 4 3 0 2 5 5 0 0
نار GG / CGCC 20 1 1 4 1 1 1 1 4 1 2
ملحوظة كتكاجك 9 7 2 0 0 0 0 0 0 10
ملحوظة GAATGC 10 46 1 1 3 1 1 0 0 15
ملحوظة: BSRDI GCAATG 14 44 3 2 7 4 4 4 2 18
ملحوظة كاكجاج 11 8 0 3 5 3 2 4 3 31
ملحوظة GCAGTG 22 34 1 2 7 5 4 4 3 20
إن سي آي CC / SGG 97 114 4 10 10 13 9 27 15 7 9
NcoI § C / CATGG 20 4 0 0 1 1 3 0 1 0 1
NcoI-HF® C / CATGG 20 4 0 0 1 1 3 0 1 0 1
NdeI CA / TATG 2 7 3 1 1 1 1 1 1 1 7
نجوميف G / CCGGC 13 1 1 4 3 0 2 5 5 0 0
NheI-HF® G / CTAGC 4 1 0 1 4 0 1 1 0 1
NlaIII كاتج / 183 181 14 26 38 23 21 23 31 11 148
نلايف GGN / NCC 178 82 18 24 22 14 20 22 30 11 99
NmeAIII GCCGAG (21/19) 17 8 0 3 2 3 2 2 4 1 14
لاأنا § GC / GGCCGC 7 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0
NotI-HF® GC / GGCCGC 7 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0
NruI § TCG / CGA 5 5 0 1 1 0 1 1 0 0 3
NruI-HF® TCG / CGA 5 5 0 1 1 0 1 1 0 0 3
NsiI § ATGCA / ت 9 14 0 0 6 0 1 0 0 0 8
NsiI-HF® ATGCA / ت 9 14 0 0 6 0 1 0 0 0 8
NspI RCATG / Y 41 32 6 4 9 3 5 5 5 3 24
نت GGATC (4 / -5) 35 58 3 12 18 12 15 16 10 1
Nt.BbvCI CCTCAGC (-5 / -7) 9 7 2 0 0 0 0 0 0 10
Nt.BsmAI GTCTC (1 / -5) 60 37 5 3 11 8 8 10 4 95
Nt.BspQI جي سي تي سي تي سي تي سي (1 / -7) 7 10 0 1 2 1 1 1 1 4
NT BstNBI GAGTC (4 / -5) 40 61 8 4 17 5 6 11 10 4 115
Nt.CviPII (0 / -1) CCD 4148 4641 570 457 806 570 609 716 729 251 3575
باك TTAAT / TAA 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1
PaeR7I C / TCGAG 6 1 0 0 1 0 1 1 0 0 0
PaqCI كاككتجك (4/8) 9 12 0 0 0 0 1 0 0 0 5
PCI أ / كاتجت 9 2 3 1 3 1 2 1 1 1 6
PflFI GACN / NNGTC 12 2 0 1 1 1 1 1 2 0 1
PflMI CCANNNN / NTGG 18 14 0 2 3 1 5 2 2 0 8
PI-PspI تجكاكاكاجكتاتاتججتاتتاتجت (-13 / -17) 0 0 0 0 0 0
PI-SceI أتكتاتجتكججتجكجاجاجاجاجتات (-15 / -19) 0 0 0 0 0 0
PleI GAGTC (4/5) 40 61 8 4 17 5 6 11 10 4 115
بلوتي جي جي سي جي سي / سي
PmeI GTTT / AAAC 1 2 0 0 0 0 1 1 0 0 2
PmlI كاك / جي تي جي 10 3 0 0 0 0 1 0 1 0 1
PpuMI RG / GWCCY 23 3 0 2 1 2 1 0 0 0 12
PshAI GACNN / NNGTC 2 7 0 1 1 0 0 1 2 0 6
بسيي- v2 TTA / TAA 4 12 2 0 2 1 1 1 1 0 5
PspGI / CCWGG 136 71 7 6 15 14 19 19 14 5 2
بسومي G / GGCCC 12 1 0 0 0 1 1 1 1 0 0
PspXI VC / TCGAGB 3 1 0 0 0 0 1 1 0 0 0
PstI § CTGCA / G 30 28 1 1 3 1 4 1 1 1 0
PstI-HF® CTGCA / G 30 28 1 1 3 1 4 1 1 1 0
PvuI § CGAT / CG 7 3 1 1 2 1 1 2 2 0
PvuI-HF® CGAT / CG 7 3 1 1 3 2 1 1 2 2 0
PvuII § CAG / CTG 24 15 3 1 3 3 3 3 4 2 3
PvuII-HF® CAG / CTG 24 15 3 1 3 3 3 3 4 2 3
RsaI GT / AC 83 113 19 3 15 7 14 6 11 3 168
رسري CG / GWCCG 2 5 0 0 0 1 1 0 0 0 1
ساسي § GAGCT / ج 16 2 1 0 2 1 2 0 1 1 0
SacI-HF® GAGCT / ج 16 2 1 0 2 1 2 0 1 1 0
SacII CCGC / GG 33 4 0 0 2 0 1 1 1 0 0
سالي § G / TCGAC 3 2 1 1 1 1 1 4 1 1 0
SalI-HF® G / TCGAC 3 2 1 1 1 1 1 4 1 1 0
ساب جي سي تي سي تي سي تي سي (1/4) 7 10 0 1 2 1 3 1 1 1 4
Sau3AI / GATC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
Sau96I G / GNCC 164 74 4 15 14 20 21 26 24 6 79
SbfI § CCTGCA / GG 3 5 1 0 1 1 1 0 1 1 0
SbfI-HF® CCTGCA / GG 3 5 1 0 1 1 1 0 1 1 0
ScaI-HF® AGT / ACT 5 5 0 1 2 1 1 2 1 4
ScrFI CC / NGG 233 185 11 16 25 27 28 46 29 12 11
الجنس أ / CCWGGT 9 5 0 0 3 0 0 0 0 0 0
سفيني GCATC (5/9) 85 169 7 22 18 20 17 23 19 8 96
SfcI C / TRYAG 47 38 7 4 9 4 10 6 8 4 48
SfiI GGCCNNNN / NGGCC 3 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1
SFOI GGC / دول مجلس التعاون الخليجي 20 1 1 4 1 1 1 1 4 1 2
SgrAI CR / CCGGYG 6 6 0 1 0 0 0 1 1 0 0
SmaI مجلس التعاون الجمركي / GGG 12 3 1 0 1 0 1 0 0 1 0
SmlI ج / تايراغ 29 17 4 6 8 5 10 8 9 4 75
سنابي TAC / GTA 0 1 1 0 1 0 1 0 0 0 13
SpeI § أ / CTAGT 3 0 0 0 0 0 1 1 1 0 2
SpeI-HF® أ / CTAGT 3 0 0 0 0 0 1 1 1 0 2
SphI § GCATG / ج 8 6 1 1 2 0 2 2 1 1 0
SphI-HF® GCATG / ج 8 6 1 1 2 0 2 2 1 1 0
SrfI GCCC / GGGC
SspI § AAT / ATT 5 20 6 1 6 2 1 3 5 1 6
SspI-HF® AAT / ATT 5 20 6 1 6 2 1 3 5 1 6
ستوي AGG / CCT 11 6 0 0 1 0 0 1 1 0 1
StyD4I / CCNGG 233 185 11 16 25 27 28 46 29 12 11
StyI-HF® C / CWWGG 44 10 0 1 4 1 4 2 4 0 36
سوي ATTT / AAAT 1 0 1 0 0 0 1 1 1 0 1
TaqI-v2 T / CGA 50 121 12 7 32 16 15 22 17 4 111
TfiI G / AWTC 32 87 18 6 14 4 5 5 10 2 103
TseI G / CWGC 179 199 10 21 27 25 20 27 29 12 116
ملعقة شاي 45 / GTSAC 73 81 9 9 9 7 5 12 13 4 108
TspMI C / CCGGG 12 3 1 0 1 0 1 0 0 1 0
تسبري NNCASTGNN / 83 119 9 11 22 14 16 16 15 10 94
Tth111I GACN / NNGTC 12 2 0 1 1 1 1 1 2 0 1
XbaI T / CTAGA 5 1 1 0 1 0 1 1 1 1 3
XcmI CCANNNNN / NNNNTGG 14 12 0 0 1 3 0 3 4 0 8
XhoI C / TCGAG 6 1 0 0 1 0 1 1 0 0 0
XmaI C / CCGGG 12 3 1 0 1 0 1 0 0 1 0
XmnI GAANN / NNTTC 5 24 2 2 3 1 3 7 2 1 12
زراي GAC / GTC 3 10 0 1 0 0 5 1 0 1 1

& القسم نسخة HF من هذا الإنزيم متاح.

* بالنسبة إلى M13mp18 ، سيتم قطع المناطق مزدوجة الشريطة فقط.
** يشير إلى ركيزة الحمض النووي من النوع البري Hind III بها 6 مواقع تقييد على الحمض النووي لامبدا من النوع البري ، بينما يحتوي Lambda's mutant (Lambda DNA، NEB # N3011) على 7 مواقع Hind III.


ترددات مواقع الحظر

يلخص الجدول أدناه الترددات التي تحدث بها مواقع نوكلياز التقييد في جزيئات الحمض النووي الشائعة الاستخدام. يمكن العثور على خرائط تقييد مفصلة في تسلسل الحمض النووي والخرائط. تم تحديد المواقع المدرجة في هذه الجداول من خلال تحليل الكمبيوتر للتسلسلات المنشورة. على الرغم من أننا حاولنا التأكد من دقتها ، إلا أنه لم يتم تأكيد المواقع بالضرورة عن طريق التجريب. عندما يتم عرض نفس الخصوصية بواسطة عدة إنزيمات ، يتم سرد الموقع باسم الإنزيم المتوفر من New England Biolabs. يتم سرد الإنزيمات الأخرى بنفس الخصوصية في جدول المتشابهات المتشابهة. يتم كتابة تسلسل التعرف 5 & حاد إلى 3 & حاد.

DNASU هو مستودع مركزي لاستنساخ ومجموعات البلازميد التي قد تكون مفيدة أيضًا.

إنزيم تسلسل التعرف Adeno 2 لامدا ** M13mp18 * pBR322 pKLAC2 pMAL-p5x pSNAPf pTXB1 pTYB21 pUC19 T7
آاتي GACGT / C. 3 10 0 1 0 0 5 1 0 1 1
أباسي CNNNNNNNNNNN / NNNNNNNNNG
AccI GT / MKAC 17 9 1 2 5 1 2 5 3 1 33
Acc65I G / GTACC 8 2 1 0 0 0 2 0 1 1 5
AciI CCGC (-3 / -1) 582 516 42 67 81 80 75 102 92 34 199
AclI AA / CGTT 3 7 2 4 2 5 3 12 9 2 19
AcuI CTGAAG (16/14) 23 40 0 2 8 4 5 2 2 2 1
AfeI AGC / GCT 13 2 1 4 0 2 0 1 2 0 0
AflII ج / تاغ 4 3 0 0 0 0 0 0 0 0 19
AflIII A / CRYGT 25 20 3 1 4 2 5 3 4 1 23
العمر أنا § أ / CCGGT 5 13 0 0 1 0 1 1 0 0 2
AgeI-HF® أ / CCGGT 5 13 0 0 1 0 1 1 0 0 2
عهد GACNNN / NNGTC 9 9 0 1 1 2 1 2 2 1 14
AleI-v2 CACNN / NNGTG 10 20 1 0 1 0 1 0 2 0 8
ألوي AG / CT 158 143 27 17 38 28 27 30 34 16 140
AlwI جاتك (4/5) 35 58 3 12 18 12 20 15 16 10 1
ألوني CAGNNN / CTG 25 41 1 1 5 2 4 1 2 1 15
ابي GGGCC / C. 12 1 0 0 0 1 1 1 1 0 0
أبالي G / TGCAC 7 4 0 3 3 6 4 4 4 3 1
ApeKI G / CWGC 179 199 10 21 27 25 20 27 29 12 116
ApoI § R / AATTY 29 58 11 0 19 5 3 5 7 1 13
ApoI-HF R / AATTY 29 58 11 0 19 5 3 5 7 1 13
تصاعدي GG / CGCGCC 2 2 0 0 0 0 1 0 0 0 0
AseI AT / TAAT 3 17 7 1 5 4 7 10 4 3 12
عاصي GCGAT / CGC 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
افاي C / YCGRG 40 8 2 1 2 1 2 3 1 1 4
افي G / GWCC 73 35 1 8 7 9 6 6 8 2 54
أفري C / CTAGG 2 2 0 0 0 0 1 0 0 0 3
BaeGI GKGCM / ج 45 10 1 3 8 8 8 6 5 3 16
باي (10/15) ACNNNNGTAYC (12/7) 5 10 3 0 1 0 0 0 1 0 3
بامهي § G / GATCC 3 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
BamHI-HF® G / GATCC 3 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
باني G / GYRCC 57 25 7 9 7 4 8 8 12 4 33
باني GRGCY / C. 57 7 2 2 5 2 5 3 6 1 1
BBSI § GAAGAC (2/6) 27 24 0 3 3 3 2 4 4 0 38
BbsI-HF ® GAAGAC (2/6) 27 24 0 3 3 3 2 4 4 0 38
BbvCI CCTCAGC (-5 / -2) 9 7 2 0 0 0 0 0 0 0 10
BbvI GCAGC (8/12) 179 199 10 21 27 25 20 27 29 12 116
BccI CCATC (4/5) 62 145 14 9 22 16 8 14 25 3 121
BceAI ACGGC (12/14) 80 115 7 3 13 11 8 13 10 2 47
BcgI (10/12) CGANNNNNNTGC (12/10) 10 28 0 3 6 4 1 4 6 1 19
بكيفي GTATCC (6/5) 9 26 0 2 3 4 3 4 4 2 23
BclI § T / جاتكا 5 8 0 0 2 2 1 1 2 0 1
BclI-HF T / جاتكا 5 8 0 0 2 2 1 1 2 0 1
BcoDI GTCTC (1/5) 60 37 5 3 11 8 4 8 9 4 95
BfaI ج / تاغ 54 13 5 5 19 3 14 8 8 4 60
BfuAI ACCTGC (4/8) 39 41 3 1 5 4 4 2 3 1 18
BglI GCCNNNN / NGGC 20 29 1 3 3 1 7 2 3 2 2
BglII أ / جاتكت 11 6 1 0 1 1 2 0 2 0 1
أنا GC / TNAGC 8 6 0 0 0 1 0 1 1 0 20
بمغبي كاكجتك (-3 / -3) 15 17 0 0 1 1 2 0 0 0 8
بمري ACTGGG (5/4) 22 4 1 5 2 5 11 8 2 6
BMTI § GCTAG / سي 4 1 0 1 4 0 1 1 1 0 1
BmtI-HF® GCTAG / سي 4 1 0 1 4 0 1 1 1 0 1
أنا CTGGAG (16/14) 32 25 2 4 3 4 1 5 6 1 23
BpuEI CTTGAG (16/14) 19 13 4 6 7 5 9 7 9 4 56
Bpu10I CCTNAGC (-5 / -2) 23 19 4 1 0 1 2 0 2 0 39
ساعي YAC / GTR 22 14 5 1 4 0 3 2 4 0 35
بصبي GATNN / NNATC 2 21 2 1 2 2 1 1 3 0 7
بساهى GR / CGYC 44 40 1 6 6 5 8 12 7 3 8
BsaI-HF®v2 GGTCTC (1/5) 18 2 0 1 3 2 2 2 2 1 29
BsaJI C / CNNGG 234 105 9 8 18 10 17 15 15 5 85
BsaWI W / CCGGW 28 81 6 5 8 7 5 8 6 3 32
BsaXI (9/12) ACNNNNNCTCC (10/7) 29 19 4 0 3 1 1 2 3 1 12
BseRI GAGGAG (10/8) 63 19 1 0 2 0 3 0 0 0 13
BseYI CCCAGC (-5 / -1) 31 32 3 2 3 4 5 4 4 1 29
بسجي GTGCAG (16/14) 34 41 0 1 4 6 3 5 4 0 21
BsiEI CGRY / CG 50 22 3 7 11 8 6 9 8 5 17
بشكاي GWGCW / C. 38 28 3 8 8 9 9 7 7 5 24
BsiWI § ج / GTACG 4 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0
BsiWI-HF ® ج / GTACG 4 1 0 0 0 1 0 1 0 0 0
BSLI CCNNNNN / NNGG 216 176 17 20 18 16 26 31 25 6 90
BsmAI GTCTC (1/5) 60 37 5 3 11 8 8 10 4 95
BsmBI- الإصدار 2.0 CGTCTC 21 14 1 1 2 2 0 2 2 2 16
BsmFI GGGAC (10/14) 59 38 2 4 4 1 5 4 6 0 46
بسمي GAATGC (1 / -1) 10 46 1 1 3 1 5 1 0 0 15
BsoBI C / YCGRG 40 8 2 1 2 1 2 3 1 1 4
BspCNI CTCAG (9/7) 75 80 24 7 10 10 9 20 16 5 142
BspDI AT / CGAT 2 15 2 1 2 0 0 0 0 0 3
بسبي T / CCGGA 8 24 0 1 1 2 0 1 1 0 0
BspHI T / كاتجا 3 8 1 4 2 1 2 2 3 3 13
أنا GDGCH / C. 105 38 5 10 16 11 15 11 12 5 40
BspMI ACCTGC (4/8) 39 41 3 1 5 4 4 2 3 1 18
BspQI جي سي تي سي تي سي تي سي (1/4) 7 10 0 1 2 1 3 1 1 1 4
بسربي CCGCTC (-3 / -3) 28 17 4 2 6 4 6 9 5 3 17
BSRDI GCAATG (2/0) 14 44 3 2 7 4 4 4 4 2 18
BSRFI-v2.1.0 R / CCGGY 40 61 1 7 9 2 6 11 9 1 3
BSRGI § T / GTACA 5 5 1 0 1 0 1 1 2 0 13
BsrGI-HF® T / GTACA 5 5 1 0 1 0 1 1 2 0 13
بسري ACTGG (1 / -1) 86 110 19 18 23 26 19 32 28 11 118
BssHII G / CGCGC 52 6 0 0 1 2 2 1 1 0 1
الإصدار الثاني من BssSI كاكجاج (-5 / -1) 11 8 0 3 5 3 4 2 4 3 31
بستابي GCANNNN / NTGC 20 34 0 2 3 2 0 3 2 1 12
BstBI TT / CGAA 1 7 0 0 2 0 0 0 1 0 7
BstEII § G / GTNACC 10 13 0 0 1 1 0 1 1 0 1
BstEII-HF® G / GTNACC 10 13 0 0 1 1 2 1 1 0 1
BstNI CC / WGG 136 71 7 6 15 14 19 19 14 5 2
BstUI CG / CG 303 157 17 23 26 31 19 41 35 10 65
BstXI CCANNNNN / NTGG 10 13 0 0 2 4 1 4 3 0 11
BstYI ص / جاتسي 22 21 2 8 12 9 11 10 12 7 2
BstZ17I-HF ® GTATAC 3 3 0 1 3 0 1 1 1 0 8
Bsu36I CC / TNAGG 7 2 1 0 1 1 1 0 0 0 30
BtgI C / CRYGG 82 46 2 2 4 3 6 1 4 0 26
بتغزي GCGATG (10/14) 23 45 4 3 4 6 6 4 3 0 24
BtsCI GGATG (2/0) 78 150 4 12 20 17 7 12 18 5 97
بتسيموتي CAGTG (2/0) 20
BtsI-v2 GCAGTG (2/0) 22 34 1 2 7 5 5 4 4 3 20
Cac8I GCN / NGC 285 238 28 31 33 32 41 49 42 14 104
CLI AT / CGAT 2 15 2 1 2 0 0 0 0 0 3
CspCI (11/13) CAANNNNNGTGG (12/10) 6 7 1 0 1 0 1 0 0 0 9
CviAII ج / ATG 183 181 14 26 38 23 21 23 31 11 148
CviKI-1 RG / قبرصي 680 692 103 73 131 86 119 112 121 45 562
CviQI جي / تاك 83 113 19 3 15 7 14 6 11 3 168
DdeI C / TNAG 97 104 30 8 17 11 11 20 19 6 282
DpnI GA / TC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
DpnII / GATC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
دراي TTT / AAA 12 13 5 3 5 1 6 3 2 3 9
DraIII-HF® CACNNN / GTG 10 10 1 0 2 0 6 1 1 0 16
DrdI GACNNNN / NNGTC 6 3 1 2 5 2 2 4 4 2 11
EaeI نعم / GGCCR 70 39 3 6 10 5 15 4 8 3 2
EagI-HF® ج / GGCCG 19 2 0 1 4 1 2 2 2 0 0
الأذن CTCTTC (1/4) 29 34 2 2 11 6 4 3 5 3 46
EciI GGCGGA (11/9) 29 32 2 4 6 6 8 9 8 3 2
ايكو 53 كي GAG / CTC 16 2 1 0 2 1 2 0 1 1 0
EcoNI CCTNN / NNNAGG 10 9 0 1 3 0 0 2 1 0 1
إيكو 109 أ RG / GNCCY 44 3 0 4 1 2 5 1 3 1 22
EcoP15I CAGCAG (25/27) 50 72 4 7 7 10 6 6 5 3 36
EcoRI § G / AATTC 5 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
EcoRI-HF® G / AATTC 5 5 1 1 1 1 1 1 1 1 0
EcoRV § GAT / ATC 9 21 0 1 1 1 1 1 3 0 0
EcoRV-HF® GAT / ATC 9 21 0 1 1 1 1 1 3 0 0
Esp3I CGTCTC (1/5) 21 14 1 1 2 2 0 2 2 2 16
فات / CATG 183 181 14 26 38 23 21 23 31 11 148
FauI مجلس التعاون الجمركي (4/6) 147 90 10 10 14 17 11 28 22 5 24
Fnu4HI GC / NGC 411 380 17 42 52 42 47 49 52 19 156
فوكي جاتج (9/13) 78 150 4 12 20 17 7 12 18 5 97
FseI GGCCGG / CC 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
FspEI CC (12/16)
FspI TGC / GCA 17 15 1 4 3 2 2 1 2 2 7
هايي RGCGC / Y. 76 48 6 11 6 9 3 7 12 3 26
هايييي GG / CC 216 149 15 22 31 23 36 34 36 11 68
HgaI GACGC (5/10) 87 102 7 11 10 12 7 20 15 4 70
HhaI GCG / ج 375 215 26 31 36 39 41 46 17 103
HincII GTY / RAC 25 35 1 2 9 7 4 7 6 1 61
HindIII § أ / AGCTT 12 6 1 1 1 1 4 0 2 1 0
HindIII-HF® أ / AGCTT 12 6 1 1 1 1 4 0 2 1 0
HinfI G / ANTC 72 148 26 10 31 9 11 16 20 6 218
HinP1I G / CGC 375 215 26 31 36 39 27 41 46 17 103
هبا GTT / AAC 6 14 0 0 3 1 1 1 2 0 18
HpaII C / CGG 171 328 18 26 32 25 24 50 35 13 58
HphI GGTGA (8/7) 99 168 18 12 15 19 14 21 20 7 102
HpyAV CCTTC (6/5) 84 106 14 10 24 14 11 16 20 6 110
HpyCH4III ACN / GT 122 187 31 14 25 20 15 18 22 8 174
HpyCH4IV A / CGT 83 143 22 10 21 10 19 23 22 5 170
HpyCH4V TG / CA 207 273 18 21 39 28 30 26 27 13 116
Hpy188I TCN / GA 80 170 31 15 24 19 17 19 28 10 153
Hpy99I CGWCG / 61 102 8 9 14 9 13 18 16 5 29
Hpy166II GTN / NAC 116 125 10 8 29 20 13 27 24 5 199
Hpy188III TC / NNGA 103 185 28 19 32 22 25 27 28 13 173
I- سيوي تاكتاتاكجتككتاجتاجكجا (-9 / -13) 0 0 0 0 0 0
أنا SceI تاجاتاكاجتات (-9 / -13) 0 0 0 0 0 0
كاسي G / GCGCC 20 1 1 4 1 1 1 1 4 1 2
KpnI § GGTAC / سي 8 2 1 0 0 0 2 0 1 1 5
KpnI-HF® GGTAC / سي 8 2 1 0 0 0 2 0 1 1 5
LpnPI CCDG (10/14)
مبوي / GATC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
مبوي GAAGA (8/7) 113 130 10 11 38 15 14 14 18 8 140
MfeI § ج / AATTG 4 8 0 0 2 1 2 1 1 0 8
MfeI-HF® ج / AATTG 4 8 0 0 2 1 2 1 1 0 8
MluCI / AATT 87 189 62 8 43 22 19 31 44 7 79
MluI § A / CGCGT 5 7 0 0 0 1 2 2 1 0 1
MluI-HF® A / CGCGT 5 7 0 0 0 1 2 2 1 0 1
أنا GAGTC (5/5) 40 61 8 4 17 5 6 11 10 4 115
ممي TCCRAC (20/18) 25 18 3 4 8 3 5 4 4 2 33
MnlI CCTC (7/6) 397 262 62 26 56 24 41 35 39 13 342
ماجستير TGG / CCA 17 18 1 1 0 1 2 0 1 0 2
MseI T / TAA 115 195 63 15 41 24 23 32 39 13 207
مسلي CAYNN / NNRTG 35 62 3 7 10 10 6 7 9 3 38
MspA1I CMG / CKG 95 75 4 6 14 11 8 10 12 6 35
MspI C / CGG 171 328 18 26 32 25 24 50 35 13 58
MspJI CNNR (9/13)
MwoI GCNNNNN / NNGC 391 347 19 34 33 30 42 41 43 13 170
ناي دول مجلس التعاون الخليجي / GGC 13 1 1 4 3 0 2 5 5 0 0
نار GG / CGCC 20 1 1 4 1 1 1 1 4 1 2
ملحوظة كتكاجك 9 7 2 0 0 0 0 0 0 10
ملحوظة GAATGC 10 46 1 1 3 1 1 0 0 15
ملحوظة: BSRDI GCAATG 14 44 3 2 7 4 4 4 2 18
ملحوظة كاكجاج 11 8 0 3 5 3 2 4 3 31
ملحوظة GCAGTG 22 34 1 2 7 5 4 4 3 20
إن سي آي CC / SGG 97 114 4 10 10 13 9 27 15 7 9
NcoI § C / CATGG 20 4 0 0 1 1 3 0 1 0 1
NcoI-HF® C / CATGG 20 4 0 0 1 1 3 0 1 0 1
NdeI CA / TATG 2 7 3 1 1 1 1 1 1 1 7
نجوميف G / CCGGC 13 1 1 4 3 0 2 5 5 0 0
NheI-HF® G / CTAGC 4 1 0 1 4 0 1 1 0 1
NlaIII كاتج / 183 181 14 26 38 23 21 23 31 11 148
نلايف GGN / NCC 178 82 18 24 22 14 20 22 30 11 99
NmeAIII GCCGAG (21/19) 17 8 0 3 2 3 2 2 4 1 14
لاأنا § GC / GGCCGC 7 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0
NotI-HF® GC / GGCCGC 7 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0
NruI § TCG / CGA 5 5 0 1 1 0 1 1 0 0 3
NruI-HF® TCG / CGA 5 5 0 1 1 0 1 1 0 0 3
NsiI § ATGCA / ت 9 14 0 0 6 0 1 0 0 0 8
NsiI-HF® ATGCA / ت 9 14 0 0 6 0 1 0 0 0 8
NspI RCATG / Y 41 32 6 4 9 3 5 5 5 3 24
نت GGATC (4 / -5) 35 58 3 12 18 12 15 16 10 1
Nt.BbvCI CCTCAGC (-5 / -7) 9 7 2 0 0 0 0 0 0 10
Nt.BsmAI GTCTC (1 / -5) 60 37 5 3 11 8 8 10 4 95
Nt.BspQI جي سي تي سي تي سي تي سي (1 / -7) 7 10 0 1 2 1 1 1 1 4
NT BstNBI GAGTC (4 / -5) 40 61 8 4 17 5 6 11 10 4 115
Nt.CviPII (0 / -1) CCD 4148 4641 570 457 806 570 609 716 729 251 3575
باك TTAAT / TAA 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1
PaeR7I C / TCGAG 6 1 0 0 1 0 1 1 0 0 0
PaqCI كاككتجك (4/8) 9 12 0 0 0 0 1 0 0 0 5
PCI أ / كاتجت 9 2 3 1 3 1 2 1 1 1 6
PflFI GACN / NNGTC 12 2 0 1 1 1 1 1 2 0 1
PflMI CCANNNN / NTGG 18 14 0 2 3 1 5 2 2 0 8
PI-PspI تجكاكاكاجكتاتاتججتاتتاتجت (-13 / -17) 0 0 0 0 0 0
PI-SceI أتكتاتجتكججتجكجاجاجاجاجتات (-15 / -19) 0 0 0 0 0 0
PleI GAGTC (4/5) 40 61 8 4 17 5 6 11 10 4 115
بلوتي جي جي سي جي سي / سي
PmeI GTTT / AAAC 1 2 0 0 0 0 1 1 0 0 2
PmlI كاك / جي تي جي 10 3 0 0 0 0 1 0 1 0 1
PpuMI RG / GWCCY 23 3 0 2 1 2 1 0 0 0 12
PshAI GACNN / NNGTC 2 7 0 1 1 0 0 1 2 0 6
بسيي- v2 TTA / TAA 4 12 2 0 2 1 1 1 1 0 5
PspGI / CCWGG 136 71 7 6 15 14 19 19 14 5 2
بسومي G / GGCCC 12 1 0 0 0 1 1 1 1 0 0
PspXI VC / TCGAGB 3 1 0 0 0 0 1 1 0 0 0
PstI § CTGCA / G 30 28 1 1 3 1 4 1 1 1 0
PstI-HF® CTGCA / G 30 28 1 1 3 1 4 1 1 1 0
PvuI § CGAT / CG 7 3 1 1 2 1 1 2 2 0
PvuI-HF® CGAT / CG 7 3 1 1 3 2 1 1 2 2 0
PvuII § CAG / CTG 24 15 3 1 3 3 3 3 4 2 3
PvuII-HF® CAG / CTG 24 15 3 1 3 3 3 3 4 2 3
RsaI GT / AC 83 113 19 3 15 7 14 6 11 3 168
رسري CG / GWCCG 2 5 0 0 0 1 1 0 0 0 1
ساسي § GAGCT / ج 16 2 1 0 2 1 2 0 1 1 0
SacI-HF® GAGCT / ج 16 2 1 0 2 1 2 0 1 1 0
SacII CCGC / GG 33 4 0 0 2 0 1 1 1 0 0
سالي § G / TCGAC 3 2 1 1 1 1 1 4 1 1 0
SalI-HF® G / TCGAC 3 2 1 1 1 1 1 4 1 1 0
ساب جي سي تي سي تي سي تي سي (1/4) 7 10 0 1 2 1 3 1 1 1 4
Sau3AI / GATC 87 116 6 22 35 23 31 24 29 15 6
Sau96I G / GNCC 164 74 4 15 14 20 21 26 24 6 79
SbfI § CCTGCA / GG 3 5 1 0 1 1 1 0 1 1 0
SbfI-HF® CCTGCA / GG 3 5 1 0 1 1 1 0 1 1 0
ScaI-HF® AGT / ACT 5 5 0 1 2 1 1 2 1 4
ScrFI CC / NGG 233 185 11 16 25 27 28 46 29 12 11
الجنس أ / CCWGGT 9 5 0 0 3 0 0 0 0 0 0
سفيني GCATC (5/9) 85 169 7 22 18 20 17 23 19 8 96
SfcI C / TRYAG 47 38 7 4 9 4 10 6 8 4 48
SfiI GGCCNNNN / NGGCC 3 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1
SFOI GGC / دول مجلس التعاون الخليجي 20 1 1 4 1 1 1 1 4 1 2
SgrAI CR / CCGGYG 6 6 0 1 0 0 0 1 1 0 0
SmaI مجلس التعاون الجمركي / GGG 12 3 1 0 1 0 1 0 0 1 0
SmlI ج / تايراغ 29 17 4 6 8 5 10 8 9 4 75
سنابي TAC / GTA 0 1 1 0 1 0 1 0 0 0 13
SpeI § أ / CTAGT 3 0 0 0 0 0 1 1 1 0 2
SpeI-HF® أ / CTAGT 3 0 0 0 0 0 1 1 1 0 2
SphI § GCATG / ج 8 6 1 1 2 0 2 2 1 1 0
SphI-HF® GCATG / ج 8 6 1 1 2 0 2 2 1 1 0
SrfI GCCC / GGGC
SspI § AAT / ATT 5 20 6 1 6 2 1 3 5 1 6
SspI-HF® AAT / ATT 5 20 6 1 6 2 1 3 5 1 6
ستوي AGG / CCT 11 6 0 0 1 0 0 1 1 0 1
StyD4I / CCNGG 233 185 11 16 25 27 28 46 29 12 11
StyI-HF® C / CWWGG 44 10 0 1 4 1 4 2 4 0 36
سوي ATTT / AAAT 1 0 1 0 0 0 1 1 1 0 1
TaqI-v2 T / CGA 50 121 12 7 32 16 15 22 17 4 111
TfiI G / AWTC 32 87 18 6 14 4 5 5 10 2 103
TseI G / CWGC 179 199 10 21 27 25 20 27 29 12 116
ملعقة شاي 45 / GTSAC 73 81 9 9 9 7 5 12 13 4 108
TspMI C / CCGGG 12 3 1 0 1 0 1 0 0 1 0
تسبري NNCASTGNN / 83 119 9 11 22 14 16 16 15 10 94
Tth111I GACN / NNGTC 12 2 0 1 1 1 1 1 2 0 1
XbaI T / CTAGA 5 1 1 0 1 0 1 1 1 1 3
XcmI CCANNNNN / NNNNTGG 14 12 0 0 1 3 0 3 4 0 8
XhoI C / TCGAG 6 1 0 0 1 0 1 1 0 0 0
XmaI C / CCGGG 12 3 1 0 1 0 1 0 0 1 0
XmnI GAANN / NNTTC 5 24 2 2 3 1 3 7 2 1 12
زراي GAC / GTC 3 10 0 1 0 0 5 1 0 1 1

& القسم نسخة HF من هذا الإنزيم متاح.

* بالنسبة إلى M13mp18 ، سيتم قطع المناطق مزدوجة الشريطة فقط.
** يشير إلى ركيزة الحمض النووي من النوع البري Hind III بها 6 مواقع تقييد على الحمض النووي لامبدا من النوع البري ، بينما يحتوي Lambda's mutant (Lambda DNA، NEB # N3011) على 7 مواقع Hind III.


شاهد الفيديو: Restriction Enzymes - Class 12 (ديسمبر 2022).